異常色譜行為與襯管的關系(精)

異常色譜行為與襯管的關系 江西省日博工貿有限公司2006年11月 1 拖尾峰 可能原因 是柱和進樣襯管吸附樣品組分或污染鍍金進樣口密封墊 注射器針頭撞擊進樣襯管內填充物破碎 柱末端切口不整齊 會使樣品產生吸附 襯管斷裂 排除方法 換新的去活襯管 拆下色譜柱 清除污染物 用性能可靠的毛細管熔融石英切割工具將柱切成齊口 然后重新安裝色譜柱 調節(jié)進樣口總流量在40ml min以上 2 前伸峰 leadingpeaks 可能原因 樣品分解 排除方法 用新的去活襯管 3 出峰后基線上升 可能原因 樣品分解 排除方法 用新的去活襯管 4 大峰后基線變化 可能原因 色譜柱末端和襯管不在同一軸線上 排除方法 檢查末端和進樣口襯管安裝 必要時調整它 使柱入口端和襯管在同軸上 5 未分離峰 可能原因 色譜柱或進樣襯管污染或柱效變壞 排除方法 用新的去活襯管 液相色譜系統(tǒng)的故障有多少與溶劑和樣品的過濾有關 1 過濾膜的類型 聚四氟乙烯膜 一般用于有機相 幾乎可以和所以的溶劑 酸和堿相容 尼龍66膜 一般用于有機相 可以和大多數(shù)溶劑 有機物和水相容 建議不要用于強酸 二氯甲烷和DMF 纖維素硝酸酯 一般用于水相 主要用于過濾器 可以和多數(shù)水性和非水性溶劑相溶 但不是所有的水性和非水性溶劑 再生纖維素膜一般用于HPLC生物樣品和有機溶劑的制備和過濾 是通用型HPLC過濾器 具有廣泛的溶劑相溶性 與蛋白質鍵合作用低 非常低的可萃取性 2 在樣品溶液中有顆粒存在會造成故障時要用膜進行過濾 3 流動相 溶劑的污染 特別是水相緩沖溶液的污染是HPLC中常見的問題 水相介質是微生物生長的良好環(huán)境 而微生物可以堵塞HPLC系統(tǒng) 并造成背景噪音 4 溶劑入口過濾頭 未經過濾的溶劑或溶劑瓶中生長的微生物都會降低溶劑入口過濾頭的壽命 并影響泵性能 一般3個月清洗或更換 5 測試溶劑入口過濾頭是否堵塞 將溶劑入口管從過濾頭和瓶蓋組件處撥下 如果管線中充滿溶劑 當過濾頭性能良好時 溶劑會自由地從管中滴出 如果堵塞 就沒有溶劑或只有很少量的溶劑從管中滴出 6 不要使用超聲清洗溶劑入口過濾頭 否則玻璃顆?？赡苁瞧扑樵斐啥氯?氣相色譜毛細管柱安裝 江西日博工貿有限公司2006年11月 熔融硅毛細管柱組成 琥珀褐色 或淡黃色 聚酰亞胺 CO CH2 34CON CH CH2 5NH n 涂漬在管外壁保護管防止其破裂 熔融硅空心管 均勻涂布在管內壁的固定相 常用的有聚硅氧烷Si CH3 3O Si CH3 3O nSi CH3 3 聚乙二醇 HO CH2CH2O nH 固體吸附劑多孔層開管PLOT Al2O3 分子篩 苯乙烯基苯 二乙烯基苯 乙二醇二甲基丙烯酸酯 柱安裝工具 柱切割工具如鉆石 陶瓷片 寶石鉛筆刀 適當?shù)牟槐Ａ艋衔?柱測試物 電子流量計 電子檢漏計 后三種為可選件 安裝步驟1 檢查凈化管 載氣 隔墊 襯管 必要時更換凈化管 在進樣口換新隔墊 必要時換襯管及鍍金平板 特別是進了大量臟樣品和分析活性高化合物后 柱的固定液室溫下容易被氧化損壞 可以使用充載氣保存延長使用壽命和減少噪音 推薦使用帶有指示色的高容量的脫氧管 帶有指示色的脫水管應安裝在脫氧管前 安裝步驟2 套上柱螺母和密封墊 切割柱 在柱兩端安裝柱螺母和密封墊 將柱固定在柱箱中 銘牌朝外 切去柱兩端約5cm 切割方法 戴不起毛手套 手指將柱固定 用切割工具在適當位置劃一切口 不能來回切割 也不要用切割工具完全切斷 兩手相向掰去柱切割部分 用放大鏡檢查切口 應邊緣平整 無毛刺等 否則重新切割 安裝步驟3 進樣口 檢測器處柱的安裝 柱安裝在柱箱中 邊緣不要與柱箱接觸 展開柱使之成圓滑的弧形 避免在緊固時使柱斷裂 依據進樣口類型和檢測器要求確定柱露出長度 用手旋緊柱螺母 再用扳手旋緊 但不要超過1 4圈 裝好后不要再旋動柱 密封墊在加熱后會結合更緊密 安裝步驟4 開載氣 調整柱頭壓獲得合適的載氣流量 下表是推薦值 實際使用的可根據載氣線速度確定 將柱出口端浸入正已烷 可見氣泡 否則 檢查載氣 流量閥 檢漏 裝柱前揮去殘留溶劑 載氣種類選擇 對毛細柱首選的載氣為高純氦和氫氣 不推薦使用氮氣 對極小口徑的如0 1mm內徑的毛細柱使用氫氣 載氣純度至少99 995 并且氧含量低于1ppm 但應注意氫氣混合在空氣中濃度在4 10 時容易發(fā)生爆炸 安裝步驟5 檢測器端柱安裝 按步驟2和3進行安裝 用流量計測定柱載氣流量 安裝步驟6 檢漏 GC系統(tǒng)在加熱前要檢漏 電子檢漏計是最可靠的和最合適的 不要使用皂沫 可以適當使用異丙醇與水 5 5 的混合液 安裝步驟7 確定載氣流量和正確的柱安裝 有EPC電子流量控制的可以直接設定載氣速度或流量 但應輸入正確的柱內徑 可以通過附在柱盒內的柱效能測定結果表獲得 適當?shù)妮d氣流量在步驟4獲得 也可通過不保留化合物進行測定計算獲得 下表是不同檢測器的一些不保留化合物 注 以上化合物在PLOT柱上大多數(shù)都有保留 不要進液體 使用非常低的頂空氣進樣 柱溫低于100 乙腈在多數(shù)柱上都有保留 必須設定柱溫在100 以上 測定步驟 設定柱溫35 40 在分流模式下快速進樣1 2ul上述推薦的不保留化合物 在使用大體積進樣或冷柱頭進樣模式時 應將其稀釋以免使檢測器飽和 觀察到的應是尖銳的對稱峰 不分流進樣時會又拖尾現(xiàn)象 若沒有峰 則檢查載氣 流量控制系統(tǒng) 檢測器 記錄儀 進樣針等 峰拖尾嚴重 則可能是進樣口漏 柱安裝不好 分流比太小 安裝步驟8 柱老化 通載氣15min后升溫至低于柱最高使用溫度10 20 但必須高于操作溫度 絕對不能超過柱最高使用溫度 到達設定溫度后觀察基線 在5 30min基線上升 30 90min后下降 在老化溫度下1 3小時后基線平直 若2 3小時后基線仍不穩(wěn)定則停止老化 產生原因可能由載氣管路 進樣區(qū)泄露或系統(tǒng)受污染引起 檢查各部分再進行老化 產生原因可能由載氣管路 進樣區(qū)泄露或系統(tǒng)受污染引起 檢查各部分再進行老化 極性固定相和液膜較薄的老化時間要比非極性和厚液膜的長 而PLOT柱老化有其特殊性 可參考購買說明書 對ECD MSD等檢測器老化時不能連接檢測器進行 但在老化后必須切去10 20cm后才能連接檢測器 安裝步驟9 載氣線速度精確設定 對毛細柱 載氣線速度直接影響保留時間和柱效 沒有EPC控制的GC 溫度的改變載氣線速度也改變 在設定線速度時首先應確定分析時所需溫度 常使用柱起始溫度 在步驟7中選定相應物質進樣1 2ul并按下式進行計算得到線速度 調整柱頭壓直至得到所需的線速度 u 平均線速度 L 柱長 tr 保留時間 推薦的平均線速度 氦氣 30 40cm sec 氫氣 50 80cm sec 有EPC的控制GC 可以通過計算機工作站或GC鍵盤直接設定并能維持恒定 需要做的是進行柱尺寸的校正 柱內徑可從柱信息表上獲得 而長度需要進一步校正 安裝步驟10 柱流測試 對老化后的柱進行空運行 不進樣 獲得色譜圖 起始溫度40 50 以10 20 min的升溫速率升至老化溫度并維持10 15min 在譜圖上應該不出現(xiàn)任何峰 有峰出現(xiàn)表明受到污染 最常見的進樣口部分 安裝步驟11 運行測試樣 進樣測試樣品進一步了解系統(tǒng)性能 對不同檢測器有相應的測試樣品 測試樣品一般在不同柱上都有響應并且常常是混合物 對新柱而言色譜圖不好則表明安裝 操作或儀器出了問題 在樣品分析前必須解決 柱使用時應注意的幾點 為最大限度延長柱壽命 在分析完柱溫應在100 以下待命 用隔墊封好柱兩端保存在柱盒中 下次使用時切去一小段防止進入柱中的隔墊碎些影響測定 化學物質的相容性 對鍵合的或交鏈的固定相能防水和有機溶劑 無機酸 HCL H2SO4 H3PO4 HNO3等 和堿 KOH NaOH 會極大損害柱 一旦發(fā)生可截去1m 柱的沖洗 非鍵合相的柱不能用溶劑沖洗 如DX 1 DX 2 DX 4 SE 30 SE 52 SE 54 Carbowax ov 351 Cyclodex B Cyclosil B HP 20 HP 101 HP 17 HP Chiral 限制溫度 柱給出的有最低和最高使用溫度 最高使用溫度有兩種 恒溫使用的溫度低 可長時間使用 在程序升溫使用的溫度下一般不要超過10min 怎樣正確選擇分流 不分流進樣 當感興趣的組分在500ppm左右或更高時 最好選擇分流進樣 而不分流進樣則是GC進行痕量分析的有效進樣方式 要得到長期一致的結果 需要正確選擇隔墊 襯管和密封墊圈 并且要知道何時更換 隔墊的壽命取決于進樣的頻率 針的質量和隔墊的成分 隔墊漏氣的征兆包括保留時間增長或漂移 響應值減弱 柱頭壓力減少并伴隨著檢測器信號噪音加大 隔墊被污染的征兆是和樣品 溶劑 進樣隔墊或色譜柱無關的外來峰出現(xiàn) 在襯管上的活化點會吸附樣品 會造成拖尾并會大大降低靈敏度和再現(xiàn)性 在使用不分流進樣或在分析稍有極性的化合物時一定要用脫活的襯管 但即使使用經過脫活的襯管在開始時也可能出現(xiàn)活性 此時就要清洗襯管或更換 密封墊圈一般都在高溫和惰性氣流里進行了老化處理 使用時其收縮作用達到密封 隔墊類型 1 流失和溫度優(yōu)化隔墊 可減少粒化 低流失和高溫分析時性能最佳 用于進樣口溫度高達400 分析重烴混合物 通常在50 100次進樣之后更換 2 綠色隔墊 減少?；?用于進樣口溫度低于350 分析半揮發(fā)混合物 通常在500 100次進樣之后更換3 通用紅色隔墊 低流失和長壽命的經濟實用型 用于進樣口溫度低于350 分析半揮發(fā)混合物 通常在100次進樣之后或出現(xiàn)漏氣時更換 4 MerlinMicroseal隔墊 超長壽命隔墊無顆粒 用于中等色譜溫度下的高通量 常規(guī)分析 通常在2000次進樣之后或出現(xiàn)漏氣時更換 密封墊類型 1 鍍金密封墊 比不銹鋼密封墊惰性更強 適合大多數(shù)不分流進樣器的流量 用于不分流進樣 或總流量低于200ml min的分流進樣 在分析物信號降低或出現(xiàn)明顯拖尾時更換 鍍金密封墊 十字孔 比不銹鋼密封墊惰性更強 適合大多數(shù)不分流進樣器的流量 用于分流進樣 總流量大于200ml min的分流進樣 在分析物信號降低或出現(xiàn)明顯拖尾時更換 襯管類型 1 分流 玻璃毛和錐形底部 提高了進樣精度 用于分流進樣 特別是使用電子壓力控制 EPC 的進樣口 在分析物精度降低或襯管污染時更換 2 單錐形不分流 去活化 將流量集中在柱子上 用于大部分不分流進樣 在分析物影響顯著降低或明顯拖尾時更換 3 單錐形 玻璃毛不分流 去活化 將流量集中在柱子上 玻璃毛能減少不揮發(fā)殘渣的影響 用于分析臟的樣品 但玻璃毛可能使活性樣品出現(xiàn)問題 在分析物拖尾嚴重時更換 雙錐形 去活化不分流 去活化 將流量集中在柱子上 有助于防止反沖 用于高度揮發(fā)的溶劑 進樣器溫度250 以上 水 甲醛 二氯甲烷 或高溫下大體積進樣 在分析物響應顯著降低或明顯拖尾時更換 FID噴口的清洗 通常更換噴口比清洗噴口更方便 尤其是對嚴重污染的噴口 在清洗時千萬不要刮傷噴口內避 否則不能再使用 清洗需要準備的用品包括超聲波清洗浴 洗滌劑水溶液 GC級甲醇 干燥空氣或氮氣 鉗子或鑷子 步驟如下 用一根干凈的金屬絲從噴口頂端插入 穿過底部來回穿通幾次 一直到可以光滑地拉動為止 注意不要刮傷噴嘴 往超聲波清洗浴中加入洗滌劑水溶液 把噴嘴放到清洗浴中 超聲5min 用一個噴嘴鉆空器清理噴嘴內部 再超聲5min 以下必須使用鑷子進行操作 從清洗浴中拿出噴嘴 先用熱的清水洗滌 然后用少量甲醛洗滌 用熱的壓縮空氣或氮氣吹干噴嘴 把它放在紙巾上 晾干 典型的GC MS癥狀 1 癥狀 靈敏度低 GC條件不適合 分流比不適當 背景高 隔墊 柱殘留 EM需更換 真空不夠 調諧不理想污染嚴重 樣品凈化不夠 載氣不純 GC系統(tǒng)污染 MS系統(tǒng)污染真空度低 空氣泄漏 柱流量過大 泵故障效率低 2 現(xiàn)象及可能原因 質量軸不正確 MSD沒有足夠時間平衡 實驗室溫度變化較大 MSD長時間未調諧 不正確的調諧文件前驅峰很大 推斥極電壓過高 峰過寬 四極質量濾器極性不對 四極桿臟 3 M Z502的相對豐度低于2 不同調諧程序MSD沒有足夠時間升溫和抽真空真空室漏氣離子源溫度過高柱流量過大燈絲工作不正常離子源臟四極質量濾器極性不對 殘留分析方法的建立步驟 1 文獻檢索 目的 通過文獻查閱對以往分析方法進行比較和借鑒 了解與方法設計相關的背景材料 對將建立的方法進行實驗條件調整 改進 根據分析對象 應用新技術建立方法 查找參數(shù) 待測物的理化性質極性 溶解性 酸堿性 穩(wěn)定性 熔點 蒸汽壓 波譜學性質等 查閱范圍 一般便捷的方法是查閱英國皇家化學會出版的 Analyticalabstract 即 AA 或 美國化學會的 2 建立測定方法 建立測定方法 線性范圍 根據選定對象 分析對象殘留 測定對象 建立擬采用的測定方法 配制標準系列 優(yōu)化測定條件 排除抗干擾物質 建立標準曲線 GC檢測器ECD NPD FID FPD TCD MSD等均可作為農藥的檢測用 但實際應用在殘留檢測的是ECD NPD FPD MSD對該幾種檢測器的檢測限 測定對象 分離條件進行優(yōu)化選擇 定期或不定期采用標準系列在不同測定環(huán)境 時間 溫度等 整個校正 繪制質量控制圖 以測定時間為橫坐標 該時間要標明標準匯制情況 溶劑 溫度等參數(shù) 測定值 變動范圍 為縱坐標 繪制質量控制圖 3 建立樣品處理方法 準備樣品 三種樣品 空白樣品 純水 添加樣品 以純水為樣品基質預試驗 初步確定提取溶劑試劑干擾情況 不同條件下的回收率用空白樣品 添加樣品進行測試 4 提取 A 殘留在樣品基質中的待測物濃度一般較低PPM級甚至PPB級 如此低含量的殘留物質提取除了考慮待測物的理化性質外 更主要的是考慮樣品基質種類 一般而言 有機氯農藥為脂溶性的 極性較低 可以采用索氏提取油脂 而有機磷農藥具一定水溶性 可采用丙酮 二氯甲烷等直接提取 擬除蟲菌脂類農藥多采用混合提取溶劑通過液一液萃取 LLE 法提取 而有機氮類農藥則考慮酸堿性等情況 B 溶劑回流 研磨搗碎 振蕩 旋渦振蕩 超聲波振蕩 均質器均質等是提取常采用的手段 根據樣品種類使用溶劑情況可選用不同提取方法 隨著分析科學的發(fā)展 現(xiàn)代分離分析技術也應用于殘留物提取中 在一些實驗室已廣泛采用的有超臨界萃取提取 基質因相分散提取 溶劑提取因相繳萃提取等方法 其共同特點是儀器自動化程度高 試劑用量少 環(huán)境污染物少 易與測定技術一體化 C 提取效果的評定 一般而言是采用添加回收試驗方法來判斷 即選用比較成熟的 凈化 和 測定 的分析條件 更換 提取 條件 來添加回收試驗回收率結果 比較該結果進行判斷 該提取效果常比真正的提取率高 考慮到添加于試樣中的農藥與實際試樣中殘留的農藥存在狀態(tài)不同的緣故 國外一些研究機構采用同位素的化學性質一致性原理 進行放射性同位素標記 用閃爍計數(shù)器測定提取前后的放射性強度 獲得提取率來判斷提取效果 這是一種較可靠的方法 5 凈化 A 與提取液中大量存在的溶劑色素油脂 天然物相比待測殘留物仍然是極少量的 對于測定方法而言大量雜質的存在會干擾待測殘留的測定 顯然必須采用一定凈化手段以達到測定的必須的條件 B 采用不同的檢測器 對凈化的要求也有所不同 FPD NPD對凈化的要求不高 而MSD ECD由于其易受污染對凈化的要求較高 C 凈化方法有柱層析法 包括吸附柱層析法 分配柱層析法 凝膠滲透柱層析法 吸附柱層析法 即被測試樣各組分在層析柱中吸附劑上被吸附與被解吸的反復過程 常用的吸附劑有弗羅里硅土 氧化鋁 活性炭 硅膠 氧化鎂 纖維素等 分配柱層析法即在柱內裝惰性填充物 載體 其常因地吸附著某一種溶劑 向柱中加入淋洗溶劑使試樣在丙中反復分配 凝膠滲透層析法是將多孔凝膠填入柱內 用溶劑淋洗利用凝膠的網眼大小來篩分 使分子量大小不同的化合物達到分離的目的 薄層層析法 凝固法 液一液分配法 掃集共蒸餾凈化法 低溫冷凍凈化法 前置色譜凈化法 水蒸氣蒸餾等到也常作為凈化方法應用與殘留檢測中 常用色譜儀的維護與保養(yǎng) 前言 如果使用得當 保養(yǎng)得法 完全可以也應當正常運轉相當長時間 真正難的是如何保證使其長時間可持續(xù)正常運行的狀態(tài) 維護與保養(yǎng)的一個重要作用就是保障保養(yǎng)一個良好的檢測狀態(tài) 確保得到準確的檢測數(shù)據 影響分析儀器持續(xù)運行的因素 1 易損件清理更換不及時 2 硬件使用不科學 3 儀器本身選購及配置不當 共性就是 儀器本身各個固定部件很少出問題 只有使用者經常接觸到的地方才容易出故障 第一部份氣相色譜儀 在使用氣相色譜儀時 以下主要以配有分流進樣口和氫火焰檢測器的氣相色譜儀為例 使用者經常做的對儀器結構有改變的行為莫過于換柱了 雖然換柱和扎針一樣 都是氣相色譜工作者的基本功 但是至少有一半的問題與之相關 問題1 漏氣 進樣墊漏氣 接柱的固定 螺絲漏氣 尤其是使用填充柱而又采用硅石墨墊更會如此 如果用橡膠圈好些 但是不需用 需要定期更換 毛細柱由于采用石墨墊圈則漏氣問題相對好些 問題2 固定位置不準 這是制約靈敏度的一個關鍵點 填充柱由于是剛性的 尺寸形狀固定 在換裝時一般容易掌握 常出問題的是毛細柱 由于其本身柔性 在進樣口和檢測器內的長度完全由使用者個人掌握 如果把握不準 會成為制約實驗效果的一個重要因素 不同公司儀器的裝柱尺寸是不同的 在使用不同襯管時也有很大區(qū)別 有些儀器提供了專用的測量工具 有些則沒有 問題3 清理更換不及時 這是硬件無故障而檢測狀態(tài)不好的主要原因 其具體表現(xiàn)就是污染 如 進樣口襯管及玻璃棉污染 柱內污染 檢測器污染 如果不及時更換或清洗 會造成基線不穩(wěn) 靈敏度下降等現(xiàn)象 對策 定期清洗 定期更換 用檢漏液測漏 是常用但不是最好的處理方法 我覺得 最好的方法是狀態(tài)監(jiān)控 時刻觀察系統(tǒng)狀態(tài) 發(fā)現(xiàn)問題馬上判斷問題再處理問題 同一臺機 同一根柱 在同一流量 同一柱頭壓下 應該有基本一致的信號基線和差不多的穩(wěn)定時間 儀器狀態(tài)的不同問題會有各種不同的反映 儀器的信號遠不只檢測信號那么簡單 它不權表述了實驗對象 也表述了儀器本身的狀態(tài) 例1 裝柱后 通上一定的流量 柱頭壓和平時不一樣 如果柱頭壓明顯比平時高 可能是柱頭堵塞 如果低 可能是漏氣或柱斷裂 漏氣可以在關閉柱箱風扇后應該能聽到聲音 柱斷裂可以很容易看出來 例2 流量正常 柱頭壓正常 但基線信號明顯低且穩(wěn)定奇快 這種現(xiàn)象在使用毛細柱時常發(fā)生 原因多半是噴嘴堵塞 確定是否這個原因的方法就是進空白溶劑 如果信號比平時低了很多 而且出峰時間又晚了一些 就基本就是這個原因 這時只能關機清洗 例3 流量正常 柱頭壓正常 在三溫 OVEN INJ DET 到達設定值后 但基線信號明顯地偏高且不穩(wěn)定 這種情況多是污染 污染又分 進樣口污染 柱污染 檢測器污染 確定是哪一種故障并不容易 有時還是交叉反應 但是處理方法卻一致 停機 清洗 升溫烤 我建議每次清洗最好把檢測器和進樣口都處理一下 畢竟最耗時間的是降溫升溫 以上三個例子都強調了一個 與平時不同 這就需要我們在做實驗時有一個長期的狀態(tài)觀察積累 不同檢測器有不同的特性 以上針對FID 第二部分氣質聯(lián)用儀 氣質聯(lián)用儀可以看作是毛細管柱氣相色譜儀加上質量檢測器的組合 它常出的問題也是兩者相加 我們對氣質聯(lián)用儀本身的操作一般是換柱和清洗離子源 大多數(shù)問題也是由這兩步操作而來 它們最主要的表現(xiàn)主是漏氣而造成的抽真空不正常 出問題的位置在于毛細管柱進入質譜腔體開門時的密封圈 毛細管柱進入質譜腔的接口密封不嚴 需要注意的有 1 伸入質譜腔中的長度不適當 太長或太短都不行 2 墊圈要松緊合適 太松會有漏氣的隱患 太緊則會壓碎墊圈 清洗離子源時打開腔體后密封不嚴 門上的密封圈 島津的是門 安捷倫的是蓋 上只要沾了一點點肉眼無法察覺的毛發(fā)或絨線就會引起漏氣 這時一般操作書上要求的都是戴上尼龍手套清潔 但這對于處理離子源時是很重要的 但是對于處理密封圈來說 不戴手套的效果更好 原因是手上多少會有一些油脂 只要沿著密封圈抹上一圈 可以有效地消除絨線的影響 而這些油脂離加熱源遠 和離子源也遠 基本屬大分子有機物 對于檢測沒有影響 平時操作質譜時 要對在通氣和不通氣的情況下 多長時間真空度能達到多少有一個大致的數(shù)值概念標準 如果換柱或清洗離子源后 抽真空的速率比平時差距太遠 就要先考慮是否是安裝不當漏氣的問題 早些降溫關機處理 溶劑延遲是其它氣相檢測器沒有的概念 如果忘記設置合理的溶劑延遲時間 會對燈絲造成嚴重的損害 這是質譜初學者常犯的錯誤 另一個可能造成嚴重后果的行為是 沒有等溫度降到室溫就急著拆機拆離子源 曾經發(fā)生過在熱的時候拆機 冷了以后裝不回去的案例 在實驗狀態(tài)方面 主要還是污染問題 進樣口和柱污染析處理和普通氣相一致 至于質譜檢測器 一般來說 80 以上的污染是在離子源部分 我們需要對調諧后電壓時常注意 升高到一定程度就要考慮是否要清洗離子源了 而四極桿部分一般不用動 最好也不要由用啟動 氣質聯(lián)用的日常保養(yǎng)容易忽視的是機械泵的保養(yǎng) 主要是換機油和分子篩 特別提示 買氣質時千萬別忘記配UPS 第三部分 液相色譜儀 液相色譜儀是屬于易學難用的儀器 特別講究 正確使用 和經驗 液相工作者接觸最多的是流動相 也就是流動相 是造成液相色譜各種問題的最主要源頭 液相色譜最常見的故障一是堵 二是漏 下面就這兩點分別展開討論 注 流動相以甲醇為例 色譜柱以C18為例 堵 的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高 直接原因就是流路不暢 堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端 最主要原因就是流動相里有雜質 雜質的主要來源就是細菌 堵 的原因之一 配制流動相時細菌污染 首先我們要認識到 一般的國產甲醇其實不需要額外過濾處理 直接使用沒有問題 即使是有些固態(tài)微粒雜質 也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排除 真正容易引起問題的 是水中的細菌 新制備的純水在室內放置幾天就會長菌 而這些細菌雖然肉眼不可見 卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙 造成柱子很快報廢 這就是在配制流動相時造成的細菌污染的原因 解決它的方法很簡單 就是確保水的可靠性 這里有兩種方式推薦 1 最理想的方式當然是購買實驗室專用純水機 既方便又可靠 質量也放心 唯一的缺點就是價格不菲 2 成箱購買市售品牌純凈水 如500ml一支的怡寶或娃哈哈 這些水的質量足以應付液相色譜的要求 先隨機抽取一支做一下細菌平板實驗 待菌落數(shù)合格方可使用 這樣每次只要單獨開一支即可 也很方便 每次成本2元左右 這里特別指出一個細節(jié) 在絕大多數(shù)書本上 凡談到配制流動相都會談到最后一個過濾的步驟 但是從我們長期使用的實際效果來說 只要能保證水的質量 這一步完全可以也應當去除 原因有以下三點 1 流動相過濾在理論上有好處 但是實際操作時由于不可能做到專瓶專用 反而容易造成的交叉污染 對于配比復雜的流動相影響更大 2 流動相過濾在經濟成本上不劃算 買一套過濾裝置要6000多元 且過濾器公認是比較容易損壞的設備 最主要是過濾片的成本太高 一片就要幾十元 按一般液相柱的正常使用壽命計算 過濾片的成本會遠遠高于色譜柱的成本上升 3 流動性過濾對于工作效率成本不劃算 使用溶劑過濾器有一個預清洗 裝備 使用 用后清洗 晾干的過程 至少也有一個小時的時間 這個成本也不能忽視 4 在實際工作未發(fā)現(xiàn)流動相不過濾會對柱壽命有任何影響 我們起碼有6年時間沒有做過流動相過濾的工作 但是和國內同行相比較 在同等使用強度下我們的柱壽命是比較長的 堵 的原因之二 使用流動相時的細菌污染 指的是 流動相剛開始滑長菌 在使用時卻產生了細菌污染 這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的 舉最簡單的例子 50 的甲醇水流動相 有兩種使用方式 一種方式是在上機前就配好混合在一起 另一種方式是在流路A放純甲醇 流路B放純水 從單純實驗效果來說 后一種有明顯的優(yōu)點 首先是簡單 不需要實驗者另個計算配比混合 其次就是比例準確 能得到保留時間重復性極好實驗效果 但是 它有一個致命的缺陷 就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌 很多情況下不僅僅用純水作流動相 而是用緩沖鹽溶液 本身就是優(yōu)質肥料 細菌長得更迅速 一旦有細菌柱子就壞得很快 所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水 更要求在每次實驗后把水相換掉 換成甲醇沖洗干凈 這一點在實際工作中很多人意識不強 就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏 但是往往這一兩次就足以產生致命的影響 因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的 所以 寧可犧牲小小的保留時間的重復性 也不要用純水溶液作為流動相的一組 從實際實驗效果來說 我建議用10 的甲醇水代替水溶液 以前我做過不同比例甲醇水的細菌總數(shù)實驗 在5 就基本可以抑菌 在10 及以上就可以完全殺菌了 這樣可以有效排除長細菌的隱患 既可作流動相 也可沖柱 就算是在配制流動相時會計算得麻煩一些 但是一次麻煩 終身受益 堵 的原因之三 不適當操作 常見問題的有以下幾種 1 在更換零件時選擇的型號有誤 接口不是很匹配 在擰緊的時候產生變形而使得管路堵塞 2 樣品處理液凈化得不干凈 長期會在六通閥和柱之間形阻塞不暢 3 在使用用手動六通閥時 有些人可能由于手勁小的原因 轉動的不到位 于是造成流路形成死堵 壓力快速升高超過警戒值 4 在使用金屬管路作出廢液管時 應當注意最好廢液瓶中先放一些水 并把廢液管的出口端結晶成塊并造成堵塞 這種情況不常見 但卻的確發(fā)生過 堵 的原因講了不少 現(xiàn)介紹查堵的方法 在發(fā)生 堵 的現(xiàn)象后 就需要找出原因 主要是什么位置發(fā)生了 堵 注意 絕大多數(shù)情況下 整個系統(tǒng)只會有一個地方發(fā)生堵塞 查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開 仔細觀察壓力數(shù)值 如果某一個部件 柱子除外 裝上和拆下時的壓力差別很太 可發(fā)展變化判斷 至于柱的堵塞 可以通過換同樣規(guī)格的柱的壓力是否一致來判斷 漏 分兩種 漏液和漏氣 一 漏液液相色譜儀從流動相瓶到廢液瓶之間的流路是一個全封閉體系 內部壓力很高 但外部卻能保證一滴不漏 如果某個部件發(fā)生漏液 那就是故障所在 漏液的原因分兩種 1 接觸硬件不當 在更換零件如流路管或換柱時 換的接頭接口不匹配 造成漏液 要注意不同公司的柱子接頭很多是不同的 甚至同一家公司在不同時期生產的液相柱接頭也有很大區(qū)別 當然選項用PEEK接頭是一較好是一個較好的解決方法 不僅通用性好 而且靠手擰就能保證不漏液 即使是接口本身是匹配的 但是如果操作不當也會漏液 一種不當就是力度把握不好 擰得太緊或太松 另一種不當就是致命的錯誤 滑絲 這是往往是動手能力不太強 螺絲釘很少擰的工作者犯的錯誤 滑絲的后果不僅是漏液那么簡單 常造成重要部件的報廢 解決這個問題只能靠惡補基本功來實驗 那就是擰螺絲 2 使用儀器不當 如果是輸送泵漏液 最常見的原因就是在活塞位置緩沖鹽析造成 析出的原因有兩個 一是使用緩沖鹽溶液時突然加入