農(nóng)林學(xué)類論文-不同理化因子組合對長春花懸浮培養(yǎng)的研究 .doc

農(nóng)林學(xué)類論文-不同理化因子組合對長春花懸浮培養(yǎng)的研究摘要：實驗研究了不同種類、不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)組合和其他四種理化因子對長春花懸浮培養(yǎng)細(xì)胞生長的影響。以前的實驗結(jié)果表明：單因子以2，4-D效果最好。其中以2，4-D的最佳濃度為0.5mg/L。而本次實驗的結(jié)果表明:組合因子比單因子更有利于細(xì)胞的生長，以0.5mg/LNAA+0.5mg/L2,4-D+2.0mg/L6-BA為最佳。在其它的四種理化因子中，1/2MS、MS和B5培養(yǎng)基有利于細(xì)胞的生長。蔗糖的最佳濃度為30g/L；葡萄糖在研究范圍內(nèi)隨著濃度的增加，生長速度也在增加。最適于長春花的PH值為5.0-5.4。關(guān)鍵詞：長春花細(xì)胞懸浮培養(yǎng)植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)理化因子一、引言長春花（Catharanthusroseus(L.)G.Don）屬于夾竹桃科（Apocynaceae）長春花屬1。為多年生草本。原產(chǎn)于非洲東南部，現(xiàn)在我國各地均有栽培。長春花用途廣泛，主要含具有抗腫瘤作用的生物堿長春堿和長春新堿等2。長春花組織和細(xì)胞培養(yǎng)的研究已經(jīng)有很多年，多數(shù)應(yīng)用于大量細(xì)胞生產(chǎn)和植物的再生，以成分分析、提取為主，應(yīng)用于次生代謝產(chǎn)物的提取卻很少3。長春花的懸浮培養(yǎng)的就是植物細(xì)胞工業(yè)化的必經(jīng)步驟和固體培養(yǎng)基相比，細(xì)胞懸浮培養(yǎng)具有繁殖速度快、能大規(guī)模培養(yǎng)和提供大量均勻一致的植物細(xì)胞培養(yǎng)物的特點。然而長春花細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)技術(shù)并不完善，在國內(nèi)外很少有此類報道。懸浮細(xì)胞培養(yǎng)受到許多外界條件的影響。如激素、溫度、光照、營養(yǎng)、PH值等。本文就這方面選取了不同的植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)種類、濃度組合以及其他的四種理化因子來培養(yǎng)懸浮細(xì)胞，以便獲得細(xì)胞快速增殖的最佳培養(yǎng)條件。二、材料與方法1材料長春花（Catharanthusroseus(L.)G.Don）取自中科院武漢植物園2愈傷組織的誘導(dǎo)取春天4月份的長春花幼嫩的葉片，為誘導(dǎo)及大量繁殖，必須對外植體進行挑選4，用自來水沖洗1-2個小時，濾紙吸干，用75%的酒精侵泡30S后，用0.1%的升汞消毒8min，無菌水沖洗數(shù)遍。切成0.5cm0.5cm的小塊。接種于含0.5mg/LNAA+0.5mg/L2,4-D+2.0mg/L6-BA（本文所用的生長調(diào)節(jié)劑購于上海，配成1mg/mL的母液）、瓊脂7g/L、蔗糖30g/L的MS固體培養(yǎng)基上（PH=5.8，高壓滅菌）在光強為40mol/ms12-14h/d.溫度為252條件先誘導(dǎo)5。3愈傷組織的篩選及細(xì)胞懸浮系的建立6誘導(dǎo)出的愈傷組織接種于含50ml固體培養(yǎng)基的150ml的三角瓶中，每瓶的接種量約3g。愈傷組織每25天繼代一次。經(jīng)3-5次繼代后，選擇生長均一、質(zhì)地疏松、分散性好的愈傷組織轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基中。每150ml三角瓶中分裝40ml的液體培養(yǎng)基（同上的固體培養(yǎng)基去掉瓊脂，以下的實驗沒有特別說明的都是該種培養(yǎng)基）。每次接種量約為2g。懸浮培養(yǎng)采用旋轉(zhuǎn)式搖床，轉(zhuǎn)速為120r/min。置于光照下培養(yǎng)。4細(xì)胞干重的測定細(xì)胞懸浮周期為25天。培養(yǎng)結(jié)束后，經(jīng)減壓過濾后測其鮮重。然后收集培養(yǎng)物置于60烘箱中烘干至恒重稱其干重。換算成每天每升培養(yǎng)基增加的細(xì)胞干重毫克數(shù)，即mg/Ld.表示細(xì)胞的生長速度。實驗重復(fù)三次，取其平均值計算結(jié)果。三、結(jié)果與討論1激素組合對長春花細(xì)胞懸浮培養(yǎng)生長的效應(yīng)（1）2，4-D和6-BA組合對培養(yǎng)細(xì)胞生長的效應(yīng)表42，4-D和NAA組合對培養(yǎng)細(xì)胞生長的效應(yīng)2，4-D（0.5）+6-BAx（mg/L）0.050.10.20.51.02.05.0干重增加（mg/L）23525008820010109609558324000生長速度（mg/Ld）95201328405244234160由表4可以看出，2，4-D和6-BA組合使用比單獨一種更有利于細(xì)胞的生長。當(dāng)組合中6-BA在0.05-0.5范圍內(nèi)，細(xì)胞生長速度隨著濃度的增加而增加。在0.5mg/L2，4-D+0.5mg/L6-BA時，細(xì)胞的生長速度最快。而在6-BA在0.5-2.0mg/L時，隨著6-BA的增加，其生長速度不斷地下降。（2）2，4-D、NAA和6-BA組合對培