燈盞細辛注射液對大鼠青光眼模型的保護作用.doc

燈盞細辛注射液對大鼠青光眼模型的保護作用作者：孫暉李清春李有杰張慧李淑鳳【摘要】目的觀察燈盞細辛對視網膜的保護作用。方法采用前房灌注生理鹽水法形成150cmH2O（14.63kPa）高眼壓，誘導大鼠視網膜缺血60min，建立急性青光眼模型。模型加藥組：在青光眼模型的基礎上腹腔注射6燈盞細辛液1次，劑量150mg/kg；加藥對照組：給予腹腔注射0.5ml生理鹽水。急性高眼壓60min，分別在3、5、7d觀察視網膜節(jié)細胞數及視網膜各層厚度。結果模型加藥組節(jié)細胞數及IPL、INL厚度與實驗對照組比較均有顯著增多或增厚。結論燈盞細辛對實驗性青光眼具有保護作用?！娟P鍵詞】燈盞細辛青光眼缺血再灌注視網膜神經節(jié)細胞【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectsofHerbaErigeromtisagainstischemiareperfusioninjuryintheratretinaMethodsRetinalischemiawasinducedinSDratsbyraisingtheintraocularpressureto150cmH2O（14.63kPa）for60minTheratsintreatmentgroupwereagivenanintraperitonealinjectionofHerbaErigeromtisatadoseof150mgkg，andtheratsincontrolgroupanintraperitonealinjectionof0.9%sodiumchlorideatadoseof0.5ml.Thedensityofcellsintheretinalganglioncelllayerandthethicknessofeverylayerinretinalwhichwereinthetreatmentgroupandthecontrolgroupwereobservedat3d,5dand7dafterretinalischemia.ResultsThedatawhichwasthedensityinRGCsandthethicknessoflayersinretinalofthetreatmentgroupwaslargerthanthatofthecontrolgroup.ConclusionItsuggeststhatHerbaErigeromtismayprovideprotectionagainstretinalischemiareperfusioninjury【Keywords】HerbaErigeromtis，glaucoma，ischemiareperfusion，retina燈盞細辛（HerbaErigeromtis,Her）,性味甘溫，具有散寒解表、活血化淤、止痛消積、祛風除濕等功能1。青光眼為臨床常見眼病，主要表現為原發(fā)或繼發(fā)眼壓升高，進而損傷視網膜，影響患者視野，甚至致盲。臨床研究顯示燈盞細辛對原發(fā)性青光眼患者的視野有一定保護作用2，我們對燈盞細辛治療青光眼的機制進行了初步研究。1材料與方法1.1試劑及儀器1.1.1試劑：4水合氯醛、4中型甲醛、1%氯霉素眼藥水、1利多卡因（濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院制劑室）、6燈盞細辛注射液（云南生物谷燈盞花藥業(yè)有限公司,批號：20061103）。1.1.2儀器：光學顯微鏡（NIKON公司）、石蠟切片機（德國Nussloch）。1.2實驗動物健康、成年雄性SD大鼠（山東大學實驗動物中心提供），60只，體重200300g。將大鼠隨機分為四組：正常對照組15只，模型組15只，模型加藥組15只，加藥對照組15只。1.3高眼壓模型建立及加藥大鼠4水合氯醛（1ml/100g）腹腔麻醉，1利多卡因滴眼，將連接生理鹽水瓶輸液管的5號頭皮針刺入前房，保持輸液瓶與大鼠垂直高度150cm，此時眼內壓為14.63kPa。眼底鏡觀察可見視網膜缺血蒼白、水腫，眼頭皮針底血流阻斷，1530min后球結膜水腫蒼白，眼球變得不透明3，4。實驗過程中，動物體溫保持在3637，隨時滴加生理鹽水保持角膜濕潤。模型建立完成拔掉頭皮針，滴加1氯霉素防止感染。各組處理見表1。表1實驗分組及各組處理過程（略）1.4標本采集按預先分組在第3、5、7天斷頭處死大鼠，迅速摘除眼球，亞甲蘭標記角膜上極及視神經短端。角膜上扎一小孔，浸潤于4中型甲醛中固定24h，將固定好的眼球通過角膜上極和視神經斷端對稱剖開眼球，梯度酒精脫水，浸蠟。常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)4m切片，常規(guī)蘇木精伊紅染色。1.5顯微鏡觀察采用攝像顯微鏡觀察并照相，計數高倍視野內視網膜節(jié)細胞數目并測量視乳頭周圍1mm處視網膜各層厚度。1.6統(tǒng)計學分析實驗數據以xs表示，采用t檢驗分析結果，P<；0.05有統(tǒng)計學意義。2結果2.1視網膜神經節(jié)細胞的觀察正常對照組大鼠視網膜節(jié)細胞排列緊密整齊，細胞核均勻深染，胞核大小一致（圖1），單位視野內節(jié)細胞數見表2。模型組大鼠視網膜節(jié)細胞排列稀疏且不規(guī)則，細胞核固縮，有些出現空泡、碎裂，部分細胞核溶解，細胞核大小不一（圖2）,單位視野內節(jié)細胞數見表2，與正常對照組比較顯著減少（P<；0.05）。模型加藥組大鼠視網膜節(jié)細胞排列較整齊，有些細胞核出現固縮、碎裂，但大部分細胞核完好，細胞核大小也較一致（圖3），單位視野內節(jié)細胞數見表2。加藥對照組大鼠視網膜節(jié)細胞節(jié)細胞改變類似模型組，節(jié)細胞排列散亂、稀疏，胞核固縮、溶解，細胞核大小不一（圖4），單位視野內節(jié)細胞數見表2，與模型加藥組節(jié)細胞數比較具有顯著性差異（P<；0.05）。表2視網膜節(jié)細胞數目比較（略）注：*表示與正常對照組比較，P<；0.05；表示與加藥對照模型組比較，P<；0.052.2視網膜各層厚度及形態(tài)的觀察正常對照組大鼠視網膜各層結構完整，排列整齊；各層厚度見表3、4、5；模型組大鼠視網膜節(jié)細胞層（GCL）水腫結構松散，內叢狀層（IPL）厚度變薄且出現空泡水腫，內核層（INL）厚度變化不大，但個別細胞核固縮，外叢狀層（OPL）厚度無明顯變化，無水腫出現，外核層（ONL）厚度無變化，細胞核無固縮，排列整齊，各層厚度見表3、4、5。其中，IPL和INL厚度與正常對照組比較具有顯著性差異（P<；0.05）。加藥對照組大鼠視網膜形態(tài)及厚度變化與模型組類似，GCL水腫松散，IPL變薄且出現水腫，INL厚度變化不大，個別細胞核固縮，OPL厚度無變化；ONL厚度正常，細胞核排列整齊，各層厚度見表3、4、5；模型加藥組大鼠視網膜GCL水腫不明顯，細胞核排列較整齊，IPL厚度變化不明顯個別位置空泡水腫，INL、OPL、ONL厚度無變化，細胞核無固縮，排列整齊，各層厚度見表3、4、5。其中，IPL和INL厚度與加藥對照組比較具有顯著性差異（P<；0.05）。表3IPL厚度比較（略）注：*與正常對照組比較，P<；0.05；與加藥對照模型組比較，P<；0.05表4INL厚度比較（略）注：*與正常對照組比較，P<；0.05；與加藥對照模型組比較，P<；0.05表5ONL厚度比較（略）注：*與正常對照組比較，P<；0.05；與加藥對照模型組比較，P<；0.053討論本實驗通過建立大鼠的青光眼模型，研究了燈盞細辛對青光眼導致的視網膜損傷起怎樣的保護作用。青光眼是一種臨床常見的疾病，也是一種重要的致盲眼病。臨床及基礎研究證明青光眼是由于各種原因導致的眼內壓升高導致視網膜中央動脈缺血，引起中央動脈供血的視網膜INL、GCL、IPL等處損傷，尤其是GCL由于缺血導致的細胞凋亡，這也是青光眼致盲的主要原因。燈盞細辛在臨床廣泛用于治療青光眼，能對患者的視野起到一定的保護作用。我們的研究表明燈盞細辛可以減輕大鼠高壓眼對視網膜，特別是視網膜神經節(jié)細胞的損傷，從而對大鼠實驗性青光眼有一定的保護作用。我們認為這與燈盞細辛對細胞凋亡有一定的抑制作用有關。很多研究都證明燈盞細辛可以抑制細胞凋亡的發(fā)生。燈盞花注射液的有效成分是燈盞花素，徐光等5的研究表明，燈盞花素是在黃芩素的4位接上一個羥基，其對蛋白激酶C（PKC）有很強的抑制作用，燈盞花可防止缺血誘導的PKC的移位激活。而PKC的激活參與了缺血誘導神經元凋亡，其具體機制如下：PKC激活促進了缺血條件下神經元的鈣超載6，7；PKC可以激活PLA2和PLD，使自由基生成增加，促進了神經元的凋亡；PKC激活cfos表達參與了神經元的凋亡；PKC激活通過血管機制，加重缺血缺氧促進了神經元的凋亡。燈盞花可以防止缺血誘導的PKC激活，從而起到防止缺血誘導神經元凋亡的作用。此外，還有研究證明燈盞細辛可以降低半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3陽性表達的細胞數量8，9，起到防止缺血誘導的細胞凋亡。由此可見，燈盞細辛對于缺血誘導的細胞凋亡的抑制作用是多途徑的，它可能是一種有效的治療保護青光眼視網膜節(jié)細胞的藥物。【參考文獻】1陳新謙，金有豫新編藥物學M第14版北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：277278.2朱益華，蔣幼芹，劉忠浩，等燈盞細辛注射液對鼠實驗性高眼壓視神經軸漿運輸的影響J中華眼科雜志，2OO0，36(4)：2892903TsujikawaA，OguraY，HirosbibaN，etalRetinalischemiareperfusioninjuryattenuatedbyblockingofadhesionmoleculesofvascularendotheliumJInvestOphthalmolVisSci，1999，40(6)：118311904EttaicbeM，Fillacierk，WidmannC，etal.RiluzoleimprovesfunctionalrecoveryafterischemiaintheratretinaJInvestOphthalmolVisSci，1999，40(3)：7297365徐光，張禮萍，沈慧芬，等野黃芩甙元及其類似物對蛋白激酶C的抑制作用J上海醫(yī)科大學學報，1993，20(3)：1896盛艷梅，張藝，張靜，等Ca同位素技術用于燈盞細辛中抗鈣活性有效組分的研究J中國藥理學通報，2005，21(4)：5075087OkaMS，FrederickJM，LanderRA，etal.Adulthumanretinalcellsinculture：IdentificationofcelltypesandexpressionofdifferentiatedpropertiesJExpCellRes，1985，159(1)：1271408ChangGQ，HaoY，WongF,