中藥血清藥理學(xué)以及實驗設(shè)計思路ppt.pptVIP

中藥血清藥理學(xué)以及實驗設(shè)計思路 中藥血清藥理學(xué) 中藥血清藥理學(xué)是將中藥或中藥復(fù)方經(jīng)口服給動物灌服一定時間后采集動物血液 分離血清 用含有藥物成分的血清進行體外實驗的一種半體內(nèi)實驗方法 血漿是指血液中除血球 血小板之外的部分 是一種無色透明的液體 含有水 無機鹽 營養(yǎng)物 激素 尿酸等 血清是指血漿中除去纖維蛋白后得到的淡黃色液體 在血液凝固后才能分離出來 凝血是指凝血酶與纖維蛋白原相作用生成纖維蛋白 再與血球結(jié)合而使血液發(fā)生凝固的現(xiàn)象 血漿血清凝血 血漿血清凝血 無凝血直接離心的為血漿 有凝血再離心的為血清 優(yōu)點 防止中藥粗制劑理化性質(zhì)對體外試驗的干擾 反映藥物的代謝產(chǎn)物和給藥后產(chǎn)生的內(nèi)源性成分 便于從細胞分子水平闡述藥物的作用機制 體外實驗條件可控性強 藥物效應(yīng)易于檢測 體外培養(yǎng)體系藥物濃度與血藥濃度不確定 藥效最佳的采血時間難以確定 血清藥理學(xué)方法增加了分析藥物成分的難度 成分復(fù)雜 影響因素太多 結(jié)果重復(fù)性差 含藥血清滅不滅活 方法不統(tǒng)一 無去除血清影響的理想措施 無確定的最佳給藥方案 缺點 中藥血清藥理學(xué)步驟 實驗動物的選擇 給藥劑量 含藥血清的處理與保存 給藥方案 采血時間 血清添加量 實驗動物的選擇 動物種類 大鼠 家兔 豚鼠 動物數(shù)量 雌雄是否各半 正常生理狀態(tài)與病理狀態(tài) 實驗動物的選擇 給藥劑量 給藥劑量 臨床常用量 給藥劑量 給藥劑量 給藥方案 灌胃次數(shù)和時間間隔 各種給藥方式都是為了使藥物達到穩(wěn)態(tài)血藥濃度 從而便于藥物作用和機理的研究 由于中藥及其復(fù)方化學(xué)成分復(fù)雜 半衰期很難測定 所以采用7 10d給藥法也是權(quán)宜之計 當(dāng)然 若是進行藥物血清時效關(guān)系的研究 給藥方法又另當(dāng)別論 2020 3 10 11 可編輯 采血時間 理想的采血時間應(yīng)落在血藥濃度的高峰期 李儀奎通過對96個藥物達峰時間統(tǒng)計后提出藥后1 2h采血較為合理 最可靠的方法是先通過對少量動物進行預(yù)實驗 根據(jù)不同的實驗要求 將不同時間的采集的含藥血清進行實驗比較 再確定采血時間 含藥血清的處理與保存 藥物血清處理 滅活與否 丙酮法 乙醇法 加溫法 目前采集動物血清后 多用加溫法 經(jīng)56 30min滅活 含藥血清的保存 20 或更低溫度環(huán)境下保存 血清添加量 藥物血清加入量的逐漸增加 其藥理效應(yīng)曲線是呈正態(tài)分布狀 研究含藥血清的加入量來評價血清中藥物的真實有效濃度 設(shè)立正常血清空白對照組來排除血清本身所含干擾性物質(zhì)對實驗結(jié)果的影響 根據(jù)實驗的要求選擇動物 以及必要的藥理造模 優(yōu)選含藥血清的制備方法 采用正交試驗法等 以藥物和觀察指標(biāo)不同 需要首先對含藥血清的時效和量效進行研究 以便確定給藥方案 采血時間 血清或血漿 滅活與否 血清添加量 實驗設(shè)計思路 復(fù)方黃連注射劑血清藥理學(xué)研究以大白兔為實驗動物 采用肌內(nèi)注射復(fù)方黃連注射劑 2次 d 連續(xù)3d 末次給藥后15 30min 1 2 3h后從兔頸靜脈取血 分離含藥血清 采用反相高效液相色譜法測定含藥血清中小檗堿含量 用微量稀釋法和藥敏紙片法測定復(fù)方黃連注射劑含藥血清的抑菌能力 結(jié)果復(fù)方黃連注射劑含藥血清對耐藥性金葡菌具有明顯的抑制作用 實驗設(shè)計思路 茵陳蒿湯保肝作用的血清藥理學(xué)研究建立CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝細胞損傷細胞模型 SD大鼠為含藥血清供體 以含藥血清對損傷肝細胞增殖 WST 8法 的影響為指標(biāo) 采用正交試驗法優(yōu)選含藥血清的制備方法 并確定體系中血清添加量 以動物是否造模 取血時間 取血成分為考察因素 每個因素設(shè)2個水平 選用L4 23 正交表安排試驗 實驗設(shè)計思路 實驗設(shè)計思路 黃連解毒湯抗氧化作用的血清藥理學(xué)研究采用血清藥理學(xué)方法 研究黃連 黃芩 黃連解毒湯含藥血清對氧化應(yīng)激損傷保護作用的時間 效應(yīng)關(guān)系 并研究黃連 黃芩 黃連解毒湯提取物和小檗堿 黃芩苷純品對氧化損傷保護作用的劑量 效應(yīng)關(guān)系 黃芩的含藥血清滅活與否抗氧化作用有很大差異 兩者的時 效曲線上也有明顯不同 血清添加量過大 會有假陽性結(jié)果 造模難以成功 本實驗中以5 濃度血清造模 較為成功 實驗設(shè)計思路 荊芥 桂枝揮發(fā)油含藥血清體外抗病毒的實驗研究荊芥 桂枝揮發(fā)油含藥血清對MDCK細胞的最大無毒濃度TC0均為5 即在相應(yīng)培養(yǎng)基中血清含量為5 荊芥 桂枝揮發(fā)油含藥血清5 3 5 2 5 濃度