【畢業(yè)學(xué)位論文】（Word原稿）辣椒分子連鎖圖譜的構(gòu)建及抗疫病QTL定位-蔬菜學(xué)碩士論文

密級(jí) ： 論文編號(hào) ： 學(xué)位論文 辣椒分子連鎖圖譜的構(gòu)建及抗疫病 位 ap ap I 摘 要 辣椒是世界上最重要的蔬菜作物之一， 辣椒疫病 (.) 是一種毀滅性的土傳病害 , 在世界各地均有發(fā)生，且有逐年加重的趨勢(shì)。世界許多辣椒生產(chǎn)國(guó)已將辣椒抗 疫病育種作為辣椒育種的主要目標(biāo)之一 , 我國(guó)從 “八 五 ”開始將選育辣椒抗疫病品種列入了國(guó)家科技攻關(guān)項(xiàng)目。 本研究用抗辣椒疫病的材料 “與 綜合 園藝性狀優(yōu)良 的高 感 材料 “83及其 群體（ 144 株）為試材，采用 術(shù)，利用親本從 物組合中篩選多態(tài)性引物，在 椒分子遺傳圖譜的構(gòu)建 及 研究。本研究得到如下結(jié)果： （ 1） 從 512 對(duì) 物組合中篩選出具有多態(tài)性 的引物組合 380 對(duì) ，應(yīng)用其中的 28 對(duì)引物組合在 群體中進(jìn)行抗病性標(biāo)記的分析。得到 146 個(gè)多態(tài)性標(biāo)記，結(jié)合 子標(biāo)記（胡勇勝，碩士論文），應(yīng)用 件進(jìn)行分析，取 等于 ，構(gòu)建了一張有 12 個(gè)連鎖群， 70 個(gè)分子標(biāo)記的辣椒分子連鎖圖譜，其中 54 個(gè)為 子標(biāo)記。 圖譜覆蓋長(zhǎng)度為 每個(gè)連鎖群長(zhǎng)度在 間，標(biāo)記間平均圖距為 （ 2） 采取切莖法進(jìn)行抗病性鑒定 ，病原菌為辣椒疫霉菌 ( )長(zhǎng)沙分離株，在 養(yǎng)基上 恒溫培養(yǎng) 3 天， 濃度為 103 個(gè)游動(dòng)孢子 /種 10 天后調(diào)查發(fā)病情況。以病斑長(zhǎng)度和病斑形態(tài)進(jìn)行抗病性分級(jí)。 0 級(jí) 24 株、 1 級(jí) 29 株、 2 級(jí) 41 株、 3 級(jí) 20 株、 4 級(jí) 18株、 5 級(jí) 12 株。 （ 3） 運(yùn)用 件的區(qū)間作圖法進(jìn)行 析。應(yīng)用能，計(jì)算出顯著 值區(qū)間是 在第四連鎖群上檢測(cè)到 2 個(gè) 點(diǎn) ，一個(gè) 點(diǎn)的 為 在連鎖群上的支持區(qū)域是 0 距離最近的標(biāo)記 一個(gè) 點(diǎn)的 為 連鎖群上的支持區(qū)域 是 距離最近的分子標(biāo)記 7個(gè) 釋表型差異的貢獻(xiàn)率分別為 本試驗(yàn)的研究結(jié)果為分子標(biāo)記輔助育種提供可 參考 的標(biāo)記，為加快辣椒抗疫病優(yōu)良品種的 培育提供可 能的途徑。 關(guān)鍵詞 ：辣椒 ， 抗疫病 ， 分子連鎖圖譜 ， 分子標(biāo)記輔助育種 I is of in As a . in is a . in . in &D In a F2 44 83of 2 a of TL . as (1) 380 of 12 of 28 of to of 2 146 A of on 2 by 4 5 , 2 an (2) to . , 832 .,DA at 8 03 in 0th (to of (3) ,000on , of TL is 41TL is 41of of of 文縮略表 縮寫符號(hào) 英文名稱 中文名稱 擴(kuò)增片斷長(zhǎng)度多態(tài)性 過硫酸銨 堿基對(duì) 2 混合分離個(gè)體分析法 酶解擴(kuò)增多態(tài)序列 厘摩爾根 十六烷基三甲基溴銨 脫氧核苷三磷酸 溴化乙錠 乙二胺四乙酸 標(biāo)記輔助選擇 聚丙烯酞胺凝膠電泳 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 脈沖電場(chǎng)凝膠電泳 聚乙烯毗咯烷酮 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性 限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性 序列特異擴(kuò)增區(qū)域 簡(jiǎn)單重復(fù)序列 硼酸電泳緩沖液 緩沖液 N,N,N,N四甲基乙二胺 錄 第一章 文獻(xiàn)綜述 . 1 1 1 辣椒疫病的研究概況 . 1 1 1 1 辣椒疫病 . 1 1 1 2 辣椒疫病抗源的篩選 . 1 1 1 3 辣椒疫病接種鑒定方法 . 2 1 1 4 辣椒抗疫病遺傳規(guī)律的研究 . 2 1 2 分子標(biāo)記技術(shù) . 3 1 2 1 分子標(biāo)記的類型 . 3 1 2 2 分子標(biāo)記在辣椒育種上的應(yīng)用 . 4 1 2 3 術(shù)在蔬菜育種中的應(yīng)用 . 4 1 3 分子遺傳圖譜 . 6 1 3 1 親本選擇 . 6 1 3 2 作圖群體 . 6 1 3 3 作圖群體的大小 . 7 1 3 4 辣椒分子遺傳圖譜的研究進(jìn)展 . 7 1 4 數(shù)量性狀基因定位方法及應(yīng)用 . 8 1 4 1 位方法 . 8 1 4 2 辣椒抗疫病的 析 . 9 1 5 研究目的、意義及試驗(yàn)設(shè)計(jì) . 10 1 5 1 研究目的及意義 . 10 1 5 2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) . 11 第二章 辣椒分子連鎖圖譜的構(gòu)建 . 12 2 1 材料與方法 . 12 2 1 1 試驗(yàn)材料 . 12 2 1 2 模板 提取 . 12 2 1 3 析及反應(yīng)體系的優(yōu)化 . 12 2 1 4 標(biāo)記數(shù)據(jù)記錄 . 16 2 1 5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 . 16 2 2 結(jié)果與分析 . 16 2 2 1 提取 . 16 2 2 2 應(yīng)體系的優(yōu)化 . 17 2 2 3 利用親本進(jìn)行 物篩選 . 17 2 2 4 構(gòu)圖分子標(biāo)記的篩選 . 19 2 3 辣椒分子連鎖圖譜的構(gòu)建 . 22 2 4 小結(jié) . 22 第三章 辣椒抗疫病 位 . 24 3 1 材料與方法 . 24 3 1 1 試驗(yàn)材料 . 24 3 1 2 辣椒疫病人工接種鑒定 . 24 3 1 3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 . 24 3 2 結(jié)果與分析 . 25 3 2 1 抗病性鑒定結(jié)果 . 25 2 2 析 . 29 3 3 小結(jié) . 30 第四章 討 論 . 32 4 1 試驗(yàn)親本及作圖群體的選擇 . 32 4 2 辣椒疫病抗病性鑒定方法 . 32 4 3 辣椒分子遺傳圖譜的構(gòu)建 . 32 4 4 辣椒抗疫病 析 . 33 第五章 全文結(jié)論 . 32 5 1 采用切莖法進(jìn)行辣椒疫病的人工接種及抗病性鑒定 . 32 5 2 構(gòu)建辣椒分子連鎖圖譜 . 32 5 3 初步檢測(cè)到 2 個(gè)辣椒抗疫病性狀的 . 32 參考文獻(xiàn) . 35 附錄 . 38 致謝 . 41 作者簡(jiǎn)介 . 42 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 1 第一章 文獻(xiàn)綜述 椒疫病的研究概況 辣椒 (.)是一種重要的蔬菜作物 ，為農(nóng)民創(chuàng)造了很高的經(jīng)濟(jì)效益， 自 2002年以來我國(guó)的辣椒播種面積均在 130 萬(wàn)公頃以上， 在世界上排名第一 ，并且 種植 面積還在不斷的增加。 該病于 1918 年首次在美國(guó)新墨西哥洲發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)已在世界各辣椒產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生。近年來，國(guó)內(nèi)很多地方都有大面積發(fā)生的報(bào)道，給辣椒生產(chǎn) 帶來了很大的損失，使 農(nóng)民的收入 受 到了嚴(yán)重的影響，我國(guó)從 “八五 ”開始將選育辣椒抗疫病品種列入了國(guó)家科技攻關(guān)項(xiàng)目。 椒疫病 辣椒疫病是由辣椒疫霉菌引起的一種毀滅性的土傳病害。 辣椒疫霉菌（ .）是由 1922 年命名的，屬于鞭毛菌亞門疫霉屬。 辣椒疫霉菌的寄主范圍很廣，除可侵染辣椒外，還可侵染番茄、茄子等蔬菜。辣椒疫病是一種土傳病害，病菌主要以卵孢子、厚垣孢子在病殘?bào)w、土壤及種子上越冬，越冬后的病原菌在適合的條件下從植株根部入侵，病菌也會(huì)隨著雨水或 灌溉進(jìn)行傳播。 溫度對(duì)該菌潛育期影響較大，潛育期最適溫度 25 35 。不同的季節(jié)土壤中病原菌的數(shù)量也明顯不同（徐秉良 等 ， 1996）， 黃鳳蓮等 對(duì)辣椒疫霉病田土壤進(jìn)行病菌分離、菌株配對(duì)培養(yǎng)、越冬存活形式等研究，發(fā)現(xiàn)病田土壤中的疫霉菌數(shù)量有明顯的季節(jié)性變化，以 5 8 月最多，冬季和初春最少（黃鳳蓮 等， 1999）。 辣椒疫病是一種 易暴發(fā)、易流行、毀滅性很強(qiáng)的病害，該病一旦大暴發(fā)就 會(huì)導(dǎo)致 辣椒的大面積減產(chǎn)，甚至絕產(chǎn) ， 所以在辣椒感病前或感病初期進(jìn)行防治就特別重要。一般來講，在感病初期采取的是化學(xué)防治或生物防治，化學(xué)防治 應(yīng) 在植株地上部分發(fā)現(xiàn)病癥前用藥，如果在疫病大面積發(fā)生時(shí)再用藥，就基本上沒有效果；生物防治采用對(duì)辣椒疫霉菌有較強(qiáng)的抑制作用的生防菌 在土壤和植物根際建立起有效的群體，控制或減少辣椒疫霉病菌孢子的產(chǎn)生，從而控制辣椒疫病的流行。 在 病害 發(fā)生后進(jìn)行防治 通常 效果 都不理想，所以至今還沒有一種有效的疫病防治方法，而培育抗病品種可以解決這一問題。 培育抗病品種的主要方法 仍然是常規(guī)育種 ，但常規(guī)育種在進(jìn)行抗性選擇時(shí)操作程序較為繁瑣，而且選育時(shí)間較長(zhǎng)，也易受環(huán)境條件的影響。隨著生物技術(shù)的 逐漸成熟 ，通過生物技術(shù)選育抗病品種已逐漸成為重要 的防治手段之一，即 子標(biāo)記輔助育種。 椒疫病抗源的篩選 培育抗病品種的 關(guān)鍵 是尋找合適的抗源，有了合適的抗源材料，就為 抗 病品種的培育打下了良好的基礎(chǔ)。 尖辣椒一般對(duì)疫病的抗性較強(qiáng)，甜椒大多不抗病。尋找優(yōu)良的辣椒疫病的抗源 一般是在現(xiàn)有的辣椒主栽品種或 野生種 中 尋找及人工誘變。 目前 我國(guó)利用苗期灌根法鑒定了 2061份辣、甜椒種質(zhì)資源對(duì)疫病的抗性，發(fā)現(xiàn)達(dá)到中抗以上的材料有 93份，其中可做抗源的有 9份（李振歧等，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 2 2005） （表 1） 。 表 1 我國(guó)篩 選的辣椒抗疫病材料 to of 全國(guó)辣椒科研育種工作者的共同努力下，采用合適的辣椒抗疫病的材料， 現(xiàn) 已育成了一批優(yōu)良的抗（耐）疫病的辣、甜椒品種，其中包括蘇椒 5 號(hào)、甜雜 6 號(hào)、中椒 5 號(hào)、碧玉、 85 1、西雜 1 號(hào)、西雜 2 號(hào)、 9185、湘研 2 號(hào)、湘研 3 號(hào)、湘研 5 號(hào)、哈雜椒 1 號(hào)等（李樹德， 1995）。 椒疫病接種鑒定方法 準(zhǔn)確可靠的抗病性鑒定結(jié)果是開發(fā)抗病分子標(biāo)記的基礎(chǔ)。 “八五 ”國(guó)家 攻關(guān)項(xiàng)目課題組（ 1992）制定了辣椒苗期對(duì) 簡(jiǎn)述如下 ： 選擇本地區(qū)致病力中等偏上 、 來源于青椒上的辣椒疫霉用于接種鑒定。接種體的制備 ， 推薦使用 養(yǎng)基或 V 8 汁液體培養(yǎng)基 ， 25 28 條件下 , 前者光照培養(yǎng) 7 10 d， 后者先暗培養(yǎng) 3 4 d 后 ， 再培養(yǎng) 3 4 d。 近年來，一些學(xué)者對(duì)影響抗病性鑒定結(jié)果的因素做了進(jìn)一步的 研究， 林柏青等 （ 1994） 提出單株根際灌根接種 3000個(gè)游動(dòng)孢子 , 與 “八五 ”攻關(guān)要求的 3一致，但認(rèn)為接種苗齡應(yīng)使用 60日齡幼苗； 毛愛軍 （ 1998） 提出接種量應(yīng)為 5，接種苗齡為 8究發(fā)現(xiàn)，接種方法、接種體濃度、辣椒生育期、接種時(shí)的環(huán)境溫度等對(duì)品種的抗病性有較大的影響 （林柏青等， 1994）。易圖永等比較了離體葉片接種、切莖接種、游動(dòng)孢子液灌根接種 3種方法對(duì) 8 個(gè)辣椒品種 (品系 )的影響。其中離體葉片接種法是從田間采集葉片進(jìn)行室內(nèi)鑒定，能夠在短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)多個(gè)品種，并且對(duì)植株的生長(zhǎng)無明顯影響，最適合對(duì)種質(zhì)資源稀少株的生長(zhǎng)無明顯影響，最適合對(duì)種質(zhì)資源稀少的品種進(jìn)行抗疫病鑒定； 切莖接種法操作簡(jiǎn)單，可以測(cè)量病斑的長(zhǎng)度，反映病斑的擴(kuò)展 速度，適宜對(duì)抗病性進(jìn)行量化；游動(dòng)孢子液灌根接種法基本上模擬田間病害的發(fā)生過程， 最能反映品種的真實(shí)抗病性，但工作量大，操作較復(fù)雜 （易圖永等， 2003） 。 所以 這 3種方法均能用于鑒定辣椒對(duì)辣椒疫霉菌的抗病性 在實(shí)驗(yàn)中可根據(jù)自己的實(shí)際情況選擇合適的接種鑒定方法。 椒抗疫病遺傳規(guī)律的研究 辣椒疫病的抗病機(jī)制比較復(fù)雜，最早開始對(duì)辣椒抗疫病遺傳規(guī)律進(jìn)行研究的是 et 1967） ,他從 1967 年開始研究 ,認(rèn)為辣椒抗疫病是由兩個(gè)顯性基因控制的。在隨后的幾十年中，有許 多 學(xué)者也致力于辣椒抗 疫病遺傳規(guī)律的研究，認(rèn)為辣椒抗疫病呈遺傳多樣化的特點(diǎn)，不同的材料名稱 選單位 of 料名稱 選單位 of 119 北京農(nóng)業(yè)大學(xué)蔬菜科學(xué)系 牛角椒 黑龍江省哈爾濱市農(nóng)科所 蘇省農(nóng)科院蔬菜研究所 79 號(hào) 遼寧省農(nóng)科院園藝研究所 941001 天津市農(nóng)科院蔬菜研 究所 5904 湖南省農(nóng)科院蔬菜研究所 93國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所 京市蔬菜研究所 關(guān)中線椒 西北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝系 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 3 抗病品種，甚至不同的株系，其抗病性的遺傳方式也會(huì)有差異。一般認(rèn)為辣椒疫病的抗病性是由：?jiǎn)位蜻z傳、寡基因遺傳或多基因遺傳。 多年來，許多學(xué)者應(yīng)用不同的抗病材料進(jìn)行了辣椒抗疫病遺傳規(guī)律的研究，作為研究對(duì)象的抗病材料基本上都屬于 。 認(rèn)為辣椒疫病抗病性是由單基因控制的，但是由一個(gè)顯性基因還是一個(gè)隱形基因控制沒有得到統(tǒng)一； 人認(rèn)為是由寡基因，即兩個(gè)顯性基因或兩個(gè)隱形基 因控制；進(jìn)入 90 年代后，大多數(shù)學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn)都傾向于多基因控制。之所以多位學(xué)者研究得到的結(jié)論不同，可能是由于在某些辣椒材料 中 水平抗性和垂直抗性并存，而且辣椒疫霉菌不同的生理小種的致病力也由差異。此外，不同的抗病性鑒定方法以及接種鑒定時(shí)的環(huán)境條件的差異，都會(huì)導(dǎo)致得到不同的結(jié)果。 子標(biāo)記技術(shù) 分子標(biāo)記是在 繼形態(tài)學(xué)標(biāo)記 、 細(xì)胞學(xué)標(biāo)記及生化標(biāo)記之后出現(xiàn)的 ， 經(jīng)過二十多年的發(fā)展，分子標(biāo)記已廣泛地應(yīng)用于種質(zhì)資源遺傳多樣性研究、品種品系鑒定、遺傳圖譜構(gòu)建、目的基因的定位和克隆以及標(biāo)記輔助選擇育種等各個(gè)方面。 子標(biāo)記的類型 近年來用于蔬菜遺傳育種上的分子標(biāo)記越來越多 ， 分子育種與常規(guī)育種結(jié)合的方式已經(jīng)成為育種工作主要的發(fā)展趨勢(shì) 。 常用的分子標(biāo)記包括 術(shù) (擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性 )、 術(shù) (隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性 微衛(wèi)星技術(shù) (簡(jiǎn)單重復(fù)序列 )等等， 每種分子標(biāo)記技術(shù)都有其優(yōu)缺點(diǎn)，可根據(jù)研究?jī)?nèi)容采用適合的分子 標(biāo)記技術(shù)。 基本原理是基因組 用限制性內(nèi)切酶切割 ， 然后將雙鏈接頭連接到 段的末端 ， 通過選擇在 3端分別添加 1 3 個(gè)選擇性堿基的不同引物 ， 選擇性地識(shí)別具有特異配對(duì)順序的酶切片段與之結(jié)合 ， 從而實(shí)現(xiàn)特異擴(kuò)增 。 然后用聚丙烯酰銨凝膠電泳將擴(kuò)增的 段分離。術(shù)近年來被廣泛應(yīng)用在圖譜的構(gòu)建、品種的鑒定等很多方面。 優(yōu)點(diǎn)主要是所需少；多態(tài)性檢測(cè)能力高， 能檢測(cè)酶切位點(diǎn)不同造成的多態(tài)性，又能檢測(cè)隨機(jī)選擇堿基造成的多態(tài)性；簡(jiǎn)單高效， 次選擇擴(kuò)增就能比較幾十甚至 上百個(gè)位點(diǎn)；分辨率高，增片段短，片段多態(tài)性檢出率高。 有自身的缺點(diǎn) ： 技術(shù)流程長(zhǎng)、難度較大，對(duì)操作人員的技術(shù)水平要求高；模板反應(yīng)遲鈍，譜帶可能發(fā)生錯(cuò)配與缺失；成本較高。 以一個(gè)人工合成的隨機(jī)寡核苷酸序列為引物 ， 通過凝膠電泳分析擴(kuò)增產(chǎn)物 增片段多態(tài)性反應(yīng)了基因組相應(yīng)區(qū)域的 板 15 25純度要求不高； 事先無需知道 沒有種屬的特異性 ， 一套引物可適用于不同基因組分析 ； 快速 ， 無需克隆制備、同位素標(biāo)記、 10年來， 點(diǎn)是擴(kuò)增產(chǎn)物易受反應(yīng)條件的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性差，這些缺點(diǎn)限制了其應(yīng)用。 6個(gè)微衛(wèi)星長(zhǎng)度一般小于 同品種中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 4 或個(gè)體核心序列的重復(fù)次數(shù)不同，但重復(fù)序列兩側(cè)的 用與核心序列互補(bǔ)的引物，通過 復(fù)性好、共顯性、在基因組中隨機(jī)分布、操作簡(jiǎn)單。但是由于 而需要大量的人力、物力和時(shí)間，另外其種屬特異性強(qiáng)，開發(fā)所需的費(fèi)用高昂，因此一些實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了合作，共同開發(fā)微衛(wèi)星引物。 子標(biāo)記在辣椒育種上的應(yīng)用 分子標(biāo)記技術(shù)在國(guó)內(nèi)的廣泛應(yīng)用使得辣椒育種得到了很快的發(fā)展， 現(xiàn) 已將 子純度的鑒定、遺傳圖譜的構(gòu)建和基因定位等方面的工作。李麗等 （ 2004） 應(yīng)用 記的方法對(duì)甜 (辣 )椒進(jìn)行了多態(tài)性分析。黃三文等 （ 2001） 對(duì)辣椒 應(yīng)的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行了篩選和優(yōu)化 ， 確定了一個(gè)簡(jiǎn)單、高效、相對(duì)穩(wěn)定的 統(tǒng) ， 并篩選出 12 個(gè)較穩(wěn)定的 記 ， 可以用于 “中椒 ”系列辣椒的 9 個(gè)雜交種的純度鑒定。在基因定位方面，已有多個(gè)辣椒抗病及其他性狀基因被定位，大多數(shù)的基因定位都是采用 子標(biāo)記方法，也有少數(shù)基因定位應(yīng)用的是 其它分子標(biāo)記技術(shù) （表 2） 。 術(shù)在蔬菜育種中的應(yīng)用 辨率高等 優(yōu)點(diǎn)，在蔬菜育種上得到了廣泛地應(yīng)用，主要應(yīng)用在品種純度鑒定、親緣關(guān)系分析、圖譜構(gòu)建及基因定位等方面上。 種純度鑒定 在親緣關(guān)系較近，遺傳背景較窄的蔬菜品種純度鑒定方面， 比常規(guī)的根據(jù)田間表型性狀的鑒定方法相比，利用分子技術(shù)鑒定有著簡(jiǎn)單、方便、用時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)。 常被用來進(jìn)行品種純度的鑒定。 有研究者 利用 個(gè)甘藍(lán)雜交組合及其 到了清晰的 雷等， 2001）。 緣關(guān)系分析 利用分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行親緣關(guān)系的分析是在 受外界環(huán)境的干擾，準(zhǔn)確性高。孫德嶺等（ 2001）利用分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)白菜類蔬菜間的親緣關(guān)系進(jìn)行了研究，使用 10對(duì)選擇性引物組合，擴(kuò)增出 4173條擴(kuò)增帶，并對(duì)其進(jìn)行聚類分析，結(jié)果表明：蕪菁與結(jié)球白菜和不結(jié)球白菜親緣關(guān)系遠(yuǎn)；而結(jié)球白菜與雞冠菜和毛白菜親緣關(guān)系較近，與其它不結(jié)球白菜親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。顧興芳等（ 2000）利用 果認(rèn)為： 用該技術(shù)對(duì)黃瓜進(jìn)行遺傳多樣 性和物種親緣關(guān)系分析是完全可行的。 譜構(gòu)建 分子遺傳圖譜的構(gòu)建是蔬菜遺傳研究的重要內(nèi)容之一，建立有效的、準(zhǔn)確的遺傳圖譜是基因定位、基因克隆的基礎(chǔ)。 復(fù)性好，且在一次相互實(shí)驗(yàn)中可觀察到大量的 以目前 盧剛等利用白菜和蕪菁雜交建立的 建了含 131個(gè) 蓋 1810 9（盧 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 5 表 2 辣椒主要抗病基因及其它性狀的 位 in 狀 關(guān)基因 圖群體 ( 數(shù)目 ) 圖標(biāo)記 （ 數(shù)目） 在染色體or 獻(xiàn) 節(jié)花數(shù) 22(46) 218) 2， P， 1993 抗 69) 117) , 1995 果實(shí)形態(tài) H(169) 117) , 1995 控制辣味 c 69) 117) , 1995 控制果實(shí)顏色 2(151) , 1998 抗疫病 18H(94) 9 同工酶 1 表型 5 003 抗 2(23) 4 ， 1996 抗 2(23) 4 ， 1996 抗 ，1996 抗 ，1996 抗 H(94) 38 ， 1997 抗 2(151) ， 1999 抗細(xì)菌性斑點(diǎn)病 H， 1999 抗 2(153) 10 ， 2000 抗 3(29) 0 C， 2000 抗 2(200) 0 ， 2000 育性恢復(fù) 2 X， 2000 抗白粉病 5H(101) 4 5,6,9,10,12 ， 2003 果實(shí)相關(guān)性狀 53(183) B， 2001 產(chǎn)量相關(guān)性狀 848) 2 U， 2003 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 6 剛等， 2002）。 2群體為作圖群體，將 177個(gè)標(biāo)記（ 建了一張辣椒分子遺傳圖譜（ B et 2001）。 因定位 基因定位是以后基因分離及克隆的基礎(chǔ)，質(zhì)量性狀的基因定位一般是利用近等基因系或分離群體分組分析法（ （ 1995）利用 術(shù)結(jié)合 檢測(cè)與番茄抗葉霉病基因 密連鎖的標(biāo)記，在 78 對(duì)引物所產(chǎn)生的 42000 個(gè) 段中，發(fā)現(xiàn)了 3 個(gè)標(biāo)記與 因表現(xiàn)共顯性，通過轉(zhuǎn)座子標(biāo)記法分離 因，分析含此基因的質(zhì)?？寺。瑢⑵渲?2 個(gè) 因 位點(diǎn)兩側(cè)約 區(qū)域內(nèi)。蔬菜很多的農(nóng)藝性狀和抗病性狀都是數(shù)量遺傳，數(shù)量性狀的基因定位，即 位也被研究得越來越多。郜剛等（ 2005）運(yùn)用 記技術(shù)對(duì)馬鈴薯青枯病抗性基因進(jìn)行了定位。鄭曉鷹等（ 2002）將大白菜耐熱品種 177 和熱敏感品種 276進(jìn)行雜交，從雜交后代中獲得遺傳性穩(wěn)定的重組近交系群體，采用 術(shù)并結(jié)合 同工酶方法鑒定了與大白菜耐熱數(shù)量性狀相關(guān)的遺傳標(biāo)記，單因子方差分析和多元線性回歸分析檢測(cè)到了 9 個(gè)與耐熱性 密連鎖的分子標(biāo)記。 1 3 分子遺傳圖譜 在蔬菜作物中， 目前已構(gòu)建了番茄、馬鈴薯、辣椒、萵苣、甘藍(lán)、胡蘿卜、芥菜、豌豆、黃瓜、白菜 、 芹菜等約 20種蔬菜遺傳圖譜 ， 其中有些圖譜包含了上千個(gè)分子標(biāo)記（陸朝福等， 1995）。其中番茄和馬鈴薯的遺傳圖譜相對(duì)其他蔬菜作物更為飽和。 本選擇 親本的選擇直接影響到構(gòu)建連鎖圖譜的難易程度及所建圖譜的適用范圍。一要選擇 態(tài)性好的作為親本，這樣圖譜上連鎖的標(biāo)記就會(huì)越多，圖譜的經(jīng)濟(jì)價(jià)值也就越大；二要選擇純度較高的材料作為親本； 三要考慮親本雜交后代的可育性。在已構(gòu)建成的辣椒分子遺傳圖譜中， 種間親本的多態(tài)性 較 好（ et 1993； et 1999） ，但 如果從育種的實(shí)際意義來考慮，種 內(nèi) 圖譜則更有優(yōu)越性，較為常用的抗源材料有 些材料都屬于 et 995； et 002； 張寶璽， 2003） 。 圖群體 到目前