湖庫水生態(tài)環(huán)境質量監(jiān)測技術指南.doc

湖庫水生態(tài)環(huán)境質量監(jiān)測技術指南（試行）國家水體污染控制與治理科技重大專項流域水污染防治監(jiān)控預警主題“流域水生態(tài)環(huán)境質量監(jiān)測與評價研究”課題組二零一四年六月目 錄前言11 總則21.1 編制目的21.2 適用范圍21.3 指導原則21.3.1 科學實用原則21.3.2 因地制宜原則21.3.3 循序漸進原則21.4 引用文件21.5 術語與定義31.5.1 湖泊 Lake31.5.2 水庫 Reservoir31.5.3 水生態(tài)環(huán)境質量 Water Eco-environment Quality31.5.4 生境 Habitat31.5.5 參照狀態(tài) Reference Condition31.5.6 浮游動物 Zooplankton31.5.7 浮游植物 Phytoplankton31.5.8 葉綠素 Chlorophyll31.5.9 底棲動物 Benthic Invertebrate31.5.10 豐度 Abundance41.5.11 密度Density41.5.12 生物量 Biomass41.5.13 質量保證 Quality Assurance41.5.14 質量控制 Quality Control41.6 水生態(tài)環(huán)境質量監(jiān)測要素41.6.1 要素類別41.6.2 生物類群41.7 點位布設51.7.1 一般原則51.7.2 監(jiān)測點位布設方法51.7.3 參照狀態(tài)確定方法61.7.4 采樣層次布設方法61.8 監(jiān)測頻次與時間61.8.1 監(jiān)測頻次61.8.2 監(jiān)測時間62 生境調查72.1 主要設備與儀器72.2 生境調查要素72.2.1 監(jiān)測點位基本信息72.2.2 天氣條件72.2.3 總體概況與環(huán)境壓力要素72.2.2 湖庫沿岸特征72.2.3 常規(guī)水體環(huán)境72.2.4 常規(guī)沉積環(huán)境82.3 生境狀態(tài)評價82.4 記錄83 浮游植物83.1 監(jiān)測要素和技術要求83.1.1 監(jiān)測要素83.1.2 技術要求83.2 主要設備與儀器93.2.1 野外采樣93.2.2 浮游植物計數(shù)93.2.3 葉綠素a測定93.3 試劑93.3.1 樣品固定93.3.2 葉綠素a測定93.4 野外采樣程序93.4.1 定量樣品采集93.4.2 定性樣品采集103.4.3 樣品的固定與保存103.4.4 標識與記錄103.5 實驗室分析程序103.5.1 種類鑒定及豐度測定103.5.2 葉綠素a測定124 浮游動物124.1 監(jiān)測要素和技術要求124.1.1 監(jiān)測要素124.1.2 技術要求124.2 主要設備與儀器134.2.1 野外采樣134.2.2 浮游動物計數(shù)134.3 試劑134.3.1 樣品固定134.4 野外采樣程序134.4.1 定量樣品采集134.4.2 定性樣品采集134.4.3 樣品的固定與保存134.4.4 標識與記錄134.5 實驗室分析程序144.5.1 種類鑒定及豐度測定145 大型底棲動物155.1 監(jiān)測要素和技術要求155.1.1 監(jiān)測要素155.1.2 技術要求155.2 主要設備與儀器155.2.1 野外采樣155.2.2 實驗室分析165.3 試劑165.3.1 樣品固定165.3.2 實驗室分析165.4 野外采樣程序165.4.1 樣品采集165.4.2 樣品的固定與保存175.4.3 標識與記錄175.5 實驗室分析程序185.5.1 種類鑒定及棲息密度測定185.5.2 生物量測定186 質量保證與質量控制196.1 野外質量控制程序196.1.1 樣品的采集196.1.2 樣品的運輸196.1.3 樣品的保存196.1.4 采樣記錄196.2 實驗室質量控制程序196.2.1 樣品的交接與記錄196.2.2 種類鑒定、計數(shù)206.2.3 數(shù)據(jù)記錄206.2.5 剩余樣品的處置206.2.6 資料保存20附錄21- 4 -前 言我國湖泊和水庫眾多。然而，隨著區(qū)域氣候環(huán)境變化和人類活動干擾加劇，使得湖庫萎縮和消亡嚴重、水質持續(xù)惡化、富營養(yǎng)化趨勢逐年加劇。不僅如此，水環(huán)境質量下降所引發(fā)的生態(tài)問題也開始顯現(xiàn)。近年來，湖庫生態(tài)系統(tǒng)總體處于退化狀態(tài)，魚類資源大幅下降，生物多樣性不斷減低。目前，我國湖庫的相關環(huán)境問題，已嚴重破壞生態(tài)系統(tǒng)平衡，很大程度上制約了湖庫資源的可利用性和社會發(fā)展的可持續(xù)性。因此，監(jiān)測并評價湖庫水生態(tài)環(huán)境質量已經成為我國環(huán)境保護工作的一個重要內容。為貫徹落實黨中央和國務院讓江湖湖泊休養(yǎng)生息的要求，加強流域生態(tài)環(huán)境保護，維護流域生態(tài)系統(tǒng)的健康，將環(huán)境保護部關于開展流域生態(tài)健康評估試點工作的通知（環(huán)辦函20121163 號）任務的成果進一步落實并推廣，中國環(huán)境監(jiān)測總站并編制了湖庫水生態(tài)環(huán)境質量監(jiān)測技術指南（以下簡稱“指南”），以指導我國湖庫水生態(tài)環(huán)境質量的評估工作?！爸改稀敝幸?guī)定了湖庫水生態(tài)質量監(jiān)測開展過程中的各項基本原則、技術要求以及實施方法，包括監(jiān)測目的、監(jiān)測內容、分級監(jiān)測、監(jiān)測方法及類群的選擇、點位布設、監(jiān)測頻率和時間的確定、采樣方法的選擇、野外采樣、實驗室分析及資料匯總等。本指南由中國環(huán)境監(jiān)測總站提出。本指南由“流域水生態(tài)環(huán)境質量監(jiān)測與評價研究”課題組負責起草。本指南由中國環(huán)境監(jiān)測總站負責解釋。湖庫水生態(tài)環(huán)境質量監(jiān)測技術指南（試行）1 總則1.1 編制目的根據(jù)中共中央關于全面深化改革若干重大問題的決定中“加快生態(tài)文明制度建設”“五位一體”的要求，為落實國家環(huán)境保護“十二五”科技發(fā)展規(guī)劃、國家環(huán)境監(jiān)測十二五規(guī)劃，加快水生生物監(jiān)測工作，推進我國水環(huán)境質量綜合評價的進程，編制湖庫水生態(tài)環(huán)境質量監(jiān)測技術指南（試行）。1.2 適用范圍本指南適用于湖泊及水庫的水生態(tài)環(huán)境質量監(jiān)測。“指南”中規(guī)定了湖庫水生態(tài)質量監(jiān)測開展過程中的各項基本原則、技術要求以及實施方法，包括監(jiān)測目的、監(jiān)測內容、分級監(jiān)測、監(jiān)測方法及類群的選擇、點位布設、監(jiān)測頻率和時間的確定、采樣方法的選擇、野外采樣、實驗室分析等。1.3 指導原則1.3.1 科學實用原則結合湖庫生態(tài)環(huán)境實際情況，遵循水生生物類群棲息及生存規(guī)律，確保監(jiān)測結論客觀反映水生態(tài)環(huán)境質量，為水生態(tài)質量綜合評價提供科學依據(jù)。1.3.2 因地制宜原則充分考慮水域環(huán)境的自然地理條件、生物類群的時間變化特點、工作目的及人力、費用投入，選擇監(jiān)測類群、監(jiān)測頻次和時間、監(jiān)測點位、采樣工具及采樣方法。1.3.3 循序漸進原則指南遵從先易后難、循序漸進原則，既可以為基礎薄弱的從業(yè)人員提供技術指導，也可以為經驗豐富的專業(yè)技術人員提供借鑒。1.4 引用文件HJ/T 52-1999 水質 湖流采樣技術指導HJ/T 91-2002 地表水和污水監(jiān)測技術規(guī)范HJ 493-2009 水質采樣 樣品的保存和管理技術規(guī)定HJ 494-2009 水質 采樣技術指導HJ 495-2009 水質 采樣方案設計技術規(guī)定1.5 術語與定義下列術語和定義適用于本指南。1.5.1 湖泊 Lake陸地上洼地積水形成的水域寬闊、水量交換相對緩慢的水體。1.5.2 水庫 Reservoir 在湖道、山谷、低洼地有水源或可從另一湖道引入水源的地方修建擋水壩或堤堰，形成的蓄水場所；或在有隔水條件的地下透水層修建截水墻，形成的地下蓄水場所。1.5.3 水生態(tài)環(huán)境質量 Water Eco-environment Quality以生態(tài)學理論為基礎，在特定的時間和空間范圍內，水體不同尺度生態(tài)系統(tǒng)的組成要素總的的性質及變化狀態(tài)。1.5.4 生境 Habitat又稱棲息地，指生物的個體、種群或群落生活地域的環(huán)境，包括必需的生存條件和其他對生物起作用的生態(tài)因素。1.5.5 參照狀態(tài) Reference Condition代表水域內未受人為干擾或所受人為干擾較小的最優(yōu)生物狀態(tài)。1.5.6 浮游動物 Zooplankton 在水中營浮游生活的動物類群。它們完全沒有游泳能力，或游泳能力微弱，不能作遠距離的移動，也不足以抵抗水的流動力。淡水浮游動物主要包括原生動物、輪蟲、枝角類、橈足類等類群。1.5.7 浮游植物 Phytoplankton水中營浮游生活的藻類，屬于微藻類，廣泛存在于河流、湖泊和海洋中。淡水浮游藻類主要包括藍藻、綠藻、硅藻、裸藻、甲藻、金藻、黃藻和隱藻八個類群。1.5.8 葉綠素 Chlorophyll 自養(yǎng)植物細胞中一類很重要的色素，是植物進行光合作用時吸收和傳遞光能的主要物質。葉綠素a（Chla）是其中的主要色素。1.5.9 底棲動物 Benthic Invertebrate 指生活史的全部或大部分時間生活于水體底部的水生動物類群，主要包括水棲寡毛類、軟體動物和水生昆蟲幼蟲等。為了研究方便，將不能通過500m孔徑篩網(wǎng)的底棲動物稱為大型底棲動物，將能通過500m孔徑篩網(wǎng)但不能通過42m孔徑篩網(wǎng)的底棲動物稱為小型底棲動物，將能通過42m孔徑篩網(wǎng)的底棲動物稱為微型底棲動物。1.5.10 豐度 Abundance一個物種在一定研究范圍內的數(shù)量（如個體數(shù)量或生物量），通常與密度相通用。1.5.11 密度Density取樣單位的平均豐度（=總體個數(shù)/樣方數(shù)）或者是單位面（體）積上的豐度。1.5.12 生物量 Biomass某一時間單位面積或體積棲息地內某個種群、類群或群落內生物體的個體數(shù)、重量或含能量。1.5.13 質量保證 Quality Assurance湖庫水生生物監(jiān)測的質量保證是指整個生物監(jiān)測過程的全面質量管理，其目的是保證調查數(shù)據(jù)準確可靠，包括從點位布設、現(xiàn)場調查、樣品采集、貯存與運輸、實驗室樣品分析、數(shù)據(jù)處理全過程的質量保證。1.5.14 質量控制 Quality Control質量控制是為達到調查質量要求所采取的一切技術活動，是調查過程的控制方法，是質量保證的一部分。1.6 水生態(tài)環(huán)境質量監(jiān)測要素1.6.1 要素類別主要包括：湖庫水文氣象基本參數(shù)湖庫生境狀態(tài)描述水體、沉積物重要理化參數(shù)生物參數(shù)1.6.2 生物類群主要包括：浮游植物浮游動物大型底棲動物應當根據(jù)特定的監(jiān)測目的，充分考慮每個類群的特點、優(yōu)勢、生命周期，結合區(qū)域的環(huán)境特點，選擇適合的水生生物類群。比如，較為短期的環(huán)境監(jiān)測可選用浮游植物、浮游動物，較為長期的環(huán)境監(jiān)測可選用大型底棲動物；監(jiān)測化學水質變化（尤其富營養(yǎng)化）可選用浮游植物、浮游動物，評價物理生境退化則可選用大型底棲動物。結合不同生物類群的監(jiān)測結果，可以綜合、全面地反映環(huán)境狀態(tài)，但是考慮到現(xiàn)場的實際采樣條件以及人員、儀器的配備情況，可以在充分達到既定監(jiān)測目的的前提下對監(jiān)測類群酌情增減。比如，水深超過7m的湖庫或者有消落帶存在的水庫（如，三峽水庫），可放棄采集大型底棲動物。1.7 點位布設1.7.1 一般原則點位布設，取決于監(jiān)測目的以及所用生物監(jiān)測技術的特殊要求，需遵從以下原則：（1）連續(xù)性原則：盡可能沿用歷史觀測點位；生物監(jiān)測點位應與水文測量、水質理化指標監(jiān)測點位相同，盡可能獲取足夠信息，用于解釋觀測到的生態(tài)效應；（2）代表性原則：在監(jiān)測點位采集的樣品，需對研究水域的單項或多項指標具有較好的代表性；如果監(jiān)測的目的是建立大范圍、全面的流域生物數(shù)據(jù)網(wǎng)絡，點位需覆蓋整個流域范圍；如果監(jiān)測目的是客觀評估點源污染的影響，則需在一定范圍內進行加密監(jiān)測；（3）實用性原則：在保證達到必要的精度和樣本量的前提下，監(jiān)測點位應盡量少，要兼顧技術指標和費用投入。1.7.2 監(jiān)測點位布設方法可采用點位與斷面結合的方法，設置湖庫水生態(tài)環(huán)境質量監(jiān)測點位。具體方法如下：（1）針對某一特定問題的專項調查，一般采用目標設計方案，或稱“特定位點”設計方案，基于已知的問題或事件選擇監(jiān)測點位。通常，除了目標位點或范圍，分別在其上、下游100m至1000m處各設置至少3個監(jiān)測點位或斷面。（2）湖庫或區(qū)域的基線調查及環(huán)境變化趨勢評估，一般采用隨機選擇方案，盡量均勻地在監(jiān)測范圍內設置點位，以便為整個區(qū)域的整體環(huán)境提供精確的環(huán)境信息。根據(jù)監(jiān)測任務目標、湖庫面積大小以及人員、費用配備情況，確定監(jiān)測點位數(shù)量。區(qū)域性的大范圍監(jiān)測，涉及多個湖庫，可根據(jù)每個湖庫的面積設置310個點位；特定湖庫的監(jiān)測，則至少設置10個點位。點位布設應兼顧湖濱和湖心，如無明顯功能分區(qū)，可采用網(wǎng)格法均勻布設。河道型或狹長型湖庫，可參考河流的點位布設方法，以斷面的方式設置采樣點位。注意事項選擇點位時，應注意以下問題：（1）應在湖庫的主要出入口、中心區(qū)、滯流區(qū)、飲用水源地、魚類產卵區(qū)、游覽區(qū)等設置相應的點位；（2）如采用斷面法設置點位，斷面應與附近水流方向垂直；（3）峽谷型水庫，應在水庫上游、中游、近壩區(qū)及庫層與主要庫灣回水區(qū)布設斷面。1.7.3 參照狀態(tài)確定方法參照狀態(tài)的確定是用于比較并檢測環(huán)境損傷的基礎，是進行生態(tài)評價的必要前提。根據(jù)評價的目的，可以采用以下兩種方法來確定參照狀態(tài)。（1）特定點位參照狀態(tài)：是指將點源排放的“上游”作為參照狀態(tài)。該類型參照狀態(tài)減少了源于生境差異的復雜情況，排除其他點源和非點源污染造成的損害，可有助于診斷特定排放與損害之間的因果關系，并提高精確度。但是，該類型參照狀態(tài)的有效性較為有限，不適合廣域（流域及其以上范圍）的監(jiān)測或評價。（2）生態(tài)區(qū)參照狀態(tài)：是指選擇相對均質的區(qū)域內、未受干擾（接近自然狀態(tài)）的點位以及生境類型作為參照狀態(tài)。相對于特定點位的參照狀態(tài)，生態(tài)區(qū)參照狀態(tài)更適用于水域或流域范圍的趨勢性監(jiān)測，評價資源利用損害或影響，并制定相應的水質標準及監(jiān)測策略。注意事項：人類活動比較頻繁的地區(qū)，很難找到沒有受到干擾的點位，尤其是受到較大人為改變的系統(tǒng)，通常找不到合適的參照狀態(tài)。這些情況下，可以借助歷史數(shù)據(jù)或簡單的生態(tài)模型確立參照狀態(tài)，也可以根據(jù)現(xiàn)有的最佳狀態(tài)以及環(huán)境治理目標作為參照狀態(tài)。1.7.4 采樣層次布設方法采集浮游植物、浮游動物樣品時，需根據(jù)采樣點位的水深設置采樣層次。水深2m時，不分層，在表層下0.5m采集；水深為25m時，分別在表層下0.5m、底層上0.5m各采集一次；水深5m時，則在表層下0.5m處、中層以及底層上0.5m處各采集一次。另外，水深小于0.5m時，在1/2水深處采集；水體封凍時，在冰下水深0.5m處采集。1.8 監(jiān)測頻次與時間1.8.1 監(jiān)測頻次充分考慮水域環(huán)境條件、生物類群的時間變化特點、調查目的及人力、費用投入，確定調查頻次和調查時間。大范圍的湖流或流域環(huán)境基線調查，及長期的水質監(jiān)測，第一年每季調查一次，之后可每年一次；常規(guī)監(jiān)測每季調查一次；受季節(jié)性影響顯著水體的變化趨勢評價，通常應每月（至少每季）調查一次；專用站的采樣頻次與時間視具體要求而定。事故性污染物的監(jiān)測頻率必須考慮污染物效力的嚴重程度及持續(xù)時間，各類監(jiān)測類群的生命周期及經過采樣后的恢復能力也必須予以考慮。1.8.2 監(jiān)測時間一年一次的調查，一般選擇春季或秋季；季節(jié)性調查，一般選擇春、夏、秋三季。監(jiān)測時間的確定，既要考慮各項監(jiān)測指標的變化規(guī)律，又要兼顧實際情況。需要注意的是：（1）若進行逐季或逐月調查，各季或各月調查的時間間隔應基本相同；（2）同一湖泊（水庫）應力求水質、水量及時間同步采樣；（3）考慮到浮游生物的日變化，監(jiān)測時間盡量選擇在一天的相近時間，比如上午的810時，如果無法做到，則需記錄下每次實際的監(jiān)測時間。2 生境調查2.1 主要設備與儀器（1）全球定位系統(tǒng)（GPS）（2）便攜式水質分析儀（3）照相機（4）標尺2.2 生境調查要素2.2.1 監(jiān)測點位基本信息記錄湖泊（水庫）名稱、調查日期和時間，對監(jiān)測點位進行編號并確定其經緯度。2.2.2 天氣條件記錄調查當天和近期的天氣條件。2.2.3 總體概況與環(huán)境壓力要素（1）流域面積：匯入湖庫的來水總面積，湖庫流域面積與湖庫面積的比率直接影響沉積物和營養(yǎng)鹽的沉積和停留時間。（2）土地利用：注明該水域主要的土地利用類型，以及其他非主流、但可能影響水質的土地利用類型?？煽紤]采用土地利用圖精確標注該信息。（3）非點源污染：注明該水域分散的農業(yè)及城區(qū)排放。其他可能影響水質的危害因子包括養(yǎng)殖場、人工濕地、化糞池系統(tǒng)、礦井滲漏等。2.2.2 湖庫沿岸特征（1）林冠蓋度：注明開闊區(qū)與覆蓋區(qū)的大體比例，可用密度計代替肉眼估測。（2）沿岸侵蝕：注明調查區(qū)域沿岸的人類干擾和土地利用狀況，估測湖庫沿岸受侵蝕程度。（3）沿岸組成：注明調查區(qū)域沿岸的組成成分類型，估測湖庫沿岸的穩(wěn)定程度。2.2.3 常規(guī)水體環(huán)境（1）溫度、電導率、pH、渾濁度、溶解氧、透明度、水深：采用經過校準的便攜式水質監(jiān)測儀器，測量并記錄每項水質參數(shù)表征值，注明使用的儀器類型和數(shù)量單位。（2）水體氣味：注明調查區(qū)域內湖水的相關氣味描述。（3）表層油污：描述水體表層的油污量。（4）渾濁度：若未直接測量渾濁度，根據(jù)觀察，描述湖水懸浮物數(shù)量。2.2.4 常規(guī)沉積環(huán)境（1）沉積物氣味：注明調查區(qū)域內沉積物的相關氣味描述。（2）沉積物油污：描述調查區(qū)域內沉積物的油污量。（3）沉積物組成：觀察調查區(qū)域內的沉積物組成成分；同時，注明陷入沉積物的巖石底部是否為黑色（通常指示低溶氧或厭氧環(huán)境）。2.3 生境狀態(tài)評價在監(jiān)測點位隨機選擇100m湖岸，通過目測，對評價參數(shù)進行評分。評價參數(shù)由10個指標構成，包括湖岸組成、湖濱帶底質、湖岸穩(wěn)定性、水量情況、湖岸形態(tài)、湖岸植被、大型水生植物、水質狀況、人類活動強度、土地利用類型，評分范圍為020（最高值）。將分數(shù)累加，得到最終的生境評分。為確保評價程序的一致性，評分時參照評分表（附表2）中所描述的物理參數(shù)及相應標準。進行生境狀態(tài)評價時，應注意以下問題：（1）近距離觀察生境特征，以便充分評價；（2）避免干擾采樣生境；（3）至少由2人共同完成生境狀態(tài)評價；（4）生境評價僅限于湖濱點位，湖心點位暫不考慮。2.4 記錄填寫湖庫生境調查數(shù)據(jù)表（附表1）和湖庫生境評分表（附表2）。3 浮游植物3.1 監(jiān)測要素和技術要求3.1.1 監(jiān)測要素主要包括浮游植物種類組成、相對豐度、葉綠素a。3.1.2 技術要求（1）采水層次：詳見1.7.4。（2）采樣時間：詳見1.8.2。（3）種類鑒定、計數(shù)：盡量鑒定到種，至少鑒定到屬，常見種必須給出種名，按種計數(shù)。（4）測定結果：浮游植物豐度的測定結果用ind/L表示，葉綠素a的測定結果用g/L表示。3.2 主要設備與儀器3.2.1 野外采樣（1）25號浮游生物網(wǎng)：規(guī)格為200目，篩絹孔徑孔徑為0.064mm。（2）豎式采水器（附圖1）（3）采樣船（4）冷藏箱3.2.2 浮游植物計數(shù)（1）筒形分液漏斗（2）生物顯微鏡（3）浮游生物計數(shù)框（0.1mL）（附圖2-a）3.2.3 葉綠素a測定（1）抽濾裝置（2）濾膜（截留效率相當于0.7m的玻璃纖維濾膜或其他濾膜）（3）研缽或勻漿器（4）具塞離心管（5）離心機（6）分光光度計或熒光光度計3.3 試劑3.3.1 樣品固定5%魯哥氏液，或5%甲醛溶液3.3.2 葉綠素a測定（1）90%丙酮（CH3COCH3）溶液或90%乙醇（C2H5OH）溶液（2）1mol/L鹽酸（HCl）溶液（3）標準葉綠素a溶液（1mg/L）（熒光分光光度法）3.4 野外采樣程序3.4.1 定量樣品采集使用豎式采水器進行定量采集1L水樣。水深2m時，不分層，在表層下0.5m采集；水深為25m時，分別在表層下0.5m、底層上0.5m各采集一次；水深5m時，則在表層下0.5m處、中層以及底層上0.5m處各采集一次。貧營養(yǎng)狀態(tài)水體中可酌情增加采樣體積。3.4.2 定性樣品采集（1）浮游植物定性樣品的采集應在定量樣品采集結束后進行。用國際標準的25號浮游生物網(wǎng)，在選定的采樣點于水面下0.5m深處以每秒2030cm的速度作“”形循環(huán)緩慢拖動，拖動時間至少5分鐘，以此來定性采集浮游植物。遇較大水體時，可把浮游生物網(wǎng)拴在船尾，以慢速拖拽，時間至少為10分鐘。（2）水樣采集完畢，將網(wǎng)從水中提出，待水濾去，輕輕打開集中杯的活栓，使水樣流入樣品瓶中。3.4.3 樣品的固定與保存（1）固定：樣品中加入5%魯哥氏液或5%甲醛溶液進行固定；如欲分析樣品中的葉綠素a，則不對樣品作防腐處理。（2）保存：將樣品帶回實驗室，常溫保存；確認樣品按正確方法裝載，使樣品不致泄漏。保存時，每隔幾周檢查防腐劑，必要時進行添加，直至完成種類鑒定。（注意：葉綠素樣品需放入冷凍箱（冷藏、黑暗）帶回實驗室，保存于黑暗處，直至處理。）3.4.4 標識與記錄（1）標識：將永久性標簽放于樣品瓶內，附以下信息：采樣地點、點位編號、日期、采集人姓名、固定液類型（注意：魯哥氏液或其他碘固定液會使紙質標簽變黑）。同時，在樣品瓶外側標注采樣地點、點位編號、日期與樣品類型。（2）記錄：在野外記錄本或浮游植物現(xiàn)場采樣記錄表（附表3）中記錄下湖庫名稱、采樣位置、點位編碼、采樣日期、采集人姓名、采樣方法及相關的生態(tài)信息。采樣完成后，在浮游植物樣品登記表（附表4）中記錄下樣品信息，方便核對。3.5 實驗室分析程序3.5.1 種類鑒定及豐度測定3.5.1.1 定性分析（1）前處理：定性樣品一般不做沉淀、濃縮，直接進行種類鑒定和計數(shù)。（2）種類鑒定、計數(shù)：在生物顯微鏡下，將浮游植物鑒定至種或屬水平，并分別對各個種類的細胞或細胞單位進行計數(shù)。（注：定性分析樣品僅能粗略分析其藻類豐度，精確的藻類豐度分析參考“3.5.1.2 定量分析”。）種類鑒定參考書目（建議）胡鴻鈞, 魏印心. 中國淡水藻類系統(tǒng)、分類及生態(tài)M. 科學出版社, 2006.（3）記錄：在浮游植物計數(shù)記錄表（附表5）上方部分填寫樣品相關信息，記錄下種名、細胞或細胞單位數(shù)量及相應的藻類豐度，并畫出重要標本的草圖。3.5.1.2 定量分析（1）前處理：在筒形分液漏斗中進行樣品的沉淀、濃縮，濃縮體積可參考透明度來確定（表1）。藻類懸浮液的密度為一個視野1020個細胞時，適于鑒定和計數(shù)。將濃縮樣品充分搖晃均勻后，取0.1L置于浮游生物計數(shù)框中鑒定計數(shù)。表1 依透明度確定水樣濃縮體積透明度（cm）1L 水樣濃縮后的水量（mL）10030505010010050305050010020301000（不濃縮）201000（稀釋）（2）種類鑒定、計數(shù)：在生物顯微鏡下，將浮游植物鑒定至種或屬水平。每個樣品至少重復抽樣2次，對每個種類的細胞或細胞單位進行計數(shù)。（建議種類鑒定參考書目同上）為減少工作量，每次抽樣，一般不對整個計數(shù)框內的浮游植物進行全部計數(shù)，只需選取其中一部分樣品計數(shù)。選取過程是一個次級抽樣過程，要考慮到抽樣的大小和代表性，常用行格法(“水和廢水監(jiān)測分析方法（第四版）”)、改良行格法、視野法。 行格法：每次抽樣對計數(shù)框上的第二、五、八行共30個小方格進行計數(shù)，現(xiàn)已較少采用。 改良行格法：對計數(shù)框中的樣品按照對角線的格進行計數(shù)，每取0.1mL樣品計數(shù)5或10個小格，每次抽樣可重復取樣，共計數(shù)30個小格。 視野法：計數(shù)的視野數(shù)目應根據(jù)樣品中浮游植物數(shù)量的多少來確定。每次抽樣一般計數(shù)100300個視野，使浮游植物計數(shù)值至少在300個以上，可以先計數(shù)100個視野。如計數(shù)值太少，再增加100個，以此類推。為了使計數(shù)的視野在計數(shù)框內均勻分布，可以利用計數(shù)框上的方格或顯微鏡機械移動臺上的標尺刻度進行輔助。計數(shù)面積可以根據(jù)顯微鏡的目鏡視野來進行計算，用臺微尺量得在一定放大倍數(shù)下的視野直徑，或由所用目鏡的視場直徑除以物鏡放大率求得視野直徑，然后按圓面積計算公式（r2）求得視野面積。注意事項：失去色素的藻類細胞和殘體不予以計數(shù)，未完成細胞分裂的按一個細胞計。若2次計數(shù)結果相差超過10%，則增加1次重復抽樣。（3）藻類豐度換算：式中，N浮游植物豐度，ind/L；A計數(shù)框面積，mm2Ac計數(shù)面積，mm2V0水樣濃縮前體積，L；Vs水樣濃縮后體積，mL；Va計數(shù)框容積，mL；n浮游植物計數(shù)個數(shù)。（4）記錄：在浮游植物計數(shù)記錄表（附表5）上方部分填寫樣品相關信息，記錄下種名、細胞或細胞單位數(shù)量及相應的藻類豐度。3.5.2 葉綠素a測定方法步驟參考“水和廢水監(jiān)測分析方法（第四版）”。4 浮游動物4.1 監(jiān)測要素和技術要求4.1.1 監(jiān)測要素主要包括浮游動物的種類組成、相對豐度。4.1.2 技術要求（1）采水層次與采水體積：采水層次同浮游植物采水方法（3.1.2），采水體積為1050L。（2）采樣時間：同浮游植物采樣時間（3.1.2）。（3）種類鑒定、計數(shù)：盡量鑒定到種，至少鑒定到屬，常見種必須給出種名，按種計數(shù)。（4）測定結果：浮游動物豐度的測定結果用ind/L表示。4.2 主要設備與儀器4.2.1 野外采樣（1）25號浮游生物網(wǎng)：規(guī)格為200目，篩絹孔徑為0.064mm。（2）豎式采水器4.2.2 浮游動物計數(shù)（1）生物顯微鏡/體視顯微鏡（2）浮游生物計數(shù)框（0.1mL、1mL、5mL）（附圖2）4.3 試劑4.3.1 樣品固定5%甲醛溶液4.4 野外采樣程序4.4.1 定量樣品采集（1）使用豎式采水器進行定量采集，采水層次同浮游植物。小型浮游動物（原生動物、輪蟲以及未成熟的微小甲殼動物）采水樣1L；大型浮游動物（成熟的甲殼動物）采水樣1050L。（2）小型浮游動物水樣，可直接裝入樣品瓶；大型浮游動物水樣，用25號浮游生物網(wǎng)將水樣過濾后，轉移至樣品瓶中，并用清水沖洗浮游生物網(wǎng)，將所得過濾物并入樣品瓶中。4.4.2 定性樣品采集浮游動物定性樣品的采集應在定量樣品采集結束后進行，使用25號浮游生物網(wǎng)，方法同浮游植物定性樣品采集方法（3.4.2）。值得注意的是，定性網(wǎng)（即，采集定性樣品所使用的浮游生物網(wǎng)，下同）與過濾網(wǎng)（即，過濾定量樣品所使用的浮游生物網(wǎng)，下同）應分別使用不同的網(wǎng)，并防止混用。4.4.3 樣品的固定與保存（1）固定：樣品中加入5%甲醛溶液進行固定。（2）保存：將樣品帶回實驗室，常溫保存。確認樣品按正確方法裝載，使樣品不致泄漏。保存時，每隔幾周檢查固定液，必要時進行添加，直至樣品分析。4.4.4 標識與記錄（1）標識：將永久性標簽放于樣品瓶內，附以下信息：采樣地點、點位編號、日期、采集人姓名、固定液類型。同時，在樣品瓶外側標注采樣地點、點位編號、日期與樣品類型。（2）記錄：在野外記錄本或浮游動物現(xiàn)場采樣記錄表（附表6）中記錄下湖庫名稱、采樣位置、點位編碼、采樣日期、采集人姓名、采樣方法及相關的生態(tài)信息。采樣完成后，在浮游動物樣品登記表（附表7）中記錄下樣品信息，方便核對。4.5 實驗室分析程序4.5.1 種類鑒定及豐度測定（1）前處理 沉淀法：適用于原生動物、輪蟲及無節(jié)幼蟲，操作方法同浮游植物定量樣品的沉淀、濃縮方法。原生動物、輪蟲及無節(jié)幼蟲的計數(shù)可與浮游植物的計數(shù)合用一個樣品。 過濾法：適用于枝角類和橈足類等個體較大、密度較低的甲殼動物。一般采用25號浮游生物網(wǎng)進行過濾，但避免過濾網(wǎng)與定性網(wǎng)混淆，此步驟亦可在野外采樣時完成。（注意：經過25號浮游生物網(wǎng)過濾的水樣，不能作為計數(shù)原生動物、輪蟲及無節(jié)幼蟲的定量樣品。）（2）種類鑒定將濃縮樣品徹底混勻后，吸入浮游生物計數(shù)框。在顯微鏡下，將樣品進行鑒定至種或屬。種類鑒定參考書目（建議）王家楫. 中國淡水輪蟲志M. 科學出版社, 1952.蔣燮治, 堵南山. 中國動物志（節(jié)肢動物門 甲殼綱 淡水枝角類）M. 科學出版社, 1979.沈嘉瑞等. 中國動物志（節(jié)肢動物門 甲殼綱 淡水橈足類）M. 科學出版社, 1979.沈韞芬等. 微型生物監(jiān)測新技術M. 中國建筑工業(yè)出版社, 1990.（3）計數(shù) 原生動物：準確吸取0.1mL樣品，置于0.1mL浮游生物計數(shù)框內，在生物顯微鏡下全片計數(shù)。定性樣品至少重復抽樣5次，定量樣品至少重復抽樣2次。 輪蟲：準確吸取1mL樣品，置于1mL浮游生物計數(shù)框內，在生物顯微鏡下全片計數(shù)。定性樣品至少重復抽樣5次，定量樣品至少重復抽樣2次。 甲殼動物：準確吸取1mL樣品，置于1mL浮游生物計數(shù)框內，在生物顯微鏡下全片計數(shù)；定性樣品至少重復抽樣5次，定量樣品至少重復抽樣2次。 無節(jié)幼蟲：如樣品中數(shù)量較少，則全部計數(shù)；如數(shù)量較多，可將過濾樣品稀釋，充分混勻后重復抽樣35次計數(shù)。也可在輪蟲樣品中與輪蟲一起計數(shù)。注意事項：殘體以頭部或尾部計數(shù)，同一種類（或同一態(tài)）的殘體只能按其中一種方法計數(shù)，以數(shù)量較多者為準。（4）豐度換算式中，N浮游動物豐度，ind/L； V采樣體積，L； Vs濃縮體積，mL； Va計數(shù)體積，mL； n計數(shù)所得個體數(shù)，ind。（5）記錄 在浮游動物計數(shù)記錄表（附表8）上方部分填寫樣品相關信息，記錄下種名、個體數(shù)量及相應的浮游動物豐度。5 大型底棲動物5.1 監(jiān)測要素和技術要求5.1.1 監(jiān)測要素主要包括大型底棲動物的種類組成、棲息密度及生物量。5.1.2 技術要求（1）篩網(wǎng)孔徑：500m。（2）種類鑒定、計數(shù)：盡量鑒定到種，至少鑒定到屬，常見種必須給出種名，按種計數(shù)。（3）測定結果：棲息密度的測定結果以ind/m2表示；生物量以（g）/m2表示。5.2 主要設備與儀器5.2.1 野外采樣（1）采樣工具 彼得遜采泥器（附圖3）：開口面積1/16m2。 手抄網(wǎng)（直角或D形，附圖4）：規(guī)格為50cm（長）30cm（寬），網(wǎng)衣長度70cm，孔徑500m。 三角拖網(wǎng)：邊長為30cm，網(wǎng)衣長度70cm，孔徑500m。 巖石籠（附圖5）：直徑18cm、高20cm的圓柱形鐵絲籠，籠網(wǎng)孔徑為51cm2，底部鋪500m孔徑尼龍篩絹，內裝規(guī)格盡量一致的卵石。 多片采樣器（附圖6）：由環(huán)狀和方形片（纖維板或瓷片）組成，在片與片之間放置間隔裝置并用螺絲固定形狀。（2）分樣篩：500m孔徑。（3）直流水泵及電瓶（如有必要）（4）采樣船（如有必要）5.2.2 實驗室分析（1）解剖鏡（2）白色搪瓷盤（3）標準網(wǎng)格托盤：規(guī)格為30cm36cm，約30個網(wǎng)格（6cm6cm）。（4）電子天平5.3 試劑5.3.1 樣品固定75%乙醇或5%甲醛溶液5.3.2 實驗室分析加拿大樹膠或其他折射率高的介質5.4 野外采樣程序5.4.1 樣品采集可以根據(jù)監(jiān)測點位的實際情況以及投入的人力物力來選擇適宜的大型底棲動物采集工具和相應的采集方法。底質以淤泥為主的平原湖庫，可采用彼得遜采泥器進行采集；底質以砂礫（甚至碎石）為主的湖道型湖庫（或其他類型湖庫），用彼得遜采泥器效果不佳，可采用手抄網(wǎng)進行采集。此處優(yōu)先推薦天然基質采樣，如果環(huán)境條件不適于天然基質采樣，可以選擇人工基質；另外，如果監(jiān)測的目的僅是為了評價化學水質而非物理生境，也可以采用人工基質。5.4.1.1 天然基質法彼得遜采泥器（1）使用彼得遜采泥器采集底泥，每個監(jiān)測點位至少取2個重復位點，每個重復位點采集2斗，如遇硬質底泥，則在相同斷面內更換軟質底泥點進行采樣。（2）將采集的樣本用500m孔徑分樣篩去除泥砂，當泥砂量大時，可采用大型分樣篩和直流水泵進行淘洗，挑出其中的大型底棲動物樣品。具有典型生態(tài)意義的樣品，應拍照、觀察并記錄。（3）采樣結束后，可將樣品按個體大小、軟硬分別裝瓶（避免損壞），貼上標簽。檢查篩網(wǎng)上的殘余物，用清水沖洗干凈。5.4.1.2 天然基質法手抄網(wǎng)（1）沿著湖岸選擇100米范圍（水深不超過1m），并在其中等距設置10個重復采樣位點。每次采樣，固定抄網(wǎng)位置，網(wǎng)口面朝水流方向，用足尖、足跟攪亂抄網(wǎng)向上0.5m范圍內的底質。如遇較大的石塊，可用手撿起，剝離其上附著的生物。每采集23次，在流水中沖洗網(wǎng)中采集到的樣品。如果出現(xiàn)網(wǎng)眼堵塞的情況，將網(wǎng)內采集到的樣品丟棄，重新在該重復位點附近其他位置采集樣品。如果水流較緩或水深較深，可以采用拖曳方式按“弓”字形采集湖底底質，采集厚度為10cm，每個重復位點的采集距離為0.5m。另外，如果采樣位點有大型水生植物，也可以用拖曳方式在植物根莖上采集。（2）將采集的樣本用500m孔徑分樣篩去除泥砂，當泥砂量大時，可采用大型分樣篩和直流水泵進行淘洗，挑出其中的大型底棲動物樣品。具有典型生態(tài)意義的樣品，應拍照、觀察并記錄。（3）采樣結束后，可將樣品按個體大小、軟硬分別裝瓶（避免損壞），貼上標簽。檢查抄網(wǎng)上的殘余物，用清水沖洗干凈。5.4.1.3 人工基質法巖石籠或多片采樣器（1）將人工基質籠放入監(jiān)測點位的水底，每個點位至少2個放置點，每個點至少放置2個人工基質。（2）2周后，將人工基質籠從水底取出，用500m孔徑分樣篩去除泥砂，挑出其中的大型底棲動物樣品。具有典型生態(tài)意義的樣品，應拍照、觀察并記錄。（3）將樣品按個體大小、軟硬分別裝瓶（避免損壞），貼上標簽。檢查篩網(wǎng)上的殘余物，用清水沖洗干凈。5.4.2 樣品的固定與保存（1）固定：樣品中加入75%乙醇或5%甲醛溶液進行固定。（2）保存：將樣品帶回實驗室，常溫保存。確認樣品按正確方法裝載，使樣品不致泄漏。保存時，每隔幾周檢查固定液，必要時進行添加，直至樣品分析。5.4.3 標識與記錄（1）標識：將永久性標簽放于樣品瓶內，附以下信息：采樣地點、點位編號、日期、采集人姓名、固定液類型。同時，在樣品瓶外側標注采樣地點、點位編號、日期與樣品類型。（2）記錄：在野外記錄本或大型底棲動物現(xiàn)場采樣記錄表（附表9）中記錄下湖庫名稱、采樣位置、點位編碼、采樣日期、采集人姓名、采樣方法及相關的生態(tài)信息。采樣完成后，在大型底棲動物樣品登記表（附表10）中記錄下樣品信息，方便核對。5.5 實驗室分析程序5.5.1 種類鑒定及棲息密度測定（1）標本整理：對樣品進行重新分類、裝瓶，并更換固定液。搖蚊的幼蟲和蛹以及寡毛類個體，應當用合適的介質（如，加拿大樹膠）封在玻片內，再進行觀察和鑒定。（2）種類鑒定：在解剖鏡下，對采集到的樣品進行種類鑒定，分類完畢盡可能按種分別裝瓶。種類鑒定參考書目（建議）國家環(huán)保局. 水生生物監(jiān)測手冊M. 東南大學出版社, 1993.中國科學院. 中國經濟昆蟲志M. 科學出版社, 1997.Morse J.C.等. Aquatic insects of China Useful for Monitoring Water QualityM. 河海大學出版社, 1994.周長發(fā). 中國大陸蜉蝣目分類研究D. 南開大學, 2002.齊鐘彥等. 中國動物圖譜M. 科學出版社, 1985.劉月英, 張文珍等. 中國經濟動物志M. 科學出版社, 1979.周鳳霞, 陳劍虹. 淡水微型生物與底棲動物圖譜M. 化學工業(yè)出版社, 2011.（3）計數(shù)：以種為單位，對樣品進行計數(shù)。易斷的環(huán)節(jié)動物等按頭部計數(shù)；軟體動物的死殼不計數(shù)；數(shù)量較多、無法全部計數(shù)時，可使用標準網(wǎng)格托盤，隨機抽取其中一部分計數(shù)，換算。（4）棲息密度換算：實測個體總數(shù)量除以采樣總面積，即可得該種類的棲息密度（ind/m2）。（5）記錄：在大型底棲動物計數(shù)記錄表（附表11）上方部分填寫樣品相關信息，記錄下各個種類的種名、相應的個體數(shù)量及棲息密度。5.5.2 生物量測定（1）稱重：鑒定、計數(shù)結束后，將標本從瓶中取出，放在吸水紙上，吸去體表水分，進行稱重。（2）生物量換算：實測總重量除以采樣總面積，即可得該種類的生物量（g/m2）。（3）記錄：在大型底棲動物計數(shù)記錄表（附表11）中記錄下各個種類的實測重量以及換算的生物量。6 質量保證與質量控制6.1 野外質量控制程序6.1.1 樣品的采集（1）制定合理的采樣操作程序，在確定的采樣時間、采樣點、采樣層次，用符合質量要求的統(tǒng)一設備采樣，采水量或采泥量盡量保持一致，以保證采集的樣品具有代表性和可比性。（2）保證所有野外設備處于良好的運行狀態(tài)，須制定一項常規(guī)檢查、維護及/或校準的計劃，以確保野外數(shù)據(jù)的異質性和質量。（3）合理安排各類生物樣品采集順序，盡量避免生物類群在采集前受到較大擾動。（4）正確填寫樣品標簽，包括樣品編號、日期、水體名稱、采樣位置以及采集人姓名。（5）及時清洗所有接觸過樣品的采樣設備，并仔細檢查，防止采樣污染。（6）及時在現(xiàn)場處理樣品。受生物活動影響，隨時間變化明顯的項目應在規(guī)定時間內測定。6.1.2 樣品的運輸（1）必須根據(jù)采樣記錄或登記表核對清點樣品，以免有誤或丟失。（2）樣品運輸中貯存溫度不超過采樣時的溫度，必要時需準備冷藏設備。（3）運輸中應仔細保管樣品，以確保樣品無破損、無污染。應避免強光照射及強烈震動。（4）樣品的運輸盡量迅速。6.1.3 樣品的保存按照要求分別保存各類樣品，保存時，每隔幾周檢查固定液，必要時進行添加。6.1.4 采樣記錄除了樣品相關信息，采樣時間、地點、水溫、氣溫、水文、植被等也應有詳細記錄，確保樣品數(shù)據(jù)的完整性。6.2 實驗室質量控制程序6.2.1 樣品的交接與記錄（1）樣品交接時，應辦理正式交接手續(xù)，由接收樣品的工作人員記錄其狀態(tài)，檢查是否異?；蚴欠衽c相應檢驗方法中描述的標準狀態(tài)有所偏離。（2）實驗室應建立送檢樣品的唯一識別系統(tǒng)，以保證任何時候的樣品識別不會發(fā)生混淆。6.2.2 種類鑒定、計數(shù)（1）新種、新記錄種必須留出典型、完好的樣品制作標本，永久保存。（2）樣品鑒定完畢后，隨機抽取10%樣品，由專業(yè)分類學專家檢查，確保分類的準確性。（3）實驗室應當保存并更新相關的分類學文獻。（4）樣品需由2名工作人員重復計數(shù)。6.2.3 數(shù)據(jù)記錄記錄實驗室分析過程中所取得的相應數(shù)據(jù)，分析測試項目還應記錄下測試條件、測試方法、QC報告（空白、重復、標樣、校正），并描述如何從原始數(shù)據(jù)到最終結果報告的過程、數(shù)據(jù)轉換步驟。數(shù)據(jù)記錄表須有記錄人、校對人簽字。6.2.5 剩余樣品的處置現(xiàn)場分析剩余樣品不保存；實驗室分析剩余的生物樣品至少保留4個月以上，有條件的實驗室可長期保存。6.2.6 資料保存基礎分類學參考文獻文庫是藻類、大型底棲動物鑒定中必不可少的輔助工具，應按實驗室需求購買、收集和保存。附 錄表1 湖