課題2　土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù).doc

班級： 姓名： 東港三中2013級高二生物選修一課題2導學案2.2 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)主備人： 審核人： 使用時間：2015.4【三維目標】知識與技能：理解培養(yǎng)基的選擇及配制方法；分解尿素細菌的分離與計數(shù)。過程與方法：“以問題為中心”探究式教學模式，通過小組合作探究，學生展示，教師點撥。情感與價值觀：關注生活中的實際問題，培養(yǎng)解決問題的能力?！緦W習重難點】重點：培養(yǎng)基的配置方法難點：細菌的計數(shù)方法【自主預習】根據(jù)教材完成練習冊15頁自主學習空間課題背景：1、尿素CO(NH2)2重要的農(nóng)業(yè)氮肥。只能被土壤中細菌分解為NH3才能被植物吸收利用。2、 CO(NH2)2 + H2O 細菌脲酶 CO2 +2NH3【合作探究】探究點一：篩選菌株實例-耐高溫DNA聚合酶的尋找：美國科學家布魯克（1966年）-在美國黃石公園的一個熱泉中發(fā)現(xiàn)耐熱細菌。這說明尋找菌株要到期相應的 中尋找。(1)實驗室中微生物篩選的原理：人為提供有利于 生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時 或 其他微生物生長。 (2)選擇培養(yǎng)基：在微生物學中，將允許 種類的微生物生長，同時 和 其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。(3)配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)1、該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)？ 碳源：: 氮源： 2、此配方能否篩選出產(chǎn)生脲酶的細菌？為什么？ 根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點加入某種物質(zhì)以達到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不加入有機物可以選擇培養(yǎng) 微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng) ；的微生物.加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。思考與討論：篩選菌株的培養(yǎng)基KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g瓊脂 15.0g 例 1 ：土壤中的細菌能分解尿素，是因為它們能合成一種 ()A尿素酶 B脲酶 C蛋白酶 D肽酶例2 ：在培養(yǎng)基中加入尿素(惟一氮源)，以分離出能分解尿素的細菌，這種加入尿素的培養(yǎng)基在功能上屬于 ()A選擇培養(yǎng)基 B固體培養(yǎng)基 C液體培養(yǎng)基 D半固體培養(yǎng)基 探究點二：統(tǒng)計菌落數(shù)目測定微生物數(shù)量的常用方法有 和 。1.稀釋涂布平板法-活體計數(shù)法（1）原理：當樣品的 足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個 。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在 的平板進行計數(shù)。（2）操作方法：稀釋涂布平板 統(tǒng)計菌落數(shù)。（3）統(tǒng)計原則 、選 30300 個菌落的平板統(tǒng)計。 、每個稀釋度取3個平板取其平均值。（4）統(tǒng)計結(jié)果： 每克樣品中的菌株數(shù)= 。C:某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)； V:所用稀釋液的體積； M:稀釋倍數(shù)。思考與討論：1、1個菌落代表幾個活菌？2、統(tǒng)計的菌落數(shù)和實際活的細菌數(shù)相等么？為什么？3、如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？2顯微鏡直接計數(shù)利用特定細菌計數(shù)或血細胞計數(shù)板在顯微鏡下計算一定容積內(nèi)微生物數(shù)量。優(yōu)點：準確統(tǒng)計微生物實際數(shù)目缺點： 3設置對照設置對照的主要目的是排除實驗組中 對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的 。例 3 ：某同學在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)平均值為234，那么每克樣品中菌落數(shù)是（稀釋液體積為0.1ml） （ ）A、2.34108 B、 2.34109 C、234 D、23.4 例 4 ：用來判斷培養(yǎng)基是否起到對照作用要設置的對照是 （ ） A、未接種的選擇培養(yǎng)基 B、未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（全營養(yǎng)）C、接種了的選擇培養(yǎng)基 D、接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（全營養(yǎng)）探究點三：實驗設計、實驗操作實驗設計要求：綜合考慮，周密細致一、實驗流程：土壤取樣-樣品的稀釋-制備培養(yǎng)基-涂布平板-微生物的培養(yǎng)與觀察-菌落計數(shù)二、實驗操作：（一）土壤取樣 1、土壤是天然培養(yǎng)基 - 其微生物數(shù)量 、種類 。 2、土壤取樣： 取樣的位置：土壤中7090是細菌。在富含有機質(zhì)的土壤層的 處中分布著絕大多數(shù)的細菌。從肥沃、濕潤的土壤中取樣。應先 3 cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的 中。 （1）、測細菌數(shù)：一般用104、105、106稀釋液。（二）樣品稀釋 （2）、測放線菌：一般用103、104、105稀釋液。（3）、測真菌數(shù)：一般用102、103、104稀釋液。 稀釋過程：在火焰旁將10g土樣加入盛有90 mL無菌生理鹽水的錐形瓶中(體積為250 mL)，充分搖勻，吸取上清液 ，轉(zhuǎn)移至盛有 的生理鹽水的無菌大試管中，將土樣以1、101、102 依次等比稀釋至107稀釋度。 稀釋原則：確保平板上的菌落數(shù)在 之間。（三）制備培養(yǎng)基：準備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基，將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應明顯 選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為 ，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。1、 接種：依次等比稀釋至107稀釋度，并按照由107103稀釋度的順序分別吸取 進行平板涂布操作。每個稀釋度下需要3個選擇培養(yǎng)基、1個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。 2、培養(yǎng)：細 菌：3037，12d；（四）微生物的培養(yǎng)與觀察 放線菌: 2528, 57d； 霉 菌: 2528, 34d。 3、觀察：將涂布好的培養(yǎng)皿放在30溫度下培養(yǎng)，及時觀察記錄。 （五）細菌的計數(shù) 當菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在 的平板進行計數(shù)。在同一稀釋度下，至少對3個平板進行重復計數(shù)，然后求出 ，并根據(jù)平板所對應的稀釋度計算出樣品中細菌的數(shù)目。提示：1、在一定的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出相同而穩(wěn)定的菌落特征。2、關注菌落的形態(tài)、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等，是區(qū)分細菌的重要手段。思考與討論：1、 為什么分離不同的微生物要選擇不同的稀釋度？2、 實驗中，稱取土壤稀釋土壤都需要在火焰旁操作，為什么？3、本實驗還有哪些需要注意要無菌操作的？ 4、土壤稀釋過程中，試管較多，怎么防止混淆？涂布平板由怎么防止？【內(nèi)化提升】1、通常用來作為菌種鑒定的重要依據(jù)是A菌落 B細菌形態(tài) C細菌體積 D細菌結(jié)構2、在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)能分解尿素的細菌，指示劑的顏色是A藍色 B紅色 C黑色 D棕色3、分離土壤中分解尿素的細菌，對培養(yǎng)基的要求是加尿素不加尿素加瓊脂不加瓊脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸鹽不加硝酸鹽A B C D4、在尋找目的菌株時，要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應的環(huán)境中去尋找，下列不屬于厭氧細菌生存環(huán)境的是A土壤深層 B人或動物體內(nèi)寄生 C真空 D池塘淤泥5、測定土壤中細菌數(shù)量一般選用104、105和106倍的稀釋液進行平板培養(yǎng)，而測定真菌的數(shù)量一般選用102、103和104倍稀釋，其原因是A細菌個體小，真菌個體大 B細菌易稀釋，真菌不易稀釋C細菌在土壤中數(shù)量比真菌多 D隨機的，沒有原因6、實驗測定鏈霉素對3種細菌的抗生素效應，用3種細菌在事先準備好的瓊脂塊平板上畫3條等長的平行線（3條線均與下圖中的鏈霉素帶接觸），將平板置于37條件下恒溫培養(yǎng)3天，結(jié)果如圖所示。從實驗結(jié)果分析以下敘述，不正確的是 A鏈霉素能阻止結(jié)核菌的生長 B鏈霉素對結(jié)核菌比對霍亂菌更有效C鏈霉素對結(jié)核菌比對傷寒菌更有效 D鏈霉素可以用于治療傷寒病人【高考鏈接】（2009、安徽）下列是關于“檢測土壤中細菌總數(shù)”實驗操作的敘述，其中錯誤的是