鎘對小鼠腎臟急性損害作用的評價

鎘對小鼠肝臟急性損害作用的評價福建醫(yī)科大學12級預防醫(yī)學 梁好前言：日本神通川上游的神崗礦山在采礦過程中及堆積的礦渣中產(chǎn)生含有鎘等重金屬的廢水，在相當長時期內(nèi)直接流入神通川上游的高原川，使得鎘等重金屬在水田土壤、河流底泥中產(chǎn)生沉積。土壤中的鎘質(zhì)量分數(shù)最高達4.8510-6，平均達到1.1210-6，糙米中的鎘質(zhì)量分數(shù)平均為0.9910-6。 鎘沉淀造成一種以婦女為主的奇怪的地方病，患者感到全身各部位劇烈疼痛，嚴重者自己稍一活動身體，就會造成全身骨折。1972年，地方法院裁定該病的病因是鎘，其來源主要是神崗礦山排放的廢物和廢水，責成神崗礦山對患者進行補償。至1991年3月底為止，共確認患者129人（其中死亡116人）。同時也造成了巨大的經(jīng)濟損失。一、實驗的目的和意義：1、掌握急性中毒的定義及應用，練習經(jīng)口染毒的方法及眼眶后取血。2、應用7220型分光光度計探究鎘在小鼠肝臟蓄積情況及小鼠血液指標變化情況。3、進一步了解鎘在肝臟中的蓄積情況以及對肝臟的損害作用，學習自主設計實驗的方法。二、實驗原理鎘是一種重金屬，鎘可經(jīng)過消化道攝入機體，影響肝臟功能，肝臟是體內(nèi)貯存鎘的主要器官之一我們現(xiàn)設計實驗通過選擇以小鼠為實驗動物，研究鎘在小鼠肝臟的蓄積作用及損害作用，通過研究鎘對小鼠損害作用、對肝臟組織的毒作用機理的探討、對肝生化指標的改變情況檢測等，另外通過對實驗小鼠大體解剖、病理組織學檢查、染毒后觀察中毒的發(fā)生發(fā)展過程的規(guī)律，中毒特點、體重變化等，從而對鎘肝臟的蓄積情況和對其他內(nèi)臟的毒性損害作用作出評價。肝臟是產(chǎn)生血清磷酸酶（AKP）的主要器官，和膽紅素一樣，血清磷酸酶經(jīng)肝臟從膽汁中排出。在膽管梗阻、肝細胞損害、膽管上皮再生和癌變等情況下，肝細胞過度產(chǎn)生AKP，經(jīng)淋巴道和肝竇返流入血液。當肝臟受到損傷或者障礙時經(jīng)淋巴道和肝竇進入血液，同時由于肝內(nèi)膽道膽汁排泄障礙，反流入血而引起血清堿性磷酸酶明顯升高。通過檢測血液AKP含量來評價鎘對小鼠肝臟毒性作用。三、實驗材料與儀器1、動物：健康成年小鼠50只，體重1825g，雌雄各一半；2、試劑和儀器：毛細管、移液槍、7220型分光光度計、剪刀、鑷子、玻片、離心機、電子稱、灌胃針 0.15、025 、0.35、0.45gL CdCl2溶液，水溶液。四、實驗方法1、選擇健康動物和性別鑒定：生殖孔與肛門距離小者為雌性，大者為雄性。2、稱重編號及分組：選擇體重1825g的50只小鼠隨機分為5組（A、B、C、D、E），每組10只、雌雄各5只。3、受試化合物的配制（查閱資料后估計實驗用鎘濃度，已配制好）：0.15、025 、0.35、0.45gL CdCl2。4、染毒劑量：給5個小組的其中A、B、C、D、E組小鼠分別進行受試化合物灌胃劑量均為3ml。 A1、 3ml 生理鹽水 B1、 3ml 0.15gL CdCl2溶液 C1、 3ml 0.25gL CdCl2溶液 D1、 3ml 0.35gL CdCl2溶液 E1、 3ml 0.45gL CdCl2溶液 5、進行灌胃操作：將已經(jīng)隔夜禁食，不限制飲水，的小鼠進行灌胃，然后對各組動物用經(jīng)口灌胃法進行3次染毒，分早（8-9點），中（13-14點），晚（18-19點）時間染毒。染毒后繼續(xù)禁食34h，2-3小時才能喂食，直至24小時后。灌胃方法：左手拇指和食指捏住小鼠頭部兩耳后皮膚，無名指或小指將尾部緊壓在手上，使小鼠腹部向上，盡量使其體位垂直，注意使動物的上消化道固定成一直線。右手持連著灌胃針的注射器，將灌胃針由動物口腔側插入，避牙齒，沿咽后壁緩緩滑入食管。若遇阻力，可輕輕上下滑動探索，一旦感覺阻力消失，即深入至胃部，隨后將受試物溶液注入。如遇動物掙扎，應停止進針或?qū)⑨槹纬?，千萬不能強行插入，以免穿破食管，甚至誤入氣管，導致動物立即死亡。一般進針深度小鼠2.54cm，大鼠或豚鼠46cm。五、結果與計算1、染毒后觀察中毒的發(fā)生發(fā)展過程的規(guī)律，中毒特點等。做好實驗記錄，對死亡動物進行大體病理學觀察，存活動物進行大體解刨學觀察，肉眼觀察到病變是做病理學觀察；小鼠的皮膚、毛發(fā)、眼、黏膜、神經(jīng)系統(tǒng)（特別觀察有無震顫、驚厥、流衍、腹瀉、呆滯、嗜睡等）有何異常。2、對小鼠進行眼眶后取血，利用分光光度法在520nm波長測定小鼠血液AKP含量。3、再次稱量小鼠的體重，并與染毒之前的小鼠體重比較。4、計算死亡小鼠數(shù)量，對死亡小鼠進行大體解刨，有必要時進行病理學檢查。5、頸椎脫臼法處死未死亡的小鼠，并進行大體解剖，有必要時進行病理學檢查。6、預期實驗效果：小鼠體重減輕，隨給毒劑量增多體重減輕越多，血液AKP含量隨給毒劑量增多而增多，解剖觀察到肝淤血程度隨劑量增多而增多，可能伴隨其他臟器損害等。7、統(tǒng)計學方法：結果采用方差分析的方法比較各不同染毒劑量小鼠APK含量，并與對照組AKP含量進行比較。 Dunnett-t檢驗適用于多個實驗組與一個對照組均數(shù)的比較，步驟如下(檢驗時對照組為給生理鹽水組)：（1）建立檢驗假設，確定檢驗水準H0：T=C,實驗組與對照組總體均數(shù)相等H1：TC,實驗組與對照組總體均數(shù)不等=0.05(2)計算檢驗統(tǒng)計量 q1 。(3)確定P值，作出推斷 按照預計，結果為給予不同含量鎘的實驗組血液AKP含量與對照組不同，且大于對照組，隨給毒劑量增多AKP含量增多。注方積乾衛(wèi)生統(tǒng)計學第5版北京：人民衛(wèi)生出版社，2003，136137六、評價與討論 依據(jù)實驗動物中毒癥狀、死亡時間、每組死亡