實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：糖皮質(zhì)激素在應(yīng)激反應(yīng)中的作用.doc

實(shí)驗(yàn)題目：糖皮質(zhì)激素在應(yīng)激反應(yīng)中的作用一原理：（1）糖皮質(zhì)激素主要由腎上腺皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞分泌。糖皮質(zhì)激素主要有皮質(zhì)醇（cortisol）和皮質(zhì)酮（corticosterone），在人以皮質(zhì)醇為主。腎上腺皮質(zhì)激素主要在肝臟進(jìn)行代謝，代謝產(chǎn)物隨尿液排出體外。肝臟中存在11-HSD。11-HSD1可以使組織中活性糖皮質(zhì)激素的水平增高，加強(qiáng)糖皮質(zhì)激素的作用；而11-HSD2則降解糖皮質(zhì)激素。（2）糖皮質(zhì)激素參與應(yīng)激反應(yīng)。機(jī)體遭遇內(nèi)、外環(huán)境和社會(huì)、心理等傷害刺激時(shí)（如創(chuàng)傷、嚴(yán)重感染、高溫、高寒、消耗性疾病、強(qiáng)烈精神刺激、精神緊張等），垂體腎上腺皮質(zhì)軸被激活，促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）和糖皮質(zhì)激素分泌增加，出現(xiàn)非特異性的適應(yīng)反應(yīng)，稱為應(yīng)激反應(yīng)（stress reaction）。應(yīng)激反應(yīng)與刺激的性質(zhì)無(wú)關(guān)，任何傷害的刺激達(dá)到一定強(qiáng)度都可引起應(yīng)激反應(yīng)。而應(yīng)激反應(yīng)又可以從以下幾個(gè)方面調(diào)節(jié)機(jī)體的適應(yīng)能力： 減少應(yīng)激刺激引起的一些物質(zhì)（緩激肽、蛋白水解酶及前列腺素等）的產(chǎn)生量及其不良作用,穩(wěn)定細(xì)胞膜和溶酶體膜。 促進(jìn)脂肪和蛋白質(zhì)代謝，促進(jìn)糖異生，使能量代放運(yùn)轉(zhuǎn)以糖代謝為中心，降低外周組織葡萄糖利用，維持血糖平衡，保持葡萄糖對(duì)重要器官（如腦和心）的供應(yīng)； 在維持血壓方面起允許作用，增強(qiáng)兒茶酚胺對(duì)血管的調(diào)節(jié)作用，是心肌收縮力加強(qiáng)，血壓升高。（3）一定強(qiáng)度的應(yīng)激性刺激引起的應(yīng)激反應(yīng)是機(jī)體的適應(yīng)性和防御性反應(yīng)，可提高機(jī)體對(duì)傷害性刺激的耐受力；然而，強(qiáng)烈或持久的應(yīng)激刺激引起機(jī)體過(guò)強(qiáng)的應(yīng)激反應(yīng)，對(duì)機(jī)體可造成傷害，甚至導(dǎo)致應(yīng)激性疾病，如嚴(yán)重創(chuàng)傷、大面積燒傷、大手術(shù)等引起的應(yīng)激性潰瘍等。二目的 ：探究糖皮質(zhì)激素在應(yīng)激反應(yīng)中的作用。三實(shí)驗(yàn)對(duì)象：大白鼠四驗(yàn)器材和藥品：哺乳動(dòng)物手術(shù)器械一套，蛙板、生理鹽水、蒸餾水、盛有冰水的面盆、注射器、10%的水合氯醛、碘酊、酒精、地塞米松等。五試驗(yàn)步驟 1.配置10%的水合氯醛溶液：稱取10克水和氯醛，用蒸餾水溶解，再用蒸餾水稀釋到100毫升，就得到10%水合氯醛溶液。2.選取已禁食一夜的體重相同、生理狀況和健康狀況相近且經(jīng)測(cè)試游泳技能近似的30只大白鼠，分為A、B、C 三組，每組10只3.將全部大鼠腹腔注射10%的水合氯醛，按照0.3ml/100g個(gè)劑量注射。3到5分鐘后可通過(guò)麻醉指征觀察麻醉是否麻醉好。待大鼠麻醉后，仰臥并固定在蛙板上。4.手術(shù)：對(duì)A組鼠進(jìn)行腎上腺皮質(zhì)摘除手術(shù)，手術(shù)操作如下。 方法：剪去腰部的毛，用75酒精消毒術(shù)部皮膚。從最后胸椎處向后沿背部正中線做約2cm長(zhǎng)的皮膚切口。先把切口牽向左側(cè)，于最后肋骨后緣和背最長(zhǎng)肌的外緣分離肌肉。用鑷子擴(kuò)大切口，以小鑷子夾鹽水棉球輕輕推開腹腔內(nèi)臟器和組織，在腎臟前內(nèi)側(cè)脊柱下方就可看到淡黃色的腎上腺，與其周圍不規(guī)則的脂肪組織有明顯區(qū)別。摘除腎上腺皮質(zhì)。同法摘除右側(cè)腎上腺皮質(zhì)(右側(cè)腎上腺位置稍靠前，注意勿傷附近血管)，縫合肌肉和皮膚，并涂以碘酊。對(duì)B組進(jìn)行假手術(shù)對(duì)照，但不摘除腎上腺皮質(zhì)，按上述步驟縫合。C組做空白對(duì)照。5. 三組鼠做好明顯的記號(hào)。待各鼠恢復(fù)清醒和活動(dòng)后，在實(shí)驗(yàn)室的喂養(yǎng)室里飼養(yǎng)一個(gè)星期，待手術(shù)恢復(fù)（在此期間不可使其受到大的應(yīng)激刺激）。6.一個(gè)星期之后，會(huì)有部分大鼠死亡，淘汰掉那些死亡的，將存活的按組將A、B、C組大白鼠同時(shí)投入盛有冰水的面盆中，按動(dòng)秒表，記錄各組大鼠在水中的游泳時(shí)間，并觀察泳姿和速度，直至它開始下沉?xí)r為止，各鼠開始下沉?xí)r立即撈出。計(jì)算出各組大鼠在水中游泳的平均時(shí)間并比較，同時(shí)比較各組動(dòng)物的游泳姿勢(shì)與速度。7.撈出大白鼠后，立即對(duì)A組鼠靜脈注射0.25mg/100g的地塞米松，B、C組注射等量等濃度的生理鹽水。觀察各組鼠的活動(dòng)情況。8.待三組大白鼠的活動(dòng)恢復(fù)后，可再次重復(fù)步驟5。六實(shí)驗(yàn)流程圖對(duì)所有大白鼠進(jìn)行麻醉處理準(zhǔn)備30只大白鼠，分A、B、C三組對(duì)ABC三組分別進(jìn)行相應(yīng)處理并標(biāo)記將已處理的大鼠放入冰水并觀察記錄撈出剛下沉的大鼠并對(duì)A鼠注射糖皮質(zhì)激素，對(duì)B、C鼠注射等量生理鹽水觀察記錄各鼠活動(dòng)情況七預(yù)測(cè)結(jié)果ABC第一次游泳該組小鼠游泳速度較慢，并較快的開始下沉，小鼠的狀態(tài)較為低靡或死亡該組游泳速度快，在水中游泳的時(shí)間長(zhǎng)，狀態(tài)良好。該組情況和C組類似。第二次游泳小鼠較前次明顯興奮，在水中游泳的時(shí)間加長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與第一次相比無(wú)明顯變化實(shí)驗(yàn)結(jié)果與第一次相比無(wú)明顯變化注：第一游泳是指未注射糖皮質(zhì)激素之前，第二游泳是指注射糖皮質(zhì)激素之后。八分析糖皮質(zhì)激素在應(yīng)激反應(yīng)中有3個(gè)作用1 穩(wěn)定細(xì)胞膜和溶酶體膜2 促進(jìn)糖異生，升高血糖3 加強(qiáng)心收縮力，升高血壓所以在實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)為注射了糖皮質(zhì)激素之后的A組鼠，能在水中游動(dòng)的時(shí)間較長(zhǎng)，而正常的鼠在水中游動(dòng)的時(shí)間也比較長(zhǎng)。若出現(xiàn)這種現(xiàn)象，便可以說(shuō)明糖皮質(zhì)激素在應(yīng)激反應(yīng)中具有以上3中作用。 由于切除腎上腺皮質(zhì)會(huì)對(duì)大鼠生理機(jī)能長(zhǎng)生巨大的損害，可能導(dǎo)致白鼠很快死亡?；蛘卟荒艹霈F(xiàn)預(yù)期的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，所以在手術(shù)后應(yīng)盡快實(shí)驗(yàn)，手術(shù)要盡量減少感染和傷害。注意事項(xiàng)：1.掌握麻醉深度，水合氯醛劑量過(guò)大會(huì)致死。2.仔細(xì)找準(zhǔn)手術(shù)部位；避免切口過(guò)長(zhǎng)或內(nèi)臟移位、出血較多等過(guò)度損傷。3.標(biāo)記要可靠、醒目并避免對(duì)鼠的傷害(如剪耳、斷尾等)。4.飼養(yǎng)期間盡量避免給大鼠過(guò)大的應(yīng)急刺激，以免其死亡。5.各鼠放于冰水中后開始下沉?xí)r應(yīng)迅速取出，防止其溺水死亡。6. 防控感染方法：用抗生素預(yù)防，在第一次手術(shù)前一天用頭孢拉定(2