Agilent 1260 HPLC 操作規(guī)程.doc

Agilent 1260 HPLC 操作規(guī)程1 開機(jī)1.1 打開電腦1.2 打開液相色譜各個(gè)模塊的電源1.3 雙擊桌面“LC1260(Online)”，進(jìn)入聯(lián)機(jī)界面1.4 排氣：1.4.1 手動(dòng)旋開泵處沖洗閥（逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)約1圈）1.4.2 右鍵單擊“Pump”圖標(biāo)區(qū)域，選擇“Method”選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面，設(shè)流速：5ml/min，點(diǎn)擊“確定”；1.4.3 右鍵單擊“Pump” 圖標(biāo)區(qū)域，點(diǎn)擊“Control”選項(xiàng)，選中“ON”，點(diǎn)擊“確定”，則系統(tǒng)開始沖洗，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止（一般為5分鐘），切換通道繼續(xù)沖洗，直到所有要用通道無氣泡為止；1.4.4 右鍵單擊“Pump” 圖標(biāo)，點(diǎn)擊“Method”選項(xiàng)，設(shè)流速：0ml/min，手動(dòng)旋緊沖洗閥；1.4.5 右鍵單擊“Pump”圖標(biāo)，點(diǎn)擊“Method”選項(xiàng)，按照方法要求選擇合適比例的流動(dòng)相，設(shè)流速：1.0ml/min；（不一定是1）1.4.6 同理右鍵單擊“Column Comp”，“DAD”圖標(biāo)，點(diǎn)擊“Method”選項(xiàng)，按照方法的要求設(shè)置溫度，波長(zhǎng)，點(diǎn)擊“控制” 選項(xiàng)，“ON”打開柱溫箱和檢測(cè)器。2 編輯方法2.1 點(diǎn)擊“Method” “Edit EntireMethod”開始編輯完整方法；2.2 選中除“Data Analysis ”外的三項(xiàng)，進(jìn)入下一選項(xiàng)卡，選擇“Als”（自動(dòng)進(jìn)樣），點(diǎn)擊“OK”，進(jìn)入下一選項(xiàng)；2.3 選擇“Method”菜單下“Method Information”選項(xiàng)，在“Method Comments”中加入方法的信息（如：This is for test!），選擇“OK”，進(jìn)入下一選項(xiàng)；2.4 泵參數(shù)設(shè)定：右鍵單擊“Pump”圖標(biāo)，點(diǎn)擊“Method”選項(xiàng)，設(shè)置“Flow”：如1.0ml/min；“Stop Time”：如10 min（該停止時(shí)間僅為做一個(gè)樣品需要的時(shí)間），按照要求選擇合適比例的流動(dòng)相配比，選擇“OK”，進(jìn)入下一選項(xiàng)；2.5 自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定：右鍵單擊“Sampler”圖標(biāo)，點(diǎn)擊“Method”選項(xiàng)，選擇“Injection volume”，輸入進(jìn)樣體積，選擇“OK”，進(jìn)入下一選項(xiàng)；2.6 柱溫箱參數(shù)設(shè)定：右鍵單擊“Column Comp”，點(diǎn)擊“Method”選項(xiàng)，設(shè)置“Left”溫度（可設(shè)置溫度范圍：低于室溫10-80），一般“Left”和“Right”溫度一致，選擇“Combined”綁定即可，“Stop Time”選擇“As Pump /Injector”，選擇“OK”，進(jìn)入下一選項(xiàng)；2.7 UV檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定: 右擊“DAD” ，點(diǎn)擊“Method”選項(xiàng)，下方的空白處輸入所需的檢測(cè)波長(zhǎng)（可根據(jù)需要選擇多個(gè)波長(zhǎng)，最多可選8個(gè)波長(zhǎng)）；“Stop Time”選擇“As Pump /Injector”；“Spectrum” “Store”選項(xiàng)下，根據(jù)需要選擇 “None”或“All（全波長(zhǎng)掃描）”等選項(xiàng)，選擇“OK”，進(jìn)入下一選項(xiàng)；2.8 編輯方法完畢，從“Method”菜單中，選中“Save Method As”，輸入一方法名，選擇“OK”，保存方法成功。3 單針進(jìn)樣3.1 從“Run Control”菜單中，選擇“Sample Information”選項(xiàng)，輸入“Operator Name”；在“Data File”中選擇“Path”和 “Prefix/Counter（文件命名）”設(shè)置“Prefix（一般設(shè)置為年月日）”和“Counter”；輸入“Location（樣品位置）”和“Sample Name”，選擇“OK”，進(jìn)入下一選項(xiàng)；3.2 基線平穩(wěn)后選擇“Run Control”中的“Run Method”選項(xiàng)，開始進(jìn)樣。4 序列進(jìn)樣4.1 選擇“Sequence”菜單下“ Sequence Table”選項(xiàng)，在“Confiqure Table”中選擇需要選項(xiàng)，一般為“Vial(樣品瓶)”，“Sample Name(樣品名稱)”，“Method Name(方法名稱)”，“Inj/Vial（進(jìn)樣次數(shù)）”，“Sample Type（樣品類型）”，“Datafile（文件名）”和“Inj Volume（進(jìn)樣體積）”；4.2 點(diǎn)擊“Inset”生成一行，設(shè)置上述參數(shù)，選中該行，點(diǎn)擊“Copy”和“Paste”復(fù)制后修改相應(yīng)參數(shù)，即生成序列表，選擇“OK”，進(jìn)入下一選項(xiàng)；4.3 點(diǎn)擊“Sequence”菜單下“ Sequence Parameters”選項(xiàng)，選擇序列數(shù)據(jù)的“Path”（序列會(huì)自動(dòng)生成以“序列名稱時(shí)間”為名稱的文件夾保存數(shù)據(jù)），數(shù)據(jù)建議選擇 “Prefix/Counter”保存；在“Shutdown”選項(xiàng)下選中“Post-Sequence Command/Macro”，根據(jù)需要選擇“PUMPALL OFF（序列結(jié)束后關(guān)閉泵）” “LAMPALL OFF（序列結(jié)束后關(guān)閉紫外燈）” “STANDBY（序列結(jié)束后關(guān)閉紫外燈和泵）”，選擇“OK”，進(jìn)入下一選項(xiàng)；（注：若“Path”中默認(rèn)保存于C盤，則可點(diǎn)擊“View”，選擇“Preferences”，根據(jù)需要添加相應(yīng)的“SequenceTemplates”“Data”“Master Methods”保存路徑）4.4 從“Sequence”菜單，選中“Save Sequence Template As”，輸入一序列名，選擇“OK”，即可；4.5 基線平穩(wěn)后選擇“Run Control”中的“Run Sequence”選項(xiàng)，開始序列進(jìn)樣。（注：若中途停止運(yùn)行，則選擇“Run Control”中的“Stop Run/Inject/ Sequence”可保留圖譜信息，若選擇Abort，則所有圖譜信息都丟失）5 數(shù)據(jù)分析（脫機(jī)狀態(tài)使用）5.1 雙擊“LC1260（Offline）”圖標(biāo)進(jìn)入的脫機(jī)畫面5.2 從“View”菜單中，點(diǎn)擊“Data Analysis”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面5.3 從“File”菜單選擇“Load Signal”，選中所需的數(shù)據(jù)文件名，點(diǎn)擊“OK”，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。5.4 譜圖優(yōu)化：從“Graphics”菜單中選擇“Signal Options”。從“范圍” 中選擇“Full”或“Use Ranges” 選擇所需“Time Range”和“Response Range”，選擇“OK”；從“Integration”中選擇“Integration Events”，調(diào)整“Area Reject”和“Height Reject”刪除雜峰；點(diǎn)擊“Set Integration”圖標(biāo)，可選擇性消除不需要的積分，若想消除該操作，則選擇“Method Manual Events”上排左起第5個(gè)圖標(biāo)進(jìn)行移除操作即可，點(diǎn)擊左邊“”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法并退出“Integration Events”。（注：“Set Integration”圖標(biāo)為）6 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制6.1 選擇“Calibration”菜單下“New Calibration Table”，選擇“Automatic Setup”中“Level（即標(biāo)曲中對(duì)應(yīng)的點(diǎn)，第一個(gè)點(diǎn)即為1）”和“Defanlt Amount（標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)點(diǎn)的濃度）”，選擇“OK”；6.2 通過選擇“Calibration”菜單下的“Add Level”選項(xiàng)依次添加各點(diǎn)參數(shù)，若為外標(biāo)法，在“ISTD”項(xiàng)下選“NO”，若為內(nèi)標(biāo)法則選“Yes”；“#”項(xiàng)下對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)無的數(shù)字的應(yīng)統(tǒng)一；若想更改標(biāo)準(zhǔn)曲線中的對(duì)應(yīng)點(diǎn)；6.3 選擇“Calibration”菜單下的“Recalibrate”項(xiàng)的“Mode”選項(xiàng)，選擇“Average”則表示取當(dāng)前點(diǎn)與標(biāo)曲中對(duì)應(yīng)點(diǎn)的平均值替代標(biāo)曲中原對(duì)應(yīng)點(diǎn)，若選擇“Replace”則表示將當(dāng)前點(diǎn)取代標(biāo)曲中對(duì)應(yīng)點(diǎn)；（注：修改“Defanlt Amount”中濃度單位的方法：選擇“Calibration”項(xiàng)下“Calibration Setting”，修改“Amount Units”，設(shè)置濃度單位；選擇“Calibration”項(xiàng)下“Calibration Setting”，修改“Default CalibrationCurve”，選擇合適的曲線類型-Type，是否過原點(diǎn)-Origin和各點(diǎn)對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線的比重-Weight，通常選Equal）6.4 調(diào)出樣品譜圖，點(diǎn)擊需要計(jì)算濃度的色譜峰，選擇“Report” 菜單中的“Specify Report”，選擇“Report style”為“Detail”，點(diǎn)擊“OK”后選擇“打印預(yù)覽”圖標(biāo)，在報(bào)告中即可體現(xiàn)計(jì)算結(jié)果。7 圖譜重疊設(shè)置7.1 選擇“File”菜單下“Overlay Signal”選項(xiàng)，選擇任意需要重疊的圖譜；7.2 在“Signal”選項(xiàng)下，選擇“3D Signal Overlay”圖標(biāo)（緊鄰圖譜上方左起第四個(gè)圖標(biāo)），在彈出的“Adjust Signal OverlayOptions”對(duì)話框中調(diào)節(jié)交錯(cuò)時(shí)間和高度；若想移除重疊譜圖，點(diǎn)擊第六個(gè)圖標(biāo)。8 信噪比等參數(shù)計(jì)算8.1 選擇“Report”菜單中的“System Suitability”項(xiàng)下的“Edit Noise Range”選項(xiàng)，設(shè)置時(shí)間范圍（超過1min）；8.2 選擇“Report” 菜單中的“Specify Report”，選擇“Report style”為“Perfomance+Noise”，點(diǎn)擊“OK”后，即可預(yù)覽信噪比參數(shù)；8.3 選擇“Report” 菜單中的“Specify Report”，選擇“Report style”為“Extended Perfomance”，點(diǎn)擊“OK”后，即可預(yù)覽對(duì)稱性、拖尾因子等所有參數(shù)。9 程序運(yùn)行時(shí)檢測(cè)出峰情況選擇“File”菜單下的“Snapshot”選項(xiàng)即可。10 打印報(bào)告10.1 從“Report”菜單中選擇“Report Mode”，選擇“Use Classic Reporting”；10.2 從“Report”菜單中選擇“打印報(bào)告”，則報(bào)告結(jié)果將被打印。11 關(guān)機(jī)11.1 沖洗色譜柱和系統(tǒng)后，退出化學(xué)工作站及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)；11.2關(guān)閉Agilent 1260各模塊電源開關(guān)。儀器使用注意事項(xiàng)1. 用棕色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液.光照影響瓶中藻類的生長(zhǎng)會(huì)堵塞溶劑過濾器，從而影響泵的運(yùn)行。勿使用多日存放的蒸餾水。2. 在比例閥的混合點(diǎn)，重力作用使鹽顆粒沉淀下來，通常，下面閥A/D接水相/鹽溶液，C/B接有機(jī)溶劑。使用鹽時(shí)脫氣機(jī)易堵，可將管路入口與出口反接，用60攝氏度的溫水反沖，用針筒緩慢吸200mL左右。3. 流動(dòng)相瓶中的濾頭臟。壓力波動(dòng)，可將濾頭拔下，檢查是否與濾頭有關(guān)。濾頭污染，可用30%-35%的稀硝酸泡1-2h或過夜，看污染程度，最后用水沖洗干凈，重新裝好。4. seal-wash 用10%的異丙醇。使用緩沖鹽時(shí)要加seal-wash選項(xiàng)，周期清洗。5. LAN與CAN不能串聯(lián)，LAN接儀器，PC。CAN為模塊間通訊。6. 柱溫箱選擇3uL，減少死體積，延遲體積。7. 液相上各種燈顏色。電源打開后，四個(gè)模塊左側(cè)燈亮綠色。狀態(tài)指示燈位于各自模塊的右上方：呈黃色：該儀器在未準(zhǔn)備好狀態(tài)(Not-ready) 或正在自檢。呈綠色：該儀器正在運(yùn)行，采集數(shù)據(jù)(Run)。無顏色：該儀器已準(zhǔn)備好等待運(yùn)行(Pre-run)。呈紅色：該儀器檢測(cè)到有故障發(fā)生，儀器在錯(cuò)誤狀態(tài),紅色多發(fā)生于漏液時(shí)。8. 過濾白頭位于排氣閥內(nèi)，當(dāng)系統(tǒng)壓力有異常增高時(shí)，首先需要檢查過濾白頭是否阻塞了。判斷的方法是：打開排氣閥，以純水作流動(dòng)相，將流速設(shè)為5mL/min，如果泵壓超過10bar，則說明過濾白頭需要更換了。如果過濾芯的顏色發(fā)黑，說明是被柱