艾滋病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理.doc

此文檔收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)，請聯(lián)系網(wǎng)站刪除天馬行空官方博客：/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632艾滋病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理1 范圍本章規(guī)定了艾滋病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理，包括質(zhì)量保證、質(zhì)量控制和質(zhì)量評價(jià)，適用于全國各級各類艾滋病實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理。2 規(guī)范性引用文件全國艾滋病檢測工作規(guī)范，衛(wèi)生部，1997。ISO 15189, Medical Laboratories-Particular requirements for quality and competence (formerly Qualily Management in the Medical Laboratory).NCCLS C24-A2. Statistical Quality Control for Quantitatire Measurements; Principles and Definitions; Approved Guideline-Second Edition. 3 質(zhì)量保證（QA）3.1 行政支持行政部門和領(lǐng)導(dǎo)要關(guān)心艾滋病實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)和發(fā)展，保證實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和主要技術(shù)人員隊(duì)伍的穩(wěn)定，保證實(shí)驗(yàn)室建筑和設(shè)備需要，給予充足的經(jīng)費(fèi)支持，并進(jìn)行經(jīng)常性監(jiān)督檢查。3.2 實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化建設(shè)艾滋病實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及其建筑、設(shè)施、設(shè)備必須符合全國艾滋病檢測工作規(guī)范的要求。3.3 人員培訓(xùn)及其評價(jià)實(shí)驗(yàn)室工作人員上崗前必須接受技術(shù)培訓(xùn)并獲得合格證書。在工作中要定期或不定期接受復(fù)訓(xùn)。實(shí)驗(yàn)室主管領(lǐng)導(dǎo)應(yīng)定期對工作人員進(jìn)行評價(jià)，包括工作的準(zhǔn)確性、效率、執(zhí)行安全條例和規(guī)章制度情況、職業(yè)道德、出勤率以及上崗資格等。3.4 標(biāo)本采集、運(yùn)送和處理嚴(yán)格遵照本規(guī)范第一章。3.5 檢測方法和試劑的選擇應(yīng)使用可靠的檢測方法和敏感性高、特異性好的試劑，并定期進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)。3.6 設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn)設(shè)立常用儀器的維護(hù)及校準(zhǔn)制度，以保證正常運(yùn)轉(zhuǎn)。3.6.1 酶標(biāo)讀數(shù)儀、洗板機(jī)每天：核對濾光片波長，檢查洗板機(jī)管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。每周：清潔儀器表面，保護(hù)光學(xué)零件不沾灰塵。每月：檢查洗滌時(shí)各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對位良好，負(fù)壓是否符合規(guī)定要求。每年：檢查、清洗濾光片，如果出現(xiàn)破裂或霉點(diǎn)則要更換。根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準(zhǔn)程序或使用校準(zhǔn)板，對濾光片的精密度進(jìn)行校準(zhǔn)并保留記錄。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)異常情況，應(yīng)隨時(shí)進(jìn)行處理，可根據(jù)使用情況更換必要的部件。3.6.2 移液器1年至少應(yīng)該標(biāo)定1次，發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)隨時(shí)進(jìn)行校準(zhǔn)。標(biāo)定方法包括有色溶液光譜分析法、稱量校準(zhǔn)法、同位素計(jì)數(shù)法以及使用配套校準(zhǔn)盒等。校準(zhǔn)多道移液器時(shí)，必須保證每一個(gè)加樣頭都能夠連續(xù)、準(zhǔn)確地加樣。移液器的精密度應(yīng)在廠家說明書規(guī)定的范圍內(nèi)。范例 用蒸餾水稱量法標(biāo)定移液器：在室溫22無風(fēng)的工作室中，在萬分之一級別天平上放置一個(gè)小三角燒瓶，用待校準(zhǔn)的移液器吸取存放過夜的蒸餾水加入燒瓶底部，稱重并計(jì)算蒸餾水重量，連續(xù)稱重10次。加蒸餾水的量根據(jù)待校準(zhǔn)移液器的規(guī)格而不同（表6），10次校準(zhǔn)稱量均在要求的重量范圍內(nèi)為合格，貼上合格標(biāo)簽，注明校準(zhǔn)日期，不合格移液器要請生產(chǎn)廠家進(jìn)行校準(zhǔn)。填寫和保存校準(zhǔn)記錄。表6 稱重法校準(zhǔn)移液器方案移液器規(guī)格蒸餾水量要求重量范圍0.510l2l1.75 2.25 mg540l10l9.8 10.2 mg40200l70l69.4 70.6 mg2001000l300l298.0 302.0 mg15ml2000l1990.0 2010.0 mg210ml3500l3485.0 3515.0 mg3.6.3 冰箱和孵育箱必須每天檢查和記錄低溫、超低溫冰箱及孵育箱的溫度，并做好記錄。3.6.4 定期檢查其它儀器設(shè)備精密儀器及出具實(shí)驗(yàn)結(jié)果的儀器必須定期校準(zhǔn)，其它儀器定期檢查并做好記錄。3.7 文件和文件管理3.7.1 標(biāo)準(zhǔn)操作程序 (SOP) 艾滋病實(shí)驗(yàn)室要建立覆蓋主要工作內(nèi)容的SOP文件。艾滋病實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立以下SOP：（1）樣品的接收、登記和處理，（2）檢測方法和步驟，（3）儀器的使用維護(hù)和校準(zhǔn)，（4）實(shí)驗(yàn)中的質(zhì)量控制，（5）結(jié)果解釋與報(bào)告，（6）保密程序，（7）檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存，（8）追蹤和處理，（9）實(shí)驗(yàn)室的清理和消毒，（10）實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)。 SOP通常包括（但不限于）以下內(nèi)容：（1）標(biāo)題和編號（2）編寫和修改日期（3）編寫和修訂人員姓名（4）方法、目的和應(yīng)用范圍（5）相應(yīng)的職業(yè)規(guī)范（6）檢測設(shè)備和試劑（7）安全防護(hù)相關(guān)步驟（8）結(jié)果的解釋和報(bào)告（9）附錄，包括相關(guān)的附加文件如標(biāo)準(zhǔn)表格、設(shè)備和試劑盒說明書等。 SOP由各崗位工作人員起草，實(shí)驗(yàn)室主任審定，并應(yīng)定期修訂。修訂應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)室主管人員（技術(shù)負(fù)責(zé)人）的領(lǐng)導(dǎo)下進(jìn)行，每年至少1次。所有工作人員要在所從事工作的SOP文件上簽名表示已經(jīng)閱讀并掌握了有關(guān)內(nèi)容。3.7.2 實(shí)驗(yàn)原始記錄表應(yīng)按實(shí)驗(yàn)要求，設(shè)計(jì)操作的原始記錄表，標(biāo)明空白對照、陽性對照、陰性對照、外部對照以及待檢樣品的位置，便于指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)人員加樣。要注明試劑盒廠家、測定方法、批號、效期、操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測日期。3.7.3 標(biāo)本的登記收到標(biāo)本后，及時(shí)登記有關(guān)參數(shù)，包括受檢者姓名或代號、試管編號、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢驗(yàn)結(jié)果、送檢日期、報(bào)告日期、備注 ( 必要時(shí)記錄通信地址 )等。3.7.4 HIV陽性標(biāo)本的保存記錄包括HIV陽性標(biāo)本的類型、貯存量、貯存溫度、貯存起始時(shí)間以及標(biāo)本保管人姓名。3.7.5 文件存檔實(shí)驗(yàn)原始記錄表、打印數(shù)據(jù)、免疫印跡試驗(yàn)的膜反應(yīng)條帶或其照片、檢測記錄表、標(biāo)本登記、標(biāo)本保存記錄以及儀器設(shè)備維修和校準(zhǔn)記錄等都應(yīng)該妥善存檔保存15年以上。最好同時(shí)使用計(jì)算機(jī)保存各種文件和記錄。4 質(zhì)量控制（QC）4.1 質(zhì)控血清的制備和保存（以ELISA試驗(yàn)檢測HIV抗體為例）在每次實(shí)驗(yàn)中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。每一次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的一套對照血清，包括強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設(shè)置一個(gè)弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的23倍為宜。4.1.1 外部對照質(zhì)控血清的制備HIV抗體陽性和陰性血清，56 30min滅活，3000r/min，離心15min。弱陽性對照可以用HIV抗體陰性血清梯度稀釋HIV抗體強(qiáng)陽性血清并標(biāo)定后得到。按一年使用量配制（可加入不影響檢測結(jié)果的防腐劑）用0.2m濾膜過濾除菌。4.1.2 外部對照質(zhì)控血清的保存 按一周實(shí)驗(yàn)用量分裝、分類、標(biāo)記、封口、-20凍存于非自動(dòng)除霜冰箱中。 外部對照血清不可反復(fù)凍融，一旦融化后應(yīng)該存放28，供一周內(nèi)使用。4.1.3 外部對照質(zhì)控血清的使用每一次實(shí)驗(yàn)必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和穩(wěn)定性。同時(shí)可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。4.1.4 外部對照質(zhì)控物的質(zhì)量要求質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異（cv20%），并且質(zhì)控物的成分應(yīng)在穩(wěn)定狀態(tài)中。質(zhì)控物應(yīng)無菌，并不含有影響ELISA反應(yīng)的防腐劑。4.2 質(zhì)控圖的建立及應(yīng)用（以ELISA試驗(yàn)檢測HIV抗體為例）最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖，使用累計(jì)和技術(shù)或趨勢分析技術(shù)的圖形可提供系統(tǒng)偏移和漂移的狀況。4.2.1 建立質(zhì)控圖參數(shù)外部對照質(zhì)控物的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用方法對質(zhì)控物重復(fù)測定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個(gè)數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做5個(gè)批次的檢測，每個(gè)批次中不少于4個(gè)質(zhì)控物測定結(jié)果，以建立一個(gè)臨時(shí)性的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達(dá)到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時(shí)性的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。 算術(shù)平均值 ( )： 代表一組S/CO值的平均值。為了統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義，應(yīng)該采用至少20次(天)所測得的外部對照質(zhì)控血清S/CO值結(jié)果計(jì)算出平均值。 標(biāo)準(zhǔn)差(s)：是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的一個(gè)指標(biāo)，是與對照質(zhì)控血清S/CO值均值有關(guān)的預(yù)期范圍。一組S/CO值的標(biāo)準(zhǔn)差以s表示。 變異系數(shù)(cv)：是反映各次S/CO值相對于均值離散程度的一個(gè)指標(biāo)，可以用來衡量檢測的重復(fù)性或精密度。 控制限：由實(shí)驗(yàn)室根據(jù)對質(zhì)控物檢測結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差來確定。例如12S質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差；13S質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差。計(jì)算公式為： x = n s 計(jì)算公式為： ( xn - )2 s = n-1 cv 計(jì)算公式為： s cv = - x 100 % 4.2.2 繪制質(zhì)控圖質(zhì)控圖是把檢測數(shù)據(jù)與已確定的（計(jì)算出的）“控制限”進(jìn)行比較的圖，包含一條中心橫線和其上、下兩條平行的控制線，并按時(shí)間順序點(diǎn)入本實(shí)驗(yàn)室每次試驗(yàn)質(zhì)控血清的測定值。質(zhì)控圖的繪制步驟： 在常規(guī)條件下，對同一批血清連續(xù)測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數(shù)( )和標(biāo)準(zhǔn)差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。 將均值( )和標(biāo)準(zhǔn)差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來。以S/CO值作縱座標(biāo)(Y軸)，每一次(天)試驗(yàn)作橫座標(biāo)(x軸)，繪制質(zhì)控圖。 從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測結(jié)果依次點(diǎn)入該質(zhì)控框架圖中，檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)。4.2.3 質(zhì)控規(guī)則及使用實(shí)驗(yàn)室在報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果之前必須評價(jià)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計(jì)算機(jī)審核結(jié)果來決定。目前許多質(zhì)控規(guī)則已被采用，常用的是12S和13S規(guī)則。 告警（12S）：當(dāng)外部對照的S/CO值超出 +2s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。若將12S做失控標(biāo)準(zhǔn)，有較高的假失控概率，所以一般不采用。 失控（13S）：當(dāng)外部對照的S/CO值超出 +3s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部對照滴度下降造成。 位移：連續(xù)幾次（35次）外部對照S/CO值都落在均值的一側(cè)則稱為位移，提示實(shí)驗(yàn)條件發(fā)生了較大的變化。 趨勢：連續(xù)幾次（57次）外部對照S/CO值幾乎按一個(gè)方向分布時(shí)稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差，即具有高的檢出分析誤差的能力，同時(shí)應(yīng)具有較低的假失控概率。考察試驗(yàn)系統(tǒng)的可靠性應(yīng)采用多標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控方案，多規(guī)則質(zhì)控方法能提高誤差檢出，并具有低的假失控概率。其要點(diǎn)為：出現(xiàn)一次2s范圍的變化時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。出現(xiàn)下列情況時(shí)，應(yīng)暫停檢測查找原因：出現(xiàn)一次3s范圍的變化、連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2s范圍的變化、連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1s范圍的變化、連續(xù)10次結(jié)果都在1s范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。4.2.4 質(zhì)控圖的分析及失控處理實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理程序。當(dāng)質(zhì)控已有計(jì)劃并恰當(dāng)?shù)貓?zhí)行時(shí)，要求可靠的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差用于計(jì)算質(zhì)控限，將假失控概率降到最低。當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)進(jìn)行如重復(fù)質(zhì)控測定或重新分析新的質(zhì)控物不是最有效的方法，必須找出問題原因，找出解除故障的方法，并消除原因，防止將來出現(xiàn)同樣的問題。4.2.5 繪制和分析質(zhì)控圖的要點(diǎn) 要在常規(guī)條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)，用S/CO比值繪制質(zhì)控圖。對同一批質(zhì)控物連續(xù)測定得到20個(gè)數(shù)據(jù)，求均值( )和標(biāo)準(zhǔn)差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。 由專人負(fù)責(zé)建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)控分析會(huì)，討論本月的質(zhì)量控制情況。 建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號試劑盒也應(yīng)重新制作質(zhì)控圖。使用新批號或不同廠家的試劑盒必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。 發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果失控，應(yīng)填寫報(bào)告單，上交質(zhì)量負(fù)責(zé)人，分析原因并決定是否發(fā)出檢測報(bào)告。 使用新批次的外部對照質(zhì)控物時(shí)，必須重新繪制質(zhì)控圖。變異系數(shù)(cv)小于20，表示外部對照處于穩(wěn)定狀態(tài)。4.3 “即刻法”質(zhì)控“即刻法”質(zhì)控方法是在對同一批外部質(zhì)控血清連續(xù)測定3次后，即可對第3次檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。具體計(jì)算方法如下：4.3.1 將質(zhì)控血清的測定值從小到大排列：x1，x2，x3xn(x1為最小值，xn為最大值)。4.3.2 計(jì)算 和s。4.3.3 計(jì)算SI上限值 和SI下限值。SI上限=X最大值-sSI下限=-X最小值s4.3.4 將SI上限、SI下限與SI值表（表7）中的數(shù)字比較。表7 SI值表nn3sN2snn3sn2s31.161.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.88（1）當(dāng)SI上限和SI下限 n3s值時(shí)說明該值已在3s范圍之外，屬“失