實驗設計：糖皮質激素在應激反應中的作用.doc

實驗題目：糖皮質激素在應激反應中的作用一原理：（1）糖皮質激素主要由腎上腺皮質束狀帶細胞分泌。糖皮質激素主要有皮質醇（cortisol）和皮質酮（corticosterone），在人以皮質醇為主。腎上腺皮質激素主要在肝臟進行代謝，代謝產(chǎn)物隨尿液排出體外。肝臟中存在11-HSD。11-HSD1可以使組織中活性糖皮質激素的水平增高，加強糖皮質激素的作用；而11-HSD2則降解糖皮質激素。（2）糖皮質激素參與應激反應。機體遭遇內(nèi)、外環(huán)境和社會、心理等傷害刺激時（如創(chuàng)傷、嚴重感染、高溫、高寒、消耗性疾病、強烈精神刺激、精神緊張等），垂體腎上腺皮質軸被激活，促腎上腺皮質激素（ACTH）和糖皮質激素分泌增加，出現(xiàn)非特異性的適應反應，稱為應激反應（stress reaction）。應激反應與刺激的性質無關，任何傷害的刺激達到一定強度都可引起應激反應。而應激反應又可以從以下幾個方面調(diào)節(jié)機體的適應能力： 減少應激刺激引起的一些物質（緩激肽、蛋白水解酶及前列腺素等）的產(chǎn)生量及其不良作用,穩(wěn)定細胞膜和溶酶體膜。 促進脂肪和蛋白質代謝，促進糖異生，使能量代放運轉以糖代謝為中心，降低外周組織葡萄糖利用，維持血糖平衡，保持葡萄糖對重要器官（如腦和心）的供應； 在維持血壓方面起允許作用，增強兒茶酚胺對血管的調(diào)節(jié)作用，是心肌收縮力加強，血壓升高。（3）一定強度的應激性刺激引起的應激反應是機體的適應性和防御性反應，可提高機體對傷害性刺激的耐受力；然而，強烈或持久的應激刺激引起機體過強的應激反應，對機體可造成傷害，甚至導致應激性疾病，如嚴重創(chuàng)傷、大面積燒傷、大手術等引起的應激性潰瘍等。二目的 ：探究糖皮質激素在應激反應中的作用。三實驗對象：大白鼠四驗器材和藥品：哺乳動物手術器械一套，蛙板、生理鹽水、蒸餾水、盛有冰水的面盆、注射器、10%的水合氯醛、碘酊、酒精、地塞米松等。五試驗步驟 1.配置10%的水合氯醛溶液：稱取10克水和氯醛，用蒸餾水溶解，再用蒸餾水稀釋到100毫升，就得到10%水合氯醛溶液。2.選取已禁食一夜的體重相同、生理狀況和健康狀況相近且經(jīng)測試游泳技能近似的30只大白鼠，分為A、B、C 三組，每組10只3.將全部大鼠腹腔注射10%的水合氯醛，按照0.3ml/100g個劑量注射。3到5分鐘后可通過麻醉指征觀察麻醉是否麻醉好。待大鼠麻醉后，仰臥并固定在蛙板上。4.手術：對A組鼠進行腎上腺皮質摘除手術，手術操作如下。 方法：剪去腰部的毛，用75酒精消毒術部皮膚。從最后胸椎處向后沿背部正中線做約2cm長的皮膚切口。先把切口牽向左側，于最后肋骨后緣和背最長肌的外緣分離肌肉。用鑷子擴大切口，以小鑷子夾鹽水棉球輕輕推開腹腔內(nèi)臟器和組織，在腎臟前內(nèi)側脊柱下方就可看到淡黃色的腎上腺，與其周圍不規(guī)則的脂肪組織有明顯區(qū)別。摘除腎上腺皮質。同法摘除右側腎上腺皮質(右側腎上腺位置稍靠前，注意勿傷附近血管)，縫合肌肉和皮膚，并涂以碘酊。對B組進行假手術對照，但不摘除腎上腺皮質，按上述步驟縫合。C組做空白對照。5. 三組鼠做好明顯的記號。待各鼠恢復清醒和活動后，在實驗室的喂養(yǎng)室里飼養(yǎng)一個星期，待手術恢復（在此期間不可使其受到大的應激刺激）。6.一個星期之后，會有部分大鼠死亡，淘汰掉那些死亡的，將存活的按組將A、B、C組大白鼠同時投入盛有冰水的面盆中，按動秒表，記錄各組大鼠在水中的游泳時間，并觀察泳姿和速度，直至它開始下沉時為止，各鼠開始下沉時立即撈出。計算出各組大鼠在水中游泳的平均時間并比較，同時比較各組動物的游泳姿勢與速度。7.撈出大白鼠后，立即對A組鼠靜脈注射0.25mg/100g的地塞米松，B、C組注射等量等濃度的生理鹽水。觀察各組鼠的活動情況。8.待三組大白鼠的活動恢復后，可再次重復步驟5。六實驗流程圖對所有大白鼠進行麻醉處理準備30只大白鼠，分A、B、C三組對ABC三組分別進行相應處理并標記將已處理的大鼠放入冰水并觀察記錄撈出剛下沉的大鼠并對A鼠注射糖皮質激素，對B、C鼠注射等量生理鹽水觀察記錄各鼠活動情況七預測結果ABC第一次游泳該組小鼠游泳速度較慢，并較快的開始下沉，小鼠的狀態(tài)較為低靡或死亡該組游泳速度快，在水中游泳的時間長，狀態(tài)良好。該組情況和C組類似。第二次游泳小鼠較前次明顯興奮，在水中游泳的時間加長實驗結果與第一次相比無明顯變化實驗結果與第一次相比無明顯變化注：第一游泳是指未注射糖皮質激素之前，第二游泳是指注射糖皮質激素之后。八分析糖皮質激素在應激反應中有3個作用1 穩(wěn)定細胞膜和溶酶體膜2 促進糖異生，升高血糖3 加強心收縮力，升高血壓所以在實驗中表現(xiàn)為注射了糖皮質激素之后的A組鼠，能在水中游動的時間較長，而正常的鼠在水中游動的時間也比較長。若出現(xiàn)這種現(xiàn)象，便可以說明糖皮質激素在應激反應中具有以上3中作用。 由于切除腎上腺皮質會對大鼠生理機能長生巨大的損害，可能導致白鼠很快死亡。或者不能出現(xiàn)預期的實驗現(xiàn)象，所以在手術后應盡快實驗，手術要盡量減少感染和傷害。注意事項：1.掌握麻醉深度，水合氯醛劑量過大會致死。2.仔細找準手術部位；避免切口過長或內(nèi)臟移位、出血較多等過度損傷。3.標記要可靠、醒目并避免對鼠的傷害(如剪耳、斷尾等)。4.飼養(yǎng)期間盡量避免給大鼠過大的應急刺激，以免其死亡。5.各鼠放于冰水中后開始下沉時應迅速取出，防止其溺水死亡。6. 防控感染方法：用抗生素預防，在第一次手術前一天用頭孢拉定(2