CN104782501A五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法

CN104782501A五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法 (10)申請公布號 (43)申請公布日 (21)申請?zhí)杧x10238431.6 (22)申請日xx.05.12A01H4/00(xx.01) (71)申請人九江學(xué)院地址332000江西省九江市前進(jìn)東路551號申請人九江三葉科技有限公司 (72)發(fā)明人賈明良廖亮徐玲玲李同建方荷芳蘇慧慧 (74)專利代理機(jī)構(gòu)南京正聯(lián)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司32243代理人王素琴 (54)發(fā)明名稱五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法 (57)摘要本發(fā)明屬于植物細(xì)胞工程技術(shù)領(lǐng)域，五月瓜藤種苗的培養(yǎng)步驟依次包括預(yù)處理、無菌外植體獲得、愈傷組織誘導(dǎo)、叢生芽誘導(dǎo)增殖、生根培養(yǎng)及移栽；采用本發(fā)明生產(chǎn)五月瓜藤種苗的技術(shù)方案，其產(chǎn)生的有益效果是 （1）增殖率高，生物產(chǎn)量大，培養(yǎng)周期短； （2）組培苗質(zhì)量好，種苗健壯，栽培成活率高；本發(fā)明利用通過預(yù)處理、無菌外植體獲得、愈傷組織誘導(dǎo)、叢生芽誘導(dǎo)增殖和生根培養(yǎng)及移栽的方法對五月瓜藤種苗進(jìn)行培育相對于其它培養(yǎng)方式具有擴(kuò)繁效率高、培養(yǎng)時(shí)間短、轉(zhuǎn)接方便；種苗健壯、栽培成活率高及成本低，適合五月瓜藤種苗規(guī)?；嘤a(chǎn)。 (51)Int.Cl. (19)中華人民共和國國家知識產(chǎn)權(quán)局 (12)發(fā)明專利申請權(quán)利要求書1頁說明書5頁 (10)申請公布號104782501A (43)申請公布日xx.07.22104782501A1/1頁21.一種五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法，培養(yǎng)步驟依次包括預(yù)處理、無菌外植體獲得、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽誘導(dǎo)增殖、生根培養(yǎng)及移栽；其特征在于，具體包括以下步驟 （1）預(yù)處理不同的外植體的類型采用不同的浸泡預(yù)處理及冷藏預(yù)處理； （2）無菌外植體獲得對外植體進(jìn)行消毒滅菌處理獲得無菌外植體用于下一步培養(yǎng)； （3）愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)將步驟 （2）中獲得的無菌外植體接種至液體淺層愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)得到狀態(tài)良好的愈傷組織； （4）叢生芽誘導(dǎo)增殖將步驟 （3）中獲得的良好的愈傷組織接種到固液雙層叢生芽培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽增殖培養(yǎng)； （5）生根培養(yǎng)及移栽將步驟 （4）中獲得的叢生芽浸泡處理后接種到固體生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，然后將得到的生根苗煉苗后栽培到基質(zhì)中進(jìn)行生長得到五月瓜藤種苗。 2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的步驟 （1）中的所述外植體為葉片或葉柄或幼嫩枝條。 3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的步驟 （1）中，所述外植體預(yù)處理的方法為將所述外植體離體后立即置于添加15g/L PVP+13g/L Vc的水溶液中進(jìn)行浸泡處理35h，后置于28條件下保濕冷藏510d。 4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的步驟 （2）中，滅菌處理的方式為將預(yù)處理完后的外植體采用75%酒精消毒2040s后采用升汞滅菌510min，然后無菌水沖洗備用。 5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的步驟 （3）中所述培養(yǎng)基的配方為WPM或Ms+1.04.0mg/L2,4-D+0.050.5mg/L NAA+0.11.5g/L PVP+30g/L蔗糖，pH5.66.0；培養(yǎng)條件為光照0h/d，溫度251；所述液體淺層厚度為0.53cm。 6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的步驟 （4）中所述固液雙層叢生芽培養(yǎng)基中的液體培養(yǎng)基的配方為WPM或Ms+1.04.0mg/L6-BA+0.020.5mg/L NAA+2.0mg/L KT+0.11.5g/L PVP+30g/L蔗糖，pH5.66.0，厚度為0.21cm；所述固液雙層叢生芽培養(yǎng)基下層添加6.5g/L瓊脂的固體培養(yǎng)基，從而形成固液雙層培養(yǎng)基；培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-2000lux，光照1015h/d，溫度251。 7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的步驟 （5）中生根培養(yǎng)及移栽中，首先將叢生芽放入到添加15g/L PVP+13g/L Vc的水溶液中浸泡12h，后接種到固體生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，所述生根培養(yǎng)基的配方為1/2Ms+1.02.0mg/L IBA+0.010.1mg/L NAA+40g/L蔗糖，pH5.66.0；培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-2000lux，光照1015h/d，溫度251。 8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的步驟 （5）中獲得的生根苗煉苗后栽種到泥珍珠巖=25:1的基質(zhì)中，保持適度遮陰和70%80%的濕度進(jìn)行栽培即培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-2000lux，光照1015h/d，溫度201，從而得到五月瓜藤種苗。 權(quán)利要求書104782501A21/5頁3五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法技術(shù)領(lǐng)域0001本發(fā)明屬于植物細(xì)胞工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用植物組織培養(yǎng)方式綜合處理進(jìn)行五月瓜藤培養(yǎng)快繁以獲得大量種苗的方法。 背景技術(shù)0002五月瓜藤（Holboellia fargesiiReaub.）為木通科（Lardizabalaceae）八月瓜屬（Holboellia）植物，產(chǎn)于云南、貴州、四川、湖北、湖南、陜西、安徽、廣西、廣東和福建。 野生分布于海拔500-3000米的山坡雜木林及溝谷林中。 五月瓜藤為常綠木質(zhì)藤本植物，花雌雄同株，紅色紫紅色暗紫色綠白色或淡黃色，數(shù)朵組成傘房式的短總狀花序，具有較高觀賞價(jià)值，可作為垂直綠化材料進(jìn)行栽培；其花期4-5月，果期7-8月，果實(shí)表皮紫色，長圓形，長5-9厘米，果肉甘甜，可作為水果種植；另外其種子含油40，可榨油，作為油料作物；此外其根藥用，治勞傷咳嗽，果治腎虛腰痛、疝氣等。 由此可見五月瓜藤具有很高的應(yīng)用價(jià)值，具有極大的開發(fā)潛力。 0003由于生態(tài)環(huán)境的破壞和掠奪式的采摘挖掘，五月瓜藤的資源日趨縮小，嚴(yán)重影響了其有序的開發(fā)利用，因此需要對其進(jìn)行種苗繁殖技術(shù)的開發(fā)。 0004利用植物組織培養(yǎng)的方式進(jìn)行五月瓜藤種苗的培養(yǎng)快繁是一種較好的規(guī)?；@得五月瓜藤種苗的方法，且該方法未見報(bào)道和公開應(yīng)用。 發(fā)明內(nèi)容0005本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種生長周期短、移栽存活率高、成本低、操作簡單的五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法。 0006為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是培養(yǎng)步驟依次包括預(yù)處理、無菌外植體獲得、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽誘導(dǎo)增殖和生根培養(yǎng)及移栽；具體包括以下步驟 （1）預(yù)處理不同的外植體的類型采用不同的浸泡預(yù)處理及冷藏預(yù)處理； （2）無菌外植體獲得對外植體進(jìn)行消毒滅菌處理獲得無菌外植體用于下一步培養(yǎng)； （3）愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)將步驟 （2）中獲得的無菌外植體接種至液體淺層愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)得到狀態(tài)良好的愈傷組織； （4）叢生芽誘導(dǎo)增殖將步驟 （3）中獲得的良好的愈傷組織接種到固液雙層叢生芽培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽增殖培養(yǎng)； （5）生根培養(yǎng)及移栽將步驟 （4）中獲得的叢生芽浸泡處理后接種到固體生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，然后將得到的生根苗煉苗后栽培到基質(zhì)中進(jìn)行生長得到五月瓜藤種苗。 0007采用上述技術(shù)方案，通過大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該五月瓜藤種苗的培養(yǎng)方法能夠?qū)崿F(xiàn)增殖率高，生物產(chǎn)量大，培養(yǎng)周期短；組培苗質(zhì)量好，種苗健壯，栽培成活率高。 0008作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)在于，所述的步驟 （1）中的所述外植體為葉片或葉柄或幼嫩枝條。 本發(fā)明使用的外植體是葉片或葉柄或幼嫩枝條，可以通過多種外植體實(shí)現(xiàn)對五月瓜藤種苗的培養(yǎng)，既方便外植體的獲得，又節(jié)省了材料避免了浪費(fèi)。 說明書104782501A32/5頁40009作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)在于，所述的步驟 （1）中，當(dāng)所選外植體為葉片或葉柄或幼嫩枝條時(shí)，所述預(yù)處理的方法是將所述外植體離體后立即置于添加15g/L PVP+13g/L Vc的水溶液中進(jìn)行浸泡處理35h，后置于28條件下保濕冷藏510d。 對外植體進(jìn)行預(yù)處理，所采用的預(yù)處理方法適合各個(gè)外植體的后續(xù)培養(yǎng)，且該預(yù)處理過程有利于后續(xù)的培養(yǎng)，縮短培養(yǎng)周期。 0010作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)在于，所述的步驟 （2）中，當(dāng)所選外植體為葉片或葉柄或幼嫩枝條時(shí)，滅菌處理的方式為將預(yù)處理完后的外植體采用75%酒精消毒2040s后采用升汞滅菌510min，然后無菌水沖洗備用。 無菌的處理對后續(xù)的培養(yǎng)過程是非常關(guān)鍵的，直接影響后續(xù)培養(yǎng)的誘導(dǎo)率、增殖率以及生根率，通過大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該滅菌方法對后續(xù)的培養(yǎng)最好。 0011作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)在于，所述的步驟 （3）中所述愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為WPM或Ms+1.04.0mg/L2,4-D+0.050.5mg/L NAA+0.11.5g/L PVP+30g/L蔗糖，pH5.66.0；培養(yǎng)條件為光照0h/d，溫度251；所述液體淺層厚度為0.53cm。 愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成直接關(guān)系到愈傷組織的誘導(dǎo)率以及愈傷組織的質(zhì)量高低，為了提高五月瓜藤外植體的愈傷組織的誘導(dǎo)率，本發(fā)明對五月瓜藤外植體的愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，通過大量的篩選試驗(yàn)最終確定，采用上述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行五月瓜藤外植體的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，愈傷組織的誘導(dǎo)效果最好。 0012作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)在于，所述的步驟 （4）中所述固液雙層叢生芽培養(yǎng)基中的液體培養(yǎng)基的配方為WPM或Ms+1.04.0mg/L6-BA+0.020.5mg/L NAA+2.0mg/L KT+0.11.5g/L PVP+30g/L蔗糖，pH5.66.0，厚度為0.21cm；所述固液雙層叢生芽培養(yǎng)基的下層添加6.5g/L瓊脂的固體培養(yǎng)基，從而形成固液雙層培養(yǎng)基；培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-2000lux，光照1015h/d，溫度251。 通過大量的篩選試驗(yàn)證實(shí)，采用固液雙層叢生芽培養(yǎng)基可以明顯提高叢生芽的增殖率且減少其褐化率。 0013作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)在于，所述的步驟 （5）中生根培養(yǎng)及移栽中，首先將叢生芽放入到添加15g/L PVP+13g/L Vc的水溶液中浸泡12h，后接種到固體生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，所述生根培養(yǎng)基的配方為1/2Ms+1.02.0mg/L IBA+0.010.1mg/L NAA+40g/L蔗糖，pH5.66.0；培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-2000lux，光照1015h/d，溫度251。 0014作為本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)在于，所述的步驟 （5）中獲得的生根苗煉苗后栽種到泥珍珠巖=25:1的基質(zhì)中，保持適度遮陰和70%80%的濕度進(jìn)行栽培即培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-2000lux，光照1015h/d，溫度201，從而得到五月瓜藤種苗。 0015采用本發(fā)明生產(chǎn)五月瓜藤種苗的技術(shù)方案，其產(chǎn)生的有益效果是 （1）增殖率高，生物產(chǎn)量大，培養(yǎng)周期短； （2）組培苗質(zhì)量好，種苗健壯，栽培成活率高；本發(fā)明利用通過預(yù)處理、無菌外植體獲得、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽誘導(dǎo)增殖和生根培養(yǎng)及移栽的方法對五月瓜藤種苗進(jìn)行培育相對于其它培養(yǎng)方式具有擴(kuò)繁效率高、培養(yǎng)時(shí)間短、轉(zhuǎn)接方便；種苗健壯、栽培成活率高及成本低，適合五月瓜藤種苗規(guī)?；嘤a(chǎn)。 具體實(shí)施方式0016實(shí)施例1說明書104782501A43/5頁5一種以莖段為外植體利用植物組織培養(yǎng)方式綜合處理進(jìn)行五月瓜藤培養(yǎng)快繁以獲得大量種苗的方法具體步驟如下 （1）預(yù)處理預(yù)處理方法為將莖段離體后立即置于添加4g/L PVP+1.5g/L Vc的水溶液中進(jìn)行浸泡處理4h，后置于4條件下保濕冷藏9d； （2）無菌外植體獲得預(yù)處理完畢的莖段利用75%酒精消毒30s后升汞滅菌10min，然后無菌水沖洗備用； （3）愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)將得到的無菌莖段外植體接種至液體淺層愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)；處理方法為將得到的莖段無菌外植體切割至長度為1cm后接種至液體淺層愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基配方為Ms+3.0mg/L2,4-D+0.4mg/L NAA+0.6g/L PVP+30g/L蔗糖，pH5.8；培養(yǎng)條件為光照0h/d，溫度251；液體淺層愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基的厚度為2cm；此條件下愈傷組織誘導(dǎo)率為90%，褐化率為2%；愈傷為黃綠色；其中愈傷組織誘導(dǎo)率（%）產(chǎn)生愈傷組織的外植體數(shù)/接種外植體總數(shù)100%； （4）叢生芽增殖培養(yǎng)將愈傷組織接種到固液雙層叢生芽增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)，固液雙層叢生芽增殖培養(yǎng)基中的上層的液體培養(yǎng)基的配方為Ms+3.0mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+2.0mg/L KT+0.6g/L PVP+30g/L蔗糖，pH5.8，其厚度為0.21cm；下層的固定培養(yǎng)基為添加6.5g/L瓊脂的固體培養(yǎng)基，上下層培養(yǎng)基組成一致；培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-2000lux，光照12h/d，溫度251；此條件下叢生芽誘導(dǎo)率為95%，增殖率為1:6.5，褐化率為2%；其中叢生芽誘導(dǎo)率（%）產(chǎn)生的叢生芽數(shù)/接種總數(shù)100%； （5）生根培養(yǎng)及移栽首先將叢生芽浸泡到添加3g/L PVP+1g/L Vc的水溶液中處理1h，后接種到固體生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為1/2Ms+1.5mg/L IBA+0.1mg/L NAA+40g/L蔗糖，pH5.8；培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-2000lux，光照12h/d，溫度251；生根率為98%；得到的生根苗煉苗后栽種到泥珍珠巖=3:1的基質(zhì)中，保持適度遮陰（遮陰面積為18%）和溫度20，75%濕度條件下進(jìn)行栽培得到五月瓜藤種苗，成活率為90%。 0017實(shí)施例2一種以葉柄為外植體利用植物組織培養(yǎng)方式綜合處理進(jìn)行五月瓜藤培養(yǎng)快繁以獲得大量種苗的方法具體步驟如下 （1）預(yù)處理預(yù)處理方法為將葉柄離體后立即置于添加3g/L PVP+1g/L Vc的水溶液中進(jìn)行浸泡處理4h，后置于4條件下保濕冷藏7d； （2）無菌外植體獲得預(yù)處理完畢的葉柄利用75%酒精消毒30s后升汞滅菌5min，然后無菌水沖洗備用； （3）愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)將得到的無菌葉柄外植體接種至液體淺層愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)；處理方法為將得到的葉柄無菌外植體切割至1cm長度后接種至液體淺層愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基配方為Ms+2.0mg/L2,4-D+0.2mg/L NAA+1.0g/L PVP+30g/L蔗糖，pH5.8；培養(yǎng)條件為光照0h/d，溫度251；液體淺層愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基的厚度為1cm；此條件下愈傷組織誘導(dǎo)率為88%，褐化率為6%，愈傷為黃綠色； （4）叢生芽增殖培養(yǎng)將愈傷組織接種到固液雙層叢生芽增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)，固液雙層叢生芽增殖培養(yǎng)基中的上層的液體培養(yǎng)基的配方為Ms+2.0mg/L說明書104782501A54/5頁66-BA+0.1mg/L NAA+2.0mg/L KT+0.6g/L PVP+30g/L蔗糖，pH5.8，其厚度為0.21cm；下層固體培養(yǎng)基為添加6.5g/L瓊脂的固體培養(yǎng)基，上下層培養(yǎng)基組成一致；培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-2000lux，光照12h/d，溫度251；此條件下叢生芽誘導(dǎo)率為90%，增殖率為1:4.7褐化率為5%； （5）生根培養(yǎng)及移栽首先將叢生芽浸泡到添加3g/L PVP+1g/L Vc的水溶液中處理1.5h，后接種到固體生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基的配方為1/2Ms+1.0mg/L IBA+0.1mg/L NAA+40g/L蔗糖，pH5.8；培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-2000lux，光照12h/d，溫度251；此條件下的生根率為95%；得到的生根苗煉苗后栽種到泥珍珠巖=3:1的基質(zhì)中，保持適度遮陰（遮陰面積為18%）和溫度20，75%濕度條件下進(jìn)行栽培得到五月瓜藤種苗，成活率為85%。 0018實(shí)施例3一種以葉片為外植體利用植物組織培養(yǎng)方式綜合處理進(jìn)行五月瓜藤培養(yǎng)快繁以獲得大量種苗的方法具體步驟如下 （1）預(yù)處理預(yù)處理方法為將葉片離體后立即置于添加3g/L PVP+1g/L Vc的水溶液中進(jìn)行浸泡處理3h，后置于4條件下保濕冷藏5d。 0019 （2）無菌外植體獲得預(yù)處理完畢的葉片利用75%酒精消毒30s后升汞滅菌5min，然后無菌水沖洗備用。 0020 （3）愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)將得到的無菌葉片外植體接種至液體淺層愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)；處理方法為將得到的葉片無菌外植體切割至大小為1cm2后接種至液體淺層愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，液體淺層愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的厚度為1cm；培養(yǎng)基配方為Ms+2.0mg/L2,4-D+0.2mg/L NAA+1.0g/L PVP+30g/L蔗糖，pH5.8；培養(yǎng)條件為光照0h/d，溫度251；此條件下愈傷組織誘導(dǎo)率為85%，褐化率為10%；愈傷為黃綠色； （4）叢生芽增殖培養(yǎng)將愈傷組織接種到固液雙層叢生芽增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)，固液雙層叢生芽增殖培養(yǎng)基中的上層的液體培養(yǎng)基的配方為Ms+2.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+2.0mg/L KT+0.6g/L PVP+30g/L蔗糖，pH5.8，其厚度為0.21cm；下層固體培養(yǎng)基為添加6.5g/L瓊脂的固體培養(yǎng)基，上層為液體培養(yǎng)基，上下層培養(yǎng)基組成一致；培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-2000lux，光照12h/d，溫度251。 此條件下叢生芽誘導(dǎo)率為95%，增殖率為1:4.7，褐化率為2%； （5）生根培養(yǎng)及移栽首先將叢生芽浸泡到添加3g/L PVP+1g/L Vc的水溶液中處理1h，后接種到固體生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，生根培養(yǎng)基為1/2Ms+1.0mg/L IBA+0.1mg/L NAA+40g/L蔗糖，pH5.8；培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500-2000lux，光照12h/d，溫度251；生根率為97%；得到的生根苗煉苗后栽種到泥珍珠巖=3:1的基質(zhì)中，保持適度遮陰（遮陰面積為18%）和溫度20，75%濕度條件下進(jìn)行栽培得到五月瓜藤種苗，成活率為89%。 0021實(shí)施例4一種以莖段為外植體利用植物組織培養(yǎng)方式綜合處理進(jìn)行五月瓜藤培養(yǎng)快繁以獲得大量種苗的方法具體步驟如實(shí)施例1所示，不同的是固液雙層叢生芽誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基