GB15193.16-2014食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)毒物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn).pdf

書(shū) 書(shū) 書(shū)中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn)犌犅 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)毒物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn) 發(fā)布 實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)發(fā) 布書(shū) 書(shū) 書(shū)犌犅 前言本標(biāo)準(zhǔn)代替 代謝試驗(yàn) 。本標(biāo)準(zhǔn)與 相比，主要修改如下： 標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)修改為“食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)毒物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)” ； 修改了范圍； 增加了術(shù)語(yǔ)和定義； 修改了試驗(yàn)?zāi)康暮驮恚?修改了儀器和試劑； 增加了試驗(yàn)方法； 刪除了生物轉(zhuǎn)化； 刪除了同位素實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)； 刪除了對(duì)生物樣品中受試物分析方法的要求； 刪除了結(jié)果判定； 增加了數(shù)據(jù)處理和結(jié)果評(píng)價(jià)； 增加了試驗(yàn)報(bào)告； 增加了試驗(yàn)的解釋。犌犅 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)毒物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了毒物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)的基本試驗(yàn)方法和技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于評(píng)價(jià)受試物的毒物動(dòng)力學(xué)過(guò)程。術(shù)語(yǔ)和定義 受試物用于測(cè)試的物品，專(zhuān)指符合毒物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)要求的供試品。 毒物動(dòng)力學(xué)受試物在體內(nèi)吸收、分布、生物轉(zhuǎn)化和排泄等過(guò)程隨時(shí)間變化的動(dòng)態(tài)特性。 吸收受試物從給予部位通常是機(jī)體的外表面或內(nèi)表面的生物膜轉(zhuǎn)運(yùn)至血循環(huán)的過(guò)程。 分布受試物通過(guò)吸收進(jìn)入血液和體液后在體內(nèi)循環(huán)和分配的過(guò)程。 代謝受試物在體內(nèi)經(jīng)酶促或非酶促反應(yīng)，結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的過(guò)程。 排泄受試物和（或）其代謝物從身體被清除過(guò)程。 生物利用度受試物被機(jī)體吸收利用的程度。 速率過(guò)程經(jīng)毒物動(dòng)力學(xué)過(guò)程受試物的量在單位時(shí)間內(nèi)的變化率，一般用單位時(shí)間過(guò)程進(jìn)行的變化量表示過(guò)程的速率。毒物動(dòng)力學(xué)的速率過(guò)程包括零級(jí)、一級(jí)和非線性種類(lèi)型。 濃度時(shí)間曲線以給予受試物后時(shí)間為橫坐標(biāo)，以受試物的血液濃度為縱坐標(biāo)所作的算術(shù)坐標(biāo)圖，反映受試物在體內(nèi)的處置狀態(tài)、受試物含量的經(jīng)時(shí)變化和速率，該曲線下的面積反映了進(jìn)入體循環(huán)的受試物含量。犌犅 表觀分布容積當(dāng)體內(nèi)受試物分布達(dá)動(dòng)態(tài)平衡后，假設(shè)體內(nèi)流體中的受試物濃度均一地與血漿中的受試物濃度一樣，這樣溶解體內(nèi)受試物量所需的流體容積就是表觀分布容積。它以體內(nèi)受試物量與血漿受試物濃度的比值表示。 機(jī)體總清除率受試物通過(guò)代謝和（或）排泄的方式從體內(nèi)清除的速度；即單位時(shí)間內(nèi)受試物從體內(nèi)清除的表觀分布容積的分?jǐn)?shù)。 消除半衰期體內(nèi)血中受試物濃度下降一半所需要的時(shí)間，它是表示受試物消除速率的參數(shù)。 峰濃度受試物給予后血中能夠達(dá)到的最大濃度。 峰時(shí)間受試物給予后達(dá)到最大血濃度的時(shí)間。試驗(yàn)?zāi)康暮驮韺?duì)一組或幾組試驗(yàn)動(dòng)物分別通過(guò)適當(dāng)?shù)耐緩揭淮位蛟谝?guī)定的時(shí)間內(nèi)多次給予受試物。然后測(cè)定體液、臟器、組織、排泄物中受試物和（或）其代謝產(chǎn)物的量或濃度的經(jīng)時(shí)變化。進(jìn)而求出有關(guān)的毒物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，探討其毒理學(xué)意義。儀器和試劑 根據(jù)試驗(yàn)需要，配備紫外分光光度計(jì)、熒光分光光度計(jì)、薄層層析儀、氣相色譜儀、高效液相色譜儀、氣質(zhì)或液質(zhì)聯(lián)用儀等設(shè)備。 放射性測(cè)量?jī)x器。 實(shí)驗(yàn)室常用儀器與試劑。試驗(yàn)方法 受試物的基本信息應(yīng)提供受試物的名稱(chēng)、號(hào)、批號(hào)、來(lái)源、純度、性狀、理化性質(zhì)、儲(chǔ)存條件及配制方法等有關(guān)資料。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 動(dòng)物種、系的選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇應(yīng)符合 和 的有關(guān)規(guī)定。盡可能選用與其他毒理學(xué)試驗(yàn)相同的種、系，并能出現(xiàn)受試物的典型毒作用的動(dòng)物。一般首選大鼠，周齡一般為周 周，但若有證犌犅 據(jù)證明其代謝途徑與人類(lèi)接近，應(yīng)選擇相應(yīng)的動(dòng)物。一般應(yīng)選用年輕、健康的成年動(dòng)物。選用嚙齒類(lèi)動(dòng)物時(shí)，試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)動(dòng)物體重的差異不應(yīng)超過(guò)平均體重的 。選擇其他動(dòng)物應(yīng)說(shuō)明其理由。 性別和數(shù)量對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的性別不作特殊規(guī)定，如毒理學(xué)研究表明毒性有明顯的性別差異時(shí)，應(yīng)設(shè)不同的性別組。一般情況下，雌性動(dòng)物應(yīng)選用未產(chǎn)過(guò)仔和非妊娠的；每一試驗(yàn)組不應(yīng)少于只動(dòng)物，在非嚙齒類(lèi)動(dòng)物的試驗(yàn)中，動(dòng)物數(shù)量可酌情減少。 動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)前動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房至少應(yīng)進(jìn)行環(huán)境適應(yīng)和檢疫觀察。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)條件、飲用水、飼料應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和有關(guān)規(guī)定（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)條件應(yīng)符合 、飲用水應(yīng)符合 、飼料應(yīng)符合 的有關(guān)規(guī)定） 。 劑量試驗(yàn)中至少需要選用兩個(gè)劑量水平，每個(gè)劑量水平應(yīng)使其受試物或受試物的代謝產(chǎn)物足以在排泄物中測(cè)出。劑量設(shè)置時(shí)應(yīng)充分考慮現(xiàn)有的毒理學(xué)資料所提供的信息。如果缺乏相應(yīng)的毒理學(xué)資料，則高劑量水平應(yīng)低于 ，或低于急性毒性劑量范圍的較低值。低劑量水平應(yīng)該是高劑量水平的一部分。如果試驗(yàn)中僅設(shè)置一個(gè)劑量水平，該劑量理論上應(yīng)使其受試物或受試物的代謝產(chǎn)物足以在排泄物中測(cè)出，并不產(chǎn)生明顯的毒性，同時(shí)應(yīng)提供合理的理由說(shuō)明不設(shè)置兩個(gè)劑量水平的原因。 試驗(yàn)步驟和觀察指標(biāo) 受試物的準(zhǔn)備受試物的純度不應(yīng)低于 。試驗(yàn)可采用“未標(biāo)記的”或“標(biāo)記”受試物。如果使用放射性同位素標(biāo)記的受試物，其放射化學(xué)純度不應(yīng)低于 ，且應(yīng)將放射性同位素標(biāo)記在受試物分子的骨架上或具有重要功能的基團(tuán)上。 受試物給予途徑當(dāng)選用溶媒或其他介質(zhì)時(shí)，受試物應(yīng)充分溶解或均勻懸浮其中，所選溶媒或介質(zhì)對(duì)受試物毒物動(dòng)力學(xué)不產(chǎn)生任何影響。一般采用灌胃的途徑，某些情況下還可以采用吞服膠囊、摻入飼料的方式給予受試物。采用靜脈注射給予受試物，應(yīng)選擇合適的注射部位和注射量給予受試物，所選溶媒或介質(zhì)應(yīng)不影響血液的完整性或血流量。 生物樣品分析方法的建立和確證 由于生物樣品一般來(lái)自全血、血清、血漿、尿液、器官或組織等，具有取樣量少、受試物濃度低、干擾物質(zhì)多以及個(gè)體差異大等特點(diǎn)，因此必須根據(jù)受試物的結(jié)構(gòu)、生物介質(zhì)和預(yù)期的濃度范圍，建立靈敏、特異、精確、可靠的生物樣品定量分析方法，并對(duì)方法進(jìn)行確證。 生物樣品分析方法有：）色譜法：氣相色譜法（） 、高效液相色譜法（） 、色譜質(zhì)譜聯(lián)用法（ 、 ， ， ） ，生物樣品分析一般首選色譜法；）免疫學(xué)方法：放射免疫分析法、酶免疫分析法、熒光免疫分析法等；犌犅 ）微生物學(xué)方法；）同位素示蹤法。對(duì)方法進(jìn)行確證一般應(yīng)進(jìn)行以下幾方面的考察：）特異性：必須證明待測(cè)物是預(yù)期的分析物，內(nèi)源性物質(zhì)和其他代謝物不得干擾樣品的測(cè)定。對(duì)于色譜法至少要分析個(gè)不同個(gè)體空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對(duì)照物質(zhì)色譜圖及給予受試物后的生物樣品色譜圖。）標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量范圍：根據(jù)待測(cè)物的濃度與響應(yīng)的相關(guān)性，用回歸分析方法（如用加權(quán)最小二乘法）獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線高低濃度范圍為定量范圍，在定量范圍內(nèi)濃度測(cè)定結(jié)果應(yīng)達(dá)到試驗(yàn)要求的精密度和準(zhǔn)確度。）精密度與準(zhǔn)確度：要求選擇個(gè)不同濃度的質(zhì)控樣品同時(shí)進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度的考察。低濃度選擇在定量下限附近，其濃度在定量下限的倍以內(nèi)；高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限；中間選一個(gè)濃度。）定量下限：定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)，要求至少能滿足測(cè)定個(gè)個(gè)消除半衰期時(shí)樣品中的受試物濃度，或峰濃度的 時(shí)的受試物濃度，其準(zhǔn)確度應(yīng)在真實(shí)濃度的 范圍內(nèi)，批內(nèi)和批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)小于 。）樣品穩(wěn)定性：根據(jù)具體情況，對(duì)含受試物的生物樣品在室溫、冰凍或凍融條件下以及不同存放時(shí)間進(jìn)行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時(shí)間。還應(yīng)注意儲(chǔ)備液的穩(wěn)定性以及樣品處理后的溶液中分析物的穩(wěn)定性。）提取回收率：應(yīng)考察高、中、低個(gè)濃度的提取回收率，其結(jié)果應(yīng)精密和可重現(xiàn)。 觀察指標(biāo) 血中受試物濃度時(shí)間曲線 受試動(dòng)物數(shù)動(dòng)物給予受試物后選擇個(gè) 個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)采血，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的動(dòng)物數(shù)不應(yīng)少于只。最好從同一動(dòng)物個(gè)體多次取樣。如由多只動(dòng)物的數(shù)據(jù)共同構(gòu)成一條血中受試物濃度時(shí)間曲線，應(yīng)相應(yīng)增加動(dòng)物數(shù)，以反映個(gè)體差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。 采樣點(diǎn)給予受試物前需要采血作為空白樣品。為獲得給予受試物后的一個(gè)完整的血中受試物濃度時(shí)間曲線，采樣時(shí)間點(diǎn)的設(shè)計(jì)應(yīng)兼顧受試物的吸收相、分布相（峰濃度附近）和消除相。整個(gè)采樣時(shí)間至少應(yīng)持續(xù)到個(gè)個(gè)消除半衰期，或持續(xù)到血中受試物濃度為峰濃度的 。 毒物動(dòng)力學(xué)參數(shù)根據(jù)試驗(yàn)中測(cè)得的各受試動(dòng)物的血中受試物濃度時(shí)間數(shù)據(jù)，求得受試物的主要毒物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。靜脈注射給予受試物，應(yīng)提供消除半衰期、表觀分布容積、曲線下面積、機(jī)體總清除率等參數(shù)值；血管外給予受試物，除提供上述參數(shù)外，尚應(yīng)提供峰濃度和峰時(shí)間等參數(shù)，以反映受試物吸收的規(guī)律。 單次給予受試物單次給予不同劑量的受試物（或其放射性同位素標(biāo)記物）后，于不同時(shí)間測(cè)定血漿或全血中受試物濃度（或總放射活性強(qiáng)度） ，提供各個(gè)受試動(dòng)物的血中受試物濃度時(shí)間數(shù)據(jù)和曲線及其平均值、標(biāo)準(zhǔn)差及其曲線；各個(gè)受試動(dòng)物的主要毒物動(dòng)力學(xué)參數(shù)及平均值、標(biāo)準(zhǔn)差。犌犅 重復(fù)多次給予受試物重復(fù)多次給予受試物，應(yīng)結(jié)合單次試驗(yàn)進(jìn)行，一般選取一個(gè)劑量多次給予受試物，至少提供次穩(wěn)態(tài)的受試物的谷濃度，達(dá)穩(wěn)態(tài)后進(jìn)行末次給予受試物試驗(yàn)。于不同時(shí)間測(cè)定血漿或全血中受試物濃度或總放射活性強(qiáng)度，與單次給予受試物相比，確定重復(fù)多次給予受試物時(shí)的毒物動(dòng)力學(xué)特征。 吸收受試物吸收的程度和速率取決于受試物的給予途徑。一般認(rèn)為靜脈注射給予受試物時(shí)母體化學(xué)物的瞬時(shí)吸收率計(jì)為 ，經(jīng)口給予受試物時(shí)應(yīng)確定達(dá)峰濃度、達(dá)峰時(shí)間和曲線下面積。分析母體化學(xué)物濃度與時(shí)間變化曲線可以確定經(jīng)口給予受試物的吸收常數(shù)。生物利用度為經(jīng)口給予受試物的曲線下面積與靜脈注射曲線下面積的比值。 分布選擇合適的受試物劑量給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后，根據(jù)受試物的理化性質(zhì)和毒性特點(diǎn)測(cè)定其在血液、心、肝、脾、肺、腎、胃腸道、生殖腺、腦、體脂、骨骼肌等組織的濃度，以了解受試物在體內(nèi)的主要分布器官組織。特別關(guān)注受試物濃度高、蓄積時(shí)間長(zhǎng)的組織和器官，以及在毒性靶器官的分布。參考血中受試物濃度時(shí)間曲線的變化趨勢(shì)，選擇至少個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別代表吸收相、分布相和消除相的受試物分布。若某組織的受試物濃度較高，應(yīng)增加觀測(cè)點(diǎn)，進(jìn)一步研究該組織中受試物消除的情況。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，至少應(yīng)有個(gè)動(dòng)物的數(shù)據(jù)。進(jìn)行組織分布試驗(yàn)，應(yīng)注意取樣的代表性和一致性。同位素標(biāo)記物的組織分布試驗(yàn)，應(yīng)提供標(biāo)記受試物的放射化學(xué)純度、標(biāo)記率（比活性） 、標(biāo)記位置、給予受試物劑量等參數(shù)；提供放射性測(cè)定所采用的詳細(xì)方法；提供采用放射性示蹤生物學(xué)試驗(yàn)的詳細(xì)過(guò)程，以及在生物樣品測(cè)定時(shí)對(duì)放射性衰變所進(jìn)行的校正方程等。在試驗(yàn)條件允許的情況下，盡可能提供給予受試物后不同時(shí)相的整體放射自顯影圖像。 代謝應(yīng)采用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)分析生物樣本，以確定受試物的代謝途徑和程度。應(yīng)闡明代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)。體外試驗(yàn)也有助于獲取受試物代謝途徑方面的信息。 排泄在排泄試驗(yàn)中，選定合適的劑量給予受試物后，按一定的時(shí)間間隔分段收集尿樣、糞便、呼出氣，測(cè)定受試物濃度，計(jì)算受試物經(jīng)此途徑排泄的速率及排泄量。必要時(shí)還應(yīng)收集膽汁檢測(cè)經(jīng)此途徑排泄的速率及排泄量。在給予受試物劑量至少 已被消除、或在上述收集到的樣品中已檢測(cè)不到受試物、或檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)達(dá) ，可停止排泄物的收集。若呼出氣中受試物和（或）代謝產(chǎn)物濃度，可停止對(duì)動(dòng)物呼出氣體的收集。記錄受試物自糞、尿、呼出氣等排泄的速率及總排泄量，提供受試物在動(dòng)物體內(nèi)的物質(zhì)平衡的數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)處理和結(jié)果評(píng)價(jià)根據(jù)具體的試驗(yàn)類(lèi)型，將數(shù)據(jù)匯總。選擇科學(xué)合理的數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，并說(shuō)明所用軟件的名稱(chēng)、版本和來(lái)源。犌犅 試驗(yàn)報(bào)告 試驗(yàn)名稱(chēng)、試驗(yàn)單位名稱(chēng)和聯(lián)系方式、報(bào)告編號(hào)。 試驗(yàn)委托單位名稱(chēng)和聯(lián)系方式、樣品受理日期。 試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束日期、試驗(yàn)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人、試驗(yàn)單位技術(shù)負(fù)責(zé)人、簽發(fā)日期。 試驗(yàn)摘要。 受試物：名稱(chēng)、批號(hào)、劑型、狀態(tài)（包括感官、性狀、包裝完整性、標(biāo)識(shí)） 、數(shù)量、前處理方法、溶媒。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：物種、品系、級(jí)別、數(shù)量、體重、性別、來(lái)源（供應(yīng)商名稱(chēng)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)） ，動(dòng)物檢疫、適應(yīng)情況，飼養(yǎng)環(huán)境（溫度、相對(duì)濕度、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施使用許可證號(hào)） ，飼料來(lái)源（供應(yīng)商名稱(chēng)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料生產(chǎn)許可證號(hào)） 。 試驗(yàn)方法：試驗(yàn)分組、每組動(dòng)物數(shù)、劑量選擇依據(jù)、受試物給予途徑及期限、觀察指標(biāo)、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。 試驗(yàn)結(jié)果：）用表格形式匯集試驗(yàn)數(shù)據(jù)，內(nèi)容應(yīng)包括不同劑量組每只動(dòng)物的編號(hào)、性別、染毒劑量、體重、給予受試物前后生物材料中受試物及其代謝產(chǎn)物的測(cè)定值（或放射活性強(qiáng)度）等原始數(shù)據(jù)；）計(jì)算各劑量組上述測(cè)定值的均值及標(biāo)準(zhǔn)差；）繪制不同劑量條件下的受試物濃