Agilent 1290 超高效液相色譜儀標準操作規(guī)程.doc

Agilent 1290 超高效液相色譜儀標準操作規(guī)程 目 的：制定Agilent 1290超高效液相色譜儀使用操作規(guī)程，確保操作人員能正確規(guī)范地操作液相色譜儀。 范 圍：適用于Agilent1290超高效液相色譜儀的使用。 規(guī) 程：1 開機 1.1 打開計算機，進入 Windows畫面。 1.2 打開 1290INFINITY HPLC 各模塊電源。 1.3 待各模塊自檢完成后，雙擊“Instrument 1 Online”圖標，化學工作站自動與12001290INFINITY HPLC 通訊。1.4 從“View”菜單中選擇“方法和運行控制”畫面， 點擊”視圖”菜單中的“樣品視圖“系統(tǒng)視圖”， 使其命令前有“”標志，來調(diào)用所需的界面。1.5 點擊泵下面的瓶圖標，選擇瓶填充如下圖所示，輸入溶劑的實際體積和瓶體積。 也可輸入停泵的體積。點擊“Ok”。1.6 從菜單 “視圖”中，選中“在線信號”，選中“信號窗口 1”，然后點擊“改變” 鈕，將所要繪圖的信號移到右邊的框中，點擊“確定”。(如同時檢測二個信號，則重復選中“信號窗口 2”)2 排氣 2.1 首先在方法編輯中，泵的參數(shù)設置部分，選好需要排空的通道（保證是開的） 2.2 點擊儀器狀態(tài)視圖中泵的圖標，選擇控制，出現(xiàn)如下圖2.3 勾上吹掃，并且輸入流速，時間，比例就可以 purge 泵頭。排空的時候閥會自動切換，無需人為介入。 2.4 當我們發(fā)現(xiàn)泵頭里面有氣泡出不來的時候，選擇預備-開。然后點擊確定。此時泵會用很強烈的方式朝外泵液體，并持續(xù) 20 次自動停止。 3 編輯數(shù)據(jù)采集方法 3.1 開始編輯完整方法： 從“方法”菜單中選擇“編輯完整方法” 項，如下圖所示選中除“數(shù)據(jù)分析 ”外的三項，點擊“確定” ，進入下一畫面。3.2 方法信息： 在“方法注釋”中加入方法的信息（如：This is for test!） 。 點擊 “確定” ， 進入下一畫面。 3.3 進樣方式選擇 根據(jù)自動進樣器的類型，選擇合適的進樣方式。3.4 泵參數(shù)設定： 在“流速”處輸入流量，如 1.5ml/min，停止時間：10 min。在“溶劑B”處輸入 70.0，(A=100-B) ，也可“插入 ”一行“時間表” ，編輯梯度。在“壓力限”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護柱子。3.5 自動進樣器參數(shù)設定: 選擇合適的進樣方式， 如圖所示，進樣體積 1.0ul ，標準進樣”-只能輸入進樣體積，此方式無洗針功能。 “洗針進樣”-可以輸入進樣體積和洗瓶位置，此方式針從樣品瓶抽完樣品后，會在針座旁邊中洗針。3.6 柱溫箱參數(shù)設定: 在“溫度”下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度，如：40度。并選中它，點擊“更多信息” 鍵，如圖所示，選中“與左側相同”，使柱溫箱的溫度左右一致。3.7 DAD檢測器參數(shù)設定: 檢測波長: 254nm，帶寬=4nm， 參比波長=360nm，帶寬=100nm; 檢測波長：一般選擇最大吸收處的波長。樣品帶寬： 一般選擇最大吸收值一半處的整個寬度。參比波長：一般選擇在靠近樣品信號的無吸收或低吸收區(qū)域 。 參比帶寬： 至少要與樣品信號的帶寬相等， 許多情況下用100nm作為缺省值。峰寬（響應時間） ：其值盡可能接近要測的窄峰峰寬。狹縫-狹縫窄，光譜分辨率高；寬時，噪音低。同時可以輸入采集光譜方式，步長，范圍，閾值。選中所用的燈。 可以開啟光學單元溫度控制;可以設定8通道信號等。 3.8 FLD 檢測器參數(shù)設定: 色譜條件： 響應時間=4s. 停止時間： 4min。 激發(fā)波長:200-700nm，步長為 1nm，或零級。 發(fā)射波長: 280-900nm， 步長為 1nm，或零級。 PMT:多數(shù)應用適當?shù)脑O定值為 10，若高濃度樣品峰被切平頭，則減少 PMT 值。 “峰寬”：大多數(shù)應用設為 4s，只有快速分析采用小的設定值。 多波長及光譜（激發(fā)） 。 多波長及光譜（發(fā)射） 。 同時可以輸入范圍、步長、采集光譜。 點擊“確定”進入下一畫面。3.9 運行時選項表 在“ 運行時選項表 ”中，選中“ 數(shù)據(jù)采集” ，點擊“確定” 。3.10 保存方法 從“方法”菜單，選中“方法另存為” ，輸入一方法名，如“測試” ，點擊“確定。4 單次樣品運行 從“運行控制”菜單中，選擇“樣品信息”選項，如下圖所示，輸入操作者名稱，如“安裝工程師” ；在“數(shù)據(jù)文件 ”中選擇“手動”或“前綴/計數(shù)器” 。點擊“確定”，從“系統(tǒng)視圖 菜單啟動系統(tǒng)。 等儀器準備好，基線平穩(wěn)，從“運行控制”菜單中選擇“運行方法” ，進樣。(若無自動樣器，則基線平穩(wěn)后，進樣并搬動手動進樣閥，啟動運行。)5 面積百分比數(shù)據(jù)處理 5.1 選擇界面 從“視圖”菜單中，點擊“數(shù)據(jù)分析”進入數(shù)據(jù)分析畫面。5.2 調(diào)用信號 從“文件”菜單選擇“調(diào)用信號” ，選中您的數(shù)據(jù)文件名，如下圖所示。點擊“ 確定” ，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。5.3 做譜圖優(yōu)化： 從“圖形”菜單中選擇“信號選項” ，如下圖所示。從“范圍” 中選擇“滿量程” 或“自動量程” 及合適的時間范圍或選擇“自定義量程” 調(diào)整。反復進行，直到圖的比例合適為止。點擊“ 確定” 。5.4 積分優(yōu)化: 從“積分”菜單中選擇“積分事件”選項，如下圖所示。選擇合適的“斜率靈敏度” ， “峰寬” ， “最小峰面積” ， “最小峰高” 。 從“積分”菜單中選擇“積分”選項， 則數(shù)據(jù)被積分。 如積分結果不理想，則修改相應的積分參數(shù)，直到滿意為止。 點擊左邊“”圖標，將積分參數(shù)存入方法。5.5 打印報告: 從“報告”菜單中選擇“設定報告”選項，進入如下圖所示畫面。 點擊“定量結果”框中“計算”右側的黑三角，選中“面積百分比” ，其它選項不變。 點擊“ 確定” 。從“報告”菜單中選擇“打印報告” ，則報告結果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機上，則點擊“報告” 底部的“打印”鈕。6 關機 關機前，先關燈，用相應的溶劑充分沖洗系統(tǒng)。 退出化學工作站，依提示關泵，及其它窗口，關閉計算機（用 shut down 關） 。 關閉 Agilent 1290 各模塊電源開關。 7 定量數(shù)據(jù)處理 7.1 點擊“方法”菜單，選擇“調(diào)用方法L.”，在方法目錄中選擇要進行定量設定的方法，該方法是經(jīng)過積分和譜圖優(yōu)化過的方法。點擊“確定”，則選擇的方法被調(diào)出。7.2 從“文件”菜單中選擇“調(diào)用信號”選項， 選中標樣的數(shù)據(jù)文件名， 點擊 “確定”，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。檢查確認積分和譜圖優(yōu)化的參數(shù)是否合適。7.3 從“校正”菜單中選擇，“新建校正表”按鈕，進入以下畫面， 確認選項在“自動設定”；級別為“1”，點擊“確定”。若要信號單獨計算，則選擇前面的空白框。7.4 在覆蓋現(xiàn)有校準表中對話框中，選擇“是（Y）”。若方法中沒有舊的校準表，無此項。 7.5 則所有積過分的峰，其保留時間、峰面積按序顯示在校準表中。如圖所示，依次輸入化合物的名稱、含量，校準曲線顯示在右下方?？梢栽O定參考峰等。若用內(nèi)標方法定量，還須選擇內(nèi)標，點擊“內(nèi)標“下的區(qū)域，選擇那個峰作為內(nèi)標峰，指定每個色譜峰以那個內(nèi)標為參比。點擊“確定”。 7.6 在刪除含量為零的行對話框中選擇“是（Y）”。則校準表中未輸入含量的峰從表中刪除。 7.7 點擊“校準”菜單，選擇“校準設置”按鈕，進入以下畫面，輸入單位：如“%”；其它項不變。點擊“確定”。 7.8 打印報告: 從“報告”菜單中選擇“ 指定報告”選項。點擊“定量結果”框中“定量”右側的黑三角，選中“外標法”，其它選項不變。點擊“確定”。-若是用內(nèi)標法定量，則選“內(nèi)標法”。 從“報告”菜單中選擇“打印報告“，則報告結果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機上，則點擊“報告“ 底部的“打印”鈕。-可以選擇打印到文件中，如PDF格式。 7.9 若有多個濃度標樣，則依次調(diào)出校準數(shù)據(jù)，調(diào)出每一個校