分子生物學(xué)簡(jiǎn)答題全.doc

簡(jiǎn)答題6為什么利用RNAi抑制一個(gè)基因的表達(dá)較利用反義RNA技術(shù)更為徹底。答：RNAi是外源或內(nèi)源性的雙鏈RNA進(jìn)入細(xì)胞后引起與其同源的mRNA特異性降解.dsRNA進(jìn)入細(xì)胞后，在Dicer作用下，分解為2122bp的SiRNA.SiRNA結(jié)合相關(guān)酶，形成RNA介導(dǎo)的沉默復(fù)合物RISC.RISC在ATP作用下，將雙鏈SiRNA變成單鏈SiRNA,進(jìn)而成為有活性的RISC,又稱為slicer.slicer與靶mRNA結(jié)合，導(dǎo)致其斷裂，進(jìn)而導(dǎo)致其徹底降解。反義RNA是與靶mRNA互補(bǔ)的RNA，它通過與靶mRNA特異結(jié)合而抑制其翻譯表達(dá)，反義RNA是與靶mRNA是隨機(jī)碰撞并通過堿基互補(bǔ)配對(duì)，所以，mRNA不一定完全被抑制。8簡(jiǎn)述真核基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。答：（1）DNA和染色質(zhì)結(jié)構(gòu)對(duì)轉(zhuǎn)錄的調(diào)控：DNA甲基化，組蛋白對(duì)基因表達(dá)的抑制，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控作用，基因重排，染色質(zhì)的丟失，基因擴(kuò)增；（2）轉(zhuǎn)錄起始調(diào)控： 反式作用因子活性調(diào)節(jié)，包括表達(dá)調(diào)節(jié)、共價(jià)調(diào)節(jié)，配體調(diào)節(jié)等蛋白質(zhì)相互作用調(diào)節(jié)），反式作用因子與順式作用原件結(jié)合對(duì)轉(zhuǎn)錄過程進(jìn)行調(diào)控；（3）轉(zhuǎn)錄后調(diào)控：5端加帽和3端多核苷酸化調(diào)控，選擇剪接調(diào)控，mRNA運(yùn)輸調(diào)控，mRNA穩(wěn)定性調(diào)控；（4）翻譯起始的調(diào)控：阻遏蛋白的調(diào)控，對(duì)翻譯因子的調(diào)控，對(duì)AUG的調(diào)控，mRNA 5端非編碼區(qū)的調(diào)控，小分子RNA；（5）翻譯后加工調(diào)控：新生肽鏈的水解，肽鏈中氨基酸的共價(jià)修飾，信號(hào)肽調(diào)控。9簡(jiǎn)述mRNA加工過程。 答：（1）5端加帽（由加帽酶催化5端加入7-甲苷烏苷酸，形成帽子結(jié)構(gòu)m7GpppmNP-）。 （2）3端加入Poly(A)尾（A、組蛋白的成熟mRNA無需加polyA尾；B、加尾信號(hào)包 括AAUAAA和富含GU的序列；C、加尾不需模板；D剪切過程需要多種蛋白質(zhì)因子的輔助）。（3）mRNA前體的剪接（剪接加工以除去內(nèi)含子序列，并將外顯子序列連接成為成熟的有功能的mRNA分子。內(nèi)含子兩端的結(jié)構(gòu)通常是5-GUAG-3。選擇性剪接的作用機(jī)制包括；A使用不同的剪接位點(diǎn)，B選擇使用外顯子，C、反式剪接，D、使用不同的啟動(dòng)子，E、使用不同的多腺苷酸化位點(diǎn)）。（4）RNA的編輯（發(fā)生于轉(zhuǎn)錄后水平，改編mRNA序列，CU或AG，增加遺傳信息容量）。10簡(jiǎn)述生物的中心法則。答：中心法則(genetic central dogma)，是指遺傳信息從DNA傳遞給RNA，再?gòu)腞NA傳遞給蛋白質(zhì)，即完成遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯的過程。也可以從DNA傳遞給DNA，即完成DNA的復(fù)制過程。 11簡(jiǎn)述真核生物基因結(jié)構(gòu)及特點(diǎn)。答：真核細(xì)胞的基因也是由編碼區(qū)和非編碼區(qū)兩部分組成的；（1）編碼區(qū)： 外顯子能編碼蛋白質(zhì)的序列。特點(diǎn)：間隔的、不連續(xù)的。即能編碼蛋白質(zhì)的序列被不能編碼蛋白質(zhì)的序列分隔開來，成為一種斷裂的形式不能編碼蛋白質(zhì)的序。內(nèi)含子列。（2）非編碼區(qū)： 有調(diào)控作用的核苷酸序列。啟動(dòng)子是基因結(jié)構(gòu)中位于編碼區(qū)上游的核苷酸序列，是RNA聚合酶結(jié)合點(diǎn)，能準(zhǔn)確地識(shí)別轉(zhuǎn)錄的起點(diǎn)并開始轉(zhuǎn)錄，有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的作用。12簡(jiǎn)述SNP的特點(diǎn)，SNP如何發(fā)揮生物學(xué)作用的及研究SNP的意義。答：特點(diǎn)：(1)數(shù)量多，遍布基因組，分布相對(duì)平均，據(jù)統(tǒng)計(jì)，人類群體中大概有1100萬個(gè)SNP，約每300bp就有1個(gè)SNP位點(diǎn)，方便挑選位點(diǎn)。(2)雖有A/C/G/T四種核苷酸，但SNP位點(diǎn)大多是雙態(tài)，即每個(gè)位點(diǎn)在群體中只存在2種核苷酸形式，因此A/C、A/G、A/T、C/G、C/T、G/T、Indel等幾種形態(tài)，適合開展大規(guī)模、高通量、自動(dòng)分化的檢測(cè)。(3)人類基因組90%的變異形式為SNP，SNP的遺傳很穩(wěn)定每一代之間不會(huì)有太大變化。SNP的研究意義：雖然人類99%以上的DNA序列是相同的，但DNA序列的變化能對(duì)人類對(duì)疾病、環(huán)境攻擊（比如細(xì)菌、病毒、毒素和化學(xué)物質(zhì))、藥物和治療的反應(yīng)產(chǎn)生重大影響。這就使得SNP對(duì)生物醫(yī)學(xué)的研究和藥物開發(fā)、醫(yī)學(xué)診斷的發(fā)展有重要意義。SNPs可作為遺傳作圖研究中的遺傳標(biāo)記，幫助定位和鑒定功能基因。研究者相信SNP圖譜將幫助他們認(rèn)識(shí)復(fù)雜的多基因疾病，如癌癥，糖尿病，血管性疾病和某些精神性疾病。13簡(jiǎn)述miRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和生物功能。答：廣泛存在于真核生物中，是一組不編碼蛋白質(zhì)的短序列RNA，它本身不具有開放閱讀框架(ORF);通常的長(zhǎng)度為2024nt，但在3端可以有12個(gè)堿基的長(zhǎng)度變化；成熟的miRNA5端有一磷酸基團(tuán)，3端為羥基,這一特點(diǎn)使它與大多數(shù)寡核苷酸和功能RNA的降解片段區(qū)別開來；多數(shù)miRNA還具有高度保守性、時(shí)序性和組織特異性。miRNA執(zhí)行一定的生物學(xué)功能：對(duì)與其互補(bǔ)的mRNA表達(dá)水平具有調(diào)節(jié)作用；一些偏大的miRNA可能參與了基因組的重組裝（27nt）。14什么是DNA甲基化? 簡(jiǎn)要說明甲基化的檢測(cè)方法及其生物學(xué)效應(yīng)。答：胞嘧啶和甲基在甲基化酶的作用下形成5-甲基胞嘧啶的過程叫做DNA的甲基化。DNA甲基化抑制或降低轉(zhuǎn)錄水平，在基因轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)附近，有高度密集的CpG重復(fù)序列，被稱為CpG島，或HTF島。推測(cè)該序列與基因轉(zhuǎn)錄活性有關(guān)。檢測(cè)方法：酶切鑒定：Hpa只能切割未甲基化的-CCGG-，Hpa如果第二個(gè)C被甲基化了就不能切割。Msp能夠識(shí)別和切割甲基化或未甲基化-CCGG-。比較這兩種酶切割DNA產(chǎn)生的DNA片段的差異，可知DNA片段甲基化的程度與有無。限制性內(nèi)切酶Southernbloting；甲基化特異性PCR（MSP）；亞硫酸鹽變性后測(cè)序；甲基化敏感性單核苷酸引物擴(kuò)增（Ms-SnuPE）；甲基化熒光檢測(cè)；亞硫酸氫鈉變性后限制酶分析（COBRA）；差異甲基化雜交（DMN）；酶的區(qū)域性甲基化分析（ERMA）。15何為順式作用元件？請(qǐng)舉出三種真核生物基因的順式作用元件。答：影響自身基因表達(dá)活性的非編碼DNA序列，組成基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控區(qū)。例：?jiǎn)?dòng)子：轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白和RNA聚合酶的結(jié)合位點(diǎn)；增強(qiáng)子：是一個(gè)有增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄的順式作用元件，能夠提高一些真核生物啟動(dòng)子的效率，并能能在啟動(dòng)子的任何方向和任何位置(上游或下游)作用。沉默子:負(fù)性調(diào)節(jié)元件,當(dāng)其結(jié)合特意蛋白因子時(shí)，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄起阻遏作用。16以trp操縱元為例簡(jiǎn)述衰減子的調(diào)控機(jī)制。答：當(dāng)細(xì)胞中有色氨酸存在時(shí),核糖體能夠順利翻譯出整個(gè)前導(dǎo)肽而在終止密碼子處停下來。這時(shí)，核糖體占據(jù)了序列1和部分序列2，使序列2和序列3不能產(chǎn)生有效的配對(duì)，因而序列3和序列4配對(duì)產(chǎn)生終止子的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，于是實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄的終止。當(dāng)出現(xiàn)Trp饑餓時(shí)，核糖體停頓在兩個(gè)Trp密碼子上，這時(shí)，核糖體占據(jù)了序列1而留下完整的序列2以便與轉(zhuǎn)錄出的或即將轉(zhuǎn)錄出的序列3形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。這樣，當(dāng)序列4轉(zhuǎn)錄出來后仍然是單鏈狀態(tài)，即終止子不能形成，于是轉(zhuǎn)錄繼續(xù)進(jìn)行下去。23在基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)調(diào)控方式上,真核生物往往采用正控制系統(tǒng),而原核生物卻往往采用負(fù)控制系統(tǒng)，請(qǐng)簡(jiǎn)要闡明其原因。答：這兩種調(diào)控方式是長(zhǎng)期自然選擇的結(jié)果，也是生物體采用的經(jīng)濟(jì)有效的原則選擇的。原核生物基因組小，基因少而簡(jiǎn)單，生命繁殖快，多采用負(fù)控制的保險(xiǎn)機(jī)制，即使調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)失活，酶系統(tǒng)照樣合成，只不過有時(shí)浪費(fèi)一點(diǎn)罷了，絕不會(huì)使細(xì)胞因缺乏該酶系統(tǒng)而造成致命的后果。另外，采用負(fù)控制具有一開俱開，一關(guān)俱關(guān)的特點(diǎn)，減少不必要的環(huán)節(jié)；而真核生物基因組大，基因多且復(fù)雜，采用正控制具有更大的優(yōu)越性，轉(zhuǎn)錄因子相互作用缺一不可，可以保證真核生物基因表達(dá)調(diào)控的嚴(yán)謹(jǐn)性和靈活性以及經(jīng)濟(jì)性原則。24根據(jù)你的理解說明利用”酵母雙雜交系統(tǒng)”研究蛋白質(zhì)間相互作用的原理。答:真核生物的轉(zhuǎn)錄因子可以分為兩部分，BindingDomain和ActivatedDomain。BindingDomain負(fù)責(zé)結(jié)合在DNA上，ActivatedDomain負(fù)責(zé)激活轉(zhuǎn)錄。二者都是相互獨(dú)立的區(qū)域，但二者單獨(dú)時(shí)都不能有轉(zhuǎn)錄活性，必須結(jié)合在一起或相互靠近在一起才有活性。在研究蛋白質(zhì)相互作用中，將一種蛋白質(zhì)的基因連接在BindingDomain上，將另一種蛋白質(zhì)的基因結(jié)合在BindingDomain上，蛋白質(zhì)基因表達(dá)后就與轉(zhuǎn)錄因子的兩個(gè)Domain分別結(jié)合，兩個(gè)蛋白質(zhì)因相互作用而結(jié)合在一起，進(jìn)而使BindingDomain和ActivatedDomain相互靠近在一起，從而形成具有轉(zhuǎn)錄活性的轉(zhuǎn)錄因子。在欲表達(dá)的基因區(qū)域連上報(bào)告基因，通過報(bào)告基因的表達(dá)與否，就可判斷蛋白質(zhì)之間是否發(fā)生了相互作用。25舉三例RNA的研究成就及其在推動(dòng)分子生物學(xué)發(fā)展中的重要意義。答：Ribozyme：拓展了酶的概念、內(nèi)含子自我剪切、生命起源和分子進(jìn)化。Antisense-RNA：基因表達(dá)調(diào)控、基因工程。RNAi：基因表達(dá)調(diào)控、功能基因組學(xué)。26簡(jiǎn)要闡明中心法則的提出對(duì)分子生物學(xué)研究的理論意義和指導(dǎo)作用。答：中心法則體現(xiàn)了遺傳信息的唯一性、遺傳物質(zhì)的自決性、信息表達(dá)的單程性、序列轉(zhuǎn)換的共線性，為分子生物學(xué)研究提供了一個(gè)理論框架，分子生物學(xué)是一部從DNA到蛋白質(zhì)的中心法則的演繹。中心法則面臨的挑戰(zhàn)：反轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)含子、不連續(xù)轉(zhuǎn)錄、非翻譯序列、伴刀豆球蛋白A肽鏈一級(jí)結(jié)構(gòu)的重排、RNA變通性剪切、RNA編輯、以蛋白質(zhì)為模板的肽鏈合成、朊病毒的發(fā)現(xiàn)。中心法則的修正：從DNA到RNA到肽鏈不斷有新的遺傳信息的加入：DNA：重排RNA：反轉(zhuǎn)錄、不連續(xù)轉(zhuǎn)錄、多種方式剪切、編輯mRNA：跳躍翻譯、折疊肽鏈：氨基酸重排、蛋白質(zhì)內(nèi)含子剪切朊病毒復(fù)制27比較兩種mRNA的剪切方式的異同。答：Cis-splicing與Trans-splicing的比較Cis-splicingTrans-splicing以一條pre-mRNA為底物以兩條不同來源的pre-mRNA為底物在splicesome中完成在splicesome中完成組成型剪接選擇型剪接在成熟RNA的前導(dǎo)序列中拼接一個(gè)外來的35Nt的剪接前導(dǎo)序列或微小外顯子或發(fā)生在兩條pre-mRNA間的選擇型剪接LariatintronY-intron294種基因表達(dá)調(diào)控類型的區(qū)分：答：正、負(fù)調(diào)控：調(diào)節(jié)蛋白缺乏時(shí)對(duì)操縱子的影響；可誘導(dǎo)、阻遏：操縱子對(duì)調(diào)節(jié)基因表達(dá)的小分子所作出反應(yīng)的特點(diǎn)；有或無Glu調(diào)節(jié)cAMP-CAP活性的分子生物學(xué)機(jī)制：Glu代謝物抑制腺苷環(huán)化酶、促進(jìn)磷酸二酯酶調(diào)節(jié)細(xì)胞中cAMP的水平。當(dāng)缺乏Glu時(shí)，生物體內(nèi)ATP環(huán)化酶會(huì)使ATP變成cAMP，cAMP與CAP蛋白結(jié)合，進(jìn)入操縱元上CAP位點(diǎn)，此時(shí)RNA聚合酶才能進(jìn)入結(jié)合位點(diǎn)開始轉(zhuǎn)錄。如果不缺乏Glu的情況下，無法生成cAMP，也就無法形成復(fù)合物，也不能使RNA聚合酶進(jìn)入結(jié)合位點(diǎn)，開始轉(zhuǎn)錄。32何謂RNA剪接，何謂RNA編輯？答：RNA剪接：從DNA模板鏈轉(zhuǎn)錄出的最初轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中除去內(nèi)含子，并將外顯子連接起來形成一個(gè)連續(xù)的RNA分子的過程。RNA編輯(RNAediting)：RNA編輯是指在mRNA水平上改變遺傳信息的過程。RNA編輯是通過比較成熟的mRNA與相應(yīng)基因的編碼信息時(shí)發(fā)現(xiàn)的，成熟的mRNA序列中有幾種意想不到的變化，包括UC，CU；U的插入或缺失、多個(gè)G或C的插入等。33什么是正調(diào)控與負(fù)調(diào)控，試舉例說明。答：正調(diào)控系統(tǒng)和負(fù)調(diào)控系統(tǒng)是按照沒有蛋白質(zhì)存在的情況下操縱元對(duì)新加入的調(diào)節(jié)蛋白的響應(yīng)情況來定義的。在沒有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)存在時(shí)基因是表達(dá)的，加入這種調(diào)節(jié)蛋白后基因表達(dá)活性便關(guān)閉。這樣的控制系統(tǒng)就叫做負(fù)調(diào)控系統(tǒng)。如大腸桿菌色氨酸操縱子的調(diào)控。相反，如果在沒有調(diào)節(jié)蛋白存在時(shí)基因是關(guān)閉的，加入這種調(diào)節(jié)蛋白后基因活性就被開啟，這樣的控制系統(tǒng)叫做正調(diào)控系統(tǒng)。如cAMP-CAP對(duì)于乳糖操縱元的正調(diào)控。34 簡(jiǎn)述空轉(zhuǎn)反應(yīng)的形成及其結(jié)果。答：當(dāng)無負(fù)載的tRNA進(jìn)入核糖體A位以后，無法形成新的肽鍵，而ATP卻在不斷的消耗，這就是所謂的空轉(zhuǎn)反應(yīng)。細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空轉(zhuǎn)反應(yīng)時(shí)，就會(huì)發(fā)出一種報(bào)警信號(hào)，這就是鳥苷5二磷酸3二磷酸（pppGpp）。ppGpp和pppGpp能通過某種方式控制細(xì)胞的許多生理過程，以使細(xì)胞能夠適應(yīng)有限的營(yíng)養(yǎng)條件，特別是氨基酸的供應(yīng)。這些非同尋常的代謝產(chǎn)物能夠影響某些蛋白質(zhì)和酶的活性或性質(zhì)，從而設(shè)法解決細(xì)胞所碰到的問題。35簡(jiǎn)述突變熱點(diǎn)的定義及其可能的機(jī)制。答：從理論上講，DNA分子上每一個(gè)堿基都能發(fā)生突變，但實(shí)際上突變位點(diǎn)并非完全隨機(jī)分布，而是某些位點(diǎn)的突變頻率大大高于平均數(shù)，這些位點(diǎn)就稱為突變熱點(diǎn)。形成突變熱點(diǎn)的最主要的原因是5-甲基胞嘧啶的存在。5-甲基胞嘧啶和C一樣，在突變劑的作用之下，會(huì)產(chǎn)生脫氨基氧化。5-甲基胞嘧啶脫氨基化以后生成T，而T是DNA的正常組分，形成G-T的不配對(duì)狀態(tài)。形成突變熱點(diǎn)還有其他原因。在短的連續(xù)重復(fù)序列處容易發(fā)生插入或缺失突變。突變熱點(diǎn)還與突變劑有關(guān)。使用不同的突變劑時(shí)出現(xiàn)的突變熱點(diǎn)處不同。36簡(jiǎn)述同源重組的機(jī)理。答：同源重組發(fā)生在DNA同源序列之間，大腸桿菌的同源重組需RecA蛋白，以Holliday為例說明同源重組的機(jī)理：切斷：同源聯(lián)會(huì)的兩個(gè)DNA分子中任意一個(gè)出現(xiàn)單鏈切口，切口由某些DNA內(nèi)切酶產(chǎn)生。鏈置換：切口處形成的5端局部解鏈，由細(xì)胞內(nèi)類似于大腸菌聚合酶的酶系統(tǒng)利用切口處的3OH合成新鏈，而把原有的鏈逐步置換出來，使之成為游離的以5P為末端的單鏈區(qū)段，單鏈反應(yīng)可以一直進(jìn)行下去，由此產(chǎn)生的單鏈區(qū)段越來越長(zhǎng)。單鏈侵入：由置換產(chǎn)生的單鏈區(qū)段侵入到參與聯(lián)會(huì)的另一條DNA分子因局部解鏈而產(chǎn)生的單鏈中。loop切除：侵入的單鏈DNA與參與聯(lián)會(huì)的另一條DNA分子中的互補(bǔ)鏈形成堿基配對(duì)，同時(shí)把侵入單鏈的同源鏈置換出來，由此產(chǎn)生D-loop。鏈同化：loop切除中產(chǎn)生的3OH斷頭和侵入單鏈的5P由DNA連接酶共價(jià)連接。異構(gòu)化：鏈同化進(jìn)行過程中，DNA經(jīng)過一定的扭曲形成異構(gòu)體。分支遷移：兩條DNA分子之間形成的交叉可以沿DNA移動(dòng)，這一過程叫分支遷移。39請(qǐng)解釋核苷酸的C值悖論及其原因。答：最大C值（單倍體基因組的總DNA含量）；最小C值（-編碼基因信息的總DNA含量）。生物體進(jìn)化程度與最大C值不成明顯正相關(guān)；親緣關(guān)系相近的生物間最大C值相差較大；一種生物內(nèi)最大C值與最小C值相差極大。原因有：重疊基因、重復(fù)基因、間隔基因、跳躍基因、假基因。 42原核生物與真核生物基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制的相似性有哪些。答：共同的起源與共同的分子基礎(chǔ)：調(diào)控機(jī)理上：核酸分子間的互作；核酸與蛋白質(zhì)分子間的互作；蛋白質(zhì)分子間的互作。調(diào)控層次上：轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平、翻譯水平、翻譯后水平。原核生物多采用負(fù)控制：提供了一個(gè)萬一保險(xiǎn)機(jī)制，即萬一調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)失活，酶系統(tǒng)可以照樣合成，只不過有時(shí)浪費(fèi)一點(diǎn)，決不會(huì)使細(xì)胞因?yàn)槿狈υ撁赶到y(tǒng)而造成致命的后果。起初，這種酶系統(tǒng)的表達(dá)是組成型的，后來細(xì)胞中產(chǎn)生一種干預(yù)表達(dá)的機(jī)制給細(xì)胞提供了選擇優(yōu)勢(shì)，演化成現(xiàn)在的負(fù)調(diào)控系統(tǒng)。真核生物多采用正控制：靈活性：真核生物基因組大，某一種順式因子出現(xiàn)的機(jī)率高，可與多種反式因子結(jié)合。嚴(yán)謹(jǐn)性：隨機(jī)出現(xiàn)套順式因子和反式因子完全相同組合的機(jī)率小。經(jīng)濟(jì)合理有效：真核生物特異基因表達(dá)，產(chǎn)生細(xì)胞分化。以基因數(shù)量100k為例，10%基因表達(dá)，在負(fù)控制下，需要合成90k的阻遏蛋白；在正控制下，只需要停止合成90k特異反式因子。43E.coli在Trp缺乏時(shí)至少會(huì)啟動(dòng)哪3種調(diào)控機(jī)制？答：（1）可能會(huì)啟動(dòng)可誘導(dǎo)的氨基酸負(fù)調(diào)控，在缺乏氨基酸的情況下，無活性的阻遏蛋白無法與操縱子結(jié)合，因此可轉(zhuǎn)錄用于氨基酸合成酶類。（2）啟動(dòng)嚴(yán)謹(jǐn)反應(yīng)，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)缺乏時(shí)，會(huì)調(diào)節(jié)tRNA與mRNA合成，從而提高蛋白質(zhì)合成。（3）前導(dǎo)序列中的弱化效應(yīng)消除。45不依賴Rho因子的終止子為什么被稱為強(qiáng)終止子。答：不依賴于Rho因子的終止子依靠基因末端的富含GC的莖環(huán)結(jié)構(gòu)阻止RNA聚合酶的行進(jìn)，莖環(huán)結(jié)構(gòu)之后還有一段AT序列促使RNA聚合酶解離，NusA蛋白使RNA聚合酶暫停前進(jìn)，多重因素確保轉(zhuǎn)錄的終止。46病毒、原核、真核基因組的特點(diǎn)？答：（1）病毒基因組的特點(diǎn)：種類單一；單倍體基因組：每個(gè)基因組在病毒中只出現(xiàn)一次；形式多樣；大小不一；基因重疊；動(dòng)物/細(xì)菌病毒與真核/原核基因相似：內(nèi)含子；具有不規(guī)則的結(jié)構(gòu)基因；基因編碼區(qū)無間隔：通過宿主及病毒本身酶切；無帽狀結(jié)構(gòu)；結(jié)構(gòu)基因沒有翻譯起始序列。（2）原核基因組的特點(diǎn)：為一條環(huán)狀雙鏈DNA；只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；具有操縱子結(jié)構(gòu)；絕大部分為單拷貝；可表達(dá)基因約50%，大于真核生物小于病毒；基因一般是連續(xù)的，無內(nèi)含子；重復(fù)序列很少。（3）真核基因組的特點(diǎn)：真核生物基因組遠(yuǎn)大于原核生物基因組，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)龐大，具有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；基因組DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成染色體，儲(chǔ)存于細(xì)胞核內(nèi)；真核基因?yàn)閱雾樂醋?，而?xì)菌和病毒的結(jié)構(gòu)基因多為多順反子；基因組中非編碼區(qū)多于編碼區(qū)；真核基因多為不連續(xù)的斷裂基因，由外顯子和內(nèi)含子鑲嵌而成；存在大量的重復(fù)序列；功能相關(guān)的基因構(gòu)成各種基因家族；存在可移動(dòng)的遺傳因素；體細(xì)胞為雙倍體，而精子和卵子為單倍體。47乳糖操縱子的作用機(jī)制？答：（1）乳糖操縱子的組成：大腸桿菌乳糖操縱子含Z、Y、A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶，此外還有一個(gè)操縱序列O，一個(gè)啟動(dòng)子P和一個(gè)調(diào)節(jié)基因I。（2）阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)：沒有乳糖存在時(shí)，I基因編碼的阻遏蛋白結(jié)合于操縱序列O處，乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài)，不能合成分解乳糖的三種酶；有乳糖存在時(shí)，乳糖作為誘導(dǎo)物誘導(dǎo)阻遏蛋白變構(gòu)，不能結(jié)合于操縱序列，乳糖操縱子被誘導(dǎo)開放合成分解乳糖的三種酶。所以，乳糖操縱子的這種調(diào)控機(jī)制為可誘導(dǎo)的負(fù)調(diào)控。（3）CAP的正性調(diào)節(jié)：在啟動(dòng)子上游有CAP結(jié)合位點(diǎn)，當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時(shí)，cAMP濃度升高，與CAP結(jié)合，使CAP發(fā)生變構(gòu)，CAP結(jié)合于乳糖操縱子啟動(dòng)序列附近的CAP結(jié)合位點(diǎn)，激活RNA聚合酶活性，促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄，對(duì)乳糖操縱子實(shí)行正調(diào)控，加速合成分解乳糖的三種酶。（4）協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：乳糖操縱子中的I基因編碼的阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控與CAP的正調(diào)控兩種機(jī)制，互相協(xié)調(diào)、互相制約。48真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制？答：真核生物在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控主要是通過反式作用因子、順式作用元件和RNA聚合酶的相互作用來完成的，主要是反式作用因子結(jié)合順式作用元件后影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過程。（1）轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成：真核生物RNA聚合酶識(shí)別的是由通用轉(zhuǎn)錄因子與DNA形成的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物，只有當(dāng)一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到DNA上，形成有功能的啟動(dòng)子，才能被RNA聚合酶所識(shí)別并結(jié)合。轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過程為：TFD結(jié)合TATA盒；RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合TFD-DNA復(fù)合物形成一個(gè)閉合的復(fù)合物；其他轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶結(jié)合形成一個(gè)開放復(fù)合物。在這個(gè)過程中，反式作用因子的作用是：促進(jìn)或抑制TFD與TATA盒結(jié)合；促進(jìn)或抑制RNA聚合酶與TFD-DNA復(fù)合物的結(jié)合；促進(jìn)或抑制轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成。（2）反式作用因子：一般具有三個(gè)功能域（DNA識(shí)別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域和結(jié)合其他蛋白結(jié)合域）；能識(shí)別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)中的順式作用元件；對(duì)基因的表達(dá)有正性或負(fù)性調(diào)控作用。（3）轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控：反式作用因子的活性調(diào)節(jié)：表達(dá)式調(diào)節(jié)反式作用因子合成出來就具有活性；共價(jià)修飾磷酸化和去磷酸化，糖基化；配體結(jié)合許多激素受體是反式作用因子；蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)復(fù)合物的解離與形成。反式作用因子與順式作用元件的結(jié)合：反式作用因子被激活后，即可識(shí)別并結(jié)合上游啟動(dòng)子元件和增強(qiáng)子中的保守性序列，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄起調(diào)節(jié)作用。反式作用因子的作用方式成環(huán)、扭曲、滑動(dòng)、Oozing。反式作用因子的組合式調(diào)控作用：每一種反式作用因子結(jié)合順式作用元件后雖然可以發(fā)揮促進(jìn)或抑制作用，但反式作用因子對(duì)基因調(diào)控不是由單一因子完成的而是幾種因子組合發(fā)揮特定的作用。59DNA芯片的原理？答：DNA芯片技術(shù)就是一種大規(guī)模的集成的固相核酸分子雜交，以大量已知堿基序列的寡核苷酸片段為探針，檢測(cè)樣品中哪些核酸序列與其互補(bǔ)，然后通過定性定量分析得出待測(cè)樣品的基因序列及表達(dá)的信息。其方法包括芯片的制備、樣品的準(zhǔn)備、分子雜交和檢測(cè)分子。74激活蛋白（CAP）對(duì)轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控作用？答：環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMPreceptorprotein），cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）。當(dāng)大腸桿菌生長(zhǎng)在缺乏葡萄糖的培養(yǎng)基中時(shí)，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖（Lac）等啟動(dòng)子的功能。一些依賴于CRP的啟動(dòng)子缺乏一般啟動(dòng)子所具有的典型的-35區(qū)序列特征（TTGACA）。因此RNA聚合酶難以與其結(jié)合。CAP的存在（功能）：能顯著提高酶與啟動(dòng)子結(jié)合常數(shù)。主要表現(xiàn)以下二方面：CAP通過改變啟動(dòng)子的構(gòu)象以及與酶的相互作用幫助酶分子正確定向,以便與-10區(qū)結(jié)合，起到取代-35區(qū)功能的作用。CAP還能抑制RNA聚合酶與DNA中其它位點(diǎn)的結(jié)合，從而提高與其特定啟動(dòng)子結(jié)合的概率。78簡(jiǎn)述真核生物轉(zhuǎn)錄后處理的過程及其分子生物學(xué)功能答：5端加帽：保護(hù)5不被酶解；有利于mRNA通過細(xì)胞核運(yùn)輸；有一定的識(shí)別功能，被核糖體結(jié)合。3端加polyA尾：使mRNA在細(xì)胞中更穩(wěn)定；方便運(yùn)輸；與帽子一樣可形成特殊的識(shí)別位點(diǎn)。內(nèi)部甲基化：形成tRNA等產(chǎn)物。剪接：去除內(nèi)含子,可變剪接擴(kuò)充模板的編碼信息量。RNA編輯：在mRNA分子水平上對(duì)堿基的插入，丟失，修改遺傳信息。84Holliday重組模型經(jīng)過修正，現(xiàn)成為同源重組模型。簡(jiǎn)述該模型的五個(gè)特點(diǎn)。答：（1）同源配對(duì)的鏈發(fā)生斷裂，經(jīng)過部分交換并重新結(jié)合；（2）斷裂及修復(fù)產(chǎn)生交互的產(chǎn)物；（3）重組可發(fā)生在DNA的任何位置；（4）交換過程是精確的，沒有核苷酸的添加于丟失；（5）基因的轉(zhuǎn)變可造成兩個(gè)不同等位基因的不等量。104什么是增效與減效突變？答：順式作用的啟動(dòng)子等調(diào)控序列的突變不是阻礙相對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)錄單元轉(zhuǎn)錄所必需的。然而，轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)的效率可能會(huì)因此而下降，相鄰基因的轉(zhuǎn)錄會(huì)減弱，這樣的突變稱為減效突變。若改變啟動(dòng)子序列的突變能提高轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)的效率，則這樣的突變稱為增效突變。114簡(jiǎn)述核糖體的活性中心的二位點(diǎn)模型及三位點(diǎn)模型的內(nèi)容。答：（1）二位點(diǎn)模型A位：氨酰-tRNA進(jìn)入并結(jié)合的部位；P位：起始氨酰-tRNA或正在延伸的肽基-tRNA結(jié)合部位，也是無載的tRNA從核糖體上離開的部位。（2）三位點(diǎn)模型大腸桿菌上的70S核糖體上除A位和P位外，還存在第三個(gè)結(jié)合tRNA的位點(diǎn)，稱為E位，它特異地結(jié)合無負(fù)載的tRNA及無負(fù)載的tRNA最從核糖體上離開的位點(diǎn)。115簡(jiǎn)述蛋白質(zhì)生物合成過程。答：蛋白質(zhì)合成可分四個(gè)步驟，以大腸桿菌為例：（1）氨基酸的活化：游離的氨基酸必須經(jīng)過活化以獲得能量才能參與蛋白質(zhì)合成，由氨酰-tRNA合成酶催化，消耗1分子ATP，形成氨酰-tRNA。（2）肽鏈合成的起始：由起始因子參與，mRNA與30S小亞基、50S大亞基及起始甲酰甲硫氨酰-tRNA(fMet-tRNAt)形成70S起始復(fù)合物，整個(gè)過程需GTP水解提供能量。（3）肽鏈的延長(zhǎng)：起始復(fù)合物形成后肽鏈即開始延長(zhǎng)。首先氨酰-tRNA結(jié)合到核糖體的A位，然后，由肽酰轉(zhuǎn)移酶催化與P位的起始氨基酸或肽?；纬呻逆I，tRNAf或空載tRNA仍留在P位最后核糖體沿mRNA53方向移動(dòng)一個(gè)密碼子距離，A位上的延長(zhǎng)一個(gè)氨基酸單位的肽酰-tRNA轉(zhuǎn)移到P位，全部過程需延伸因子EF-Tu、EF-Ts，能量由GTP提供。（4）肽鏈合成終止，當(dāng)核糖體移至終止密碼UAA、UAG或UGA時(shí)，終止因子RF-1、RF-2識(shí)別終止密碼，并使肽酰轉(zhuǎn)移酶活性轉(zhuǎn)為水解作用，將P位肽酰-tRNA水解，釋放肽鏈，合成終止。116大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)外源基因必須具備的條件？答：（1）要求外源基因的編碼區(qū)不能含有內(nèi)含子；（2）表達(dá)的外源片段要位于大腸桿菌啟動(dòng)子的下游，并形成正確的閱讀框架；（3）轉(zhuǎn)錄出的mRNA必須有與大腸桿菌16SrRNA3，末端相匹配的SD序列，才能被有效的翻譯成蛋白質(zhì)。（4）蛋白產(chǎn)物必須穩(wěn)定，不易被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶快速降解，且對(duì)宿主無害。117解釋為什么操縱子和啟動(dòng)子是反式隱性、順式顯性的，而編碼阻礙蛋白的基因既是反式顯性又是順式顯性。答：操縱基因和啟動(dòng)子突變只影響順式基因的表達(dá)(反式隱性的)，這是因?yàn)樗鼈兪钦{(diào)控序列，僅僅調(diào)節(jié)相同DNA分子上的相鄰基因的表達(dá)。阻遏物基因編碼可以擴(kuò)散的基因產(chǎn)物，因此既能影響順式又能影響反式基因的表達(dá)。121概括細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄過程。答：轉(zhuǎn)錄是通過RNA聚合酶(RP)的作用，以一條DNA鏈為模板產(chǎn)生一條單鏈RNA的過程。步驟如下：(1)與RP全酶的結(jié)合：一個(gè)RP全酶分子與待轉(zhuǎn)錄的DNA編碼序列上游的啟動(dòng)子序列松弛地結(jié)合。(2)起始：RP往下游移動(dòng)了幾個(gè)核苷酸到達(dá)啟動(dòng)子的另一段短序列Pribnow框，緊密地與DNA結(jié)合。DNA上的啟動(dòng)子區(qū)域解鏈，RNA便從Pribnow框下游的幾個(gè)核苷酸處開始合成，通常是DNA的反義鏈作為模板。合成幾個(gè)核苷酸后，因子被釋放并被循環(huán)使用，以下的步驟不再需要因子(3)延伸：四核心酶沿著DNA模板移動(dòng)，使DNA解鏈，與DNA模板的下一堿基互補(bǔ)的核苷三磷酸聚合到鏈上。RP繼續(xù)在DNA上移動(dòng)，RNA鏈從模板鏈被釋放出來，DNA雙螺旋重新形成(4)終止：當(dāng)所有編碼序列被轉(zhuǎn)錄后，RP移到一個(gè)終止序列，即終止子。轉(zhuǎn)錄復(fù)合體解體，RP和新合成的RNA從DNA模板脫落下來。124區(qū)別可誘導(dǎo)和可阻遏的基因調(diào)控。答：在可誘導(dǎo)的系統(tǒng)中，操縱子只有在誘導(dǎo)物存在時(shí)才開放，沒有誘導(dǎo)物時(shí)阻礙物結(jié)合在操縱子上阻止結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。存在誘導(dǎo)物時(shí)，它與阻遏物結(jié)合，使之變構(gòu)不再與操縱子結(jié)合，打開操縱子。酶的誘導(dǎo)是分解途徑特有的，誘導(dǎo)物就是酶的底物或者底物的類似物。在可阻礙系統(tǒng)中操縱子被終產(chǎn)物所關(guān)閉。不存在終產(chǎn)物時(shí)，阻礙物不能結(jié)合到操縱子上，因此操縱子開放；存在終產(chǎn)物時(shí)，它結(jié)合到阻礙物上，改變后者的構(gòu)象，使其能結(jié)合到操縱子上，關(guān)閉操縱子。酶阻礙是合成代謝的特點(diǎn)。125衰減作用如何調(diào)控E.coli中色氨酸操縱子的表達(dá)?答：衰減作用根據(jù)tRNATrp的數(shù)量去調(diào)節(jié)Trp操縱子的表達(dá)，而tRNATrp的數(shù)量又取決于細(xì)胞中Trp的水平.Trp操縱子mRNA前導(dǎo)序列很長(zhǎng)，包括了編碼一個(gè)長(zhǎng)14個(gè)氨基酸的多肽所需的全部遺傳信息(包括一個(gè)AUG起始密碼和一個(gè)UGA終止密碼)。這個(gè)多肽含有兩個(gè)相鄰的Trp殘基，因此色氨酰-tRNA對(duì)前導(dǎo)肽的翻譯是必不可少的。衰減作用發(fā)生的必要條件是：(1)翻譯產(chǎn)生前導(dǎo)多肽；(2)轉(zhuǎn)錄和翻譯的偶聯(lián)。這樣，當(dāng)RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄前導(dǎo)序列的同時(shí)核糖體就緊接著結(jié)合到新生的mRNA上翻譯產(chǎn)生前導(dǎo)肽。mRNA的前導(dǎo)序列包括兩對(duì)相似的反向重復(fù)序列(圖A7.7中用1，2，3和4示)。序列2與序列1和3部分互補(bǔ)，這樣1+2或2+3或3+4或1+2和3+4都能通過堿基配對(duì)形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)。由序列3和4配對(duì)形成的莖環(huán)結(jié)構(gòu)與Trp操縱子的終止子基本相同。和終止子一樣，在其莖的3一側(cè)具有7個(gè)連續(xù)的U形成的尾巴。當(dāng)形成這種衰減子結(jié)構(gòu)時(shí)，它就能像終止子一樣使轉(zhuǎn)錄終止。注意到兩個(gè)Trp密碼位于序列1內(nèi)，而且前導(dǎo)肽的終止密碼在序列l(wèi)和2之間。這樣，如果色氨酸的量是充足的，那么，tRNATrp的含量也能夠使前導(dǎo)肽的翻譯進(jìn)行到終止密碼UGA。結(jié)合的核糖體覆蓋了l和2兩個(gè)區(qū)域，這樣1和2、2和3兩個(gè)序列就不能形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，這就使3，4兩個(gè)序列形成衰減子環(huán)并起到終止子的作用，導(dǎo)致RNA聚合酶分子脫離DNA模板。另一方面，如果色氨酸缺乏，那么存在的色氨酰-tRNA也很少，導(dǎo)致核糖體停止在兩個(gè)Trp密碼之前，這樣核糖體僅蓋住區(qū)域l，并在序列4被轉(zhuǎn)錄之前，序列2和序列3形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)。這個(gè)結(jié)構(gòu)的形成阻止了序列3與序列4形成終止子結(jié)構(gòu)。于是，出現(xiàn)通讀，切操縱子的其他部分被繼續(xù)轉(zhuǎn)錄。事實(shí)上，是mRNA上核糖體所在的位置決定mRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)和衰減作用是否發(fā)生。126表觀遺傳，及調(diào)控方式，還有蛋白質(zhì)通過哪些共價(jià)修飾調(diào)控其功能？答：表觀遺傳是指DNA序列不發(fā)生變化但基因表達(dá)卻發(fā)生了可遺傳的改變，即基因型未發(fā)生變化而表型卻發(fā)生了改變。換言之，這是一種DNA序列外的遺傳方式?；蚪M含有兩類遺傳信息：一類是傳統(tǒng)意義上的遺傳信息，即DNA序列所提供的遺傳信息；另一類是表觀遺傳學(xué)