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文檔簡介
唾液淀粉酶最適pH值的測定作者:楊璇璇 黎丁菱 甘杏萍 王雅梅 黎氏賢厚1、 前言 生物體內的酶是對其特異底物起高效催化作用的蛋白質和核酸,前者是機體內催化各種代謝反應最重要的催化劑。酶分子中的許多極性基團。在不同的PH條件下解離狀態(tài)不同,其所帶電荷的種類和數(shù)量也各不相同,酶活性中心的某些必需基團往往僅在某一解離狀態(tài)時才最容易同底物結合或具有最大的催化活性。許多具有可解離基團的底物和輔酶的荷電狀態(tài)也受PH改變的影響,從而影響酶對它們的親和力。此外,PH還可以影響酶活性中心的空間構象,從而影響酶的活性。因此,PH的改變對酶的催化作用影響很大。 酶催化活性最高時反應體系的PH稱為酶促反應的最適PH。 測定酶的最適PH值,是進一步了解酶生物學活性的基礎。 本實驗用唾液淀粉酶為材料來觀察酶活性受PH影響的情況。唾液中含有唾液淀粉酶。淀粉在該酶的催化作用下會隨著時間的延長而出現(xiàn)不同程度的水解,從而得到各種糊精乃至麥芽糖、少量葡萄糖等水解產物。碘液與淀粉及其不同程度的水解產物反應呈現(xiàn)不同顏色,即:淀粉(藍色)、紫色糊精(紫色)、紅色糊精(紅色)、麥芽糖及少量葡萄糖(黃色)。用分光光度計測量出各溶液在660nm處的吸光度A,從而間接測出唾液淀粉酶的最適pH值。 結果測得A在pH值6.08.0范圍內變化并且隨著pH的增大先減小后增大,pH6.8左右,吸光度值最低,所以唾液淀粉酶最適pH值約為6.8。二、材料與方法1、材料與試劑1) 人唾液中的唾液淀粉酶2) 白瓷板、中試管、試管架、毛刷、吸耳球、玻璃筆、小燒杯、坐標紙、漱口水3) 37恒溫水浴箱、分光光度計、沸水浴4) 1.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管、膠頭滴管5) 0.025%淀粉溶液、0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液、0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液、碘液、蒸餾水2、方法 1 ) 緩沖液的配置:根據下表,配置各個pH值的緩沖溶液各10mlPH值 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 0.2mol/L(ml) 0.615 0.925 1.33 1.88 2.45 3.05 3.6 4.05 4.35 4.58 4.740.2mol/L(ml) 4.39 4.08 3.68 3.13 2.55 1.95 1.40 0.950 0.650 0.425 0.265 2) 唾液的獲取:蒸餾水漱口,然后用舌尖抵住上額或下額齒根后,微低頭.輕啟雙唇,將下嘴唇擱在燒杯邊緣,讓唾液自然流入試管中.3) 唾液的稀釋:取10支試管,分別編上號09管號 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9唾液(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.10.1蒸餾水(ml) 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 20.0 4)唾液稀釋倍數(shù)的選?。毫砣?0支試管,分別編上09號,各取上述稀釋的唾液各1ml,分別加入相應編號的試管里,然后向10支試管內同時加入1ml的0.025的淀粉溶液,振蕩混勻后放入37恒溫水浴箱中,5分鐘后取出,滴加23碘液,振蕩混勻,觀察顏色,選取顏色變化適中的一支,記錄稀釋倍數(shù)。5) 測量pH: 取12支試管,分別標上號112,按下表操作管號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 120.02淀粉溶液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 12ml緩沖溶液pH 6.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 37水浴10分鐘稀釋唾 液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1充分混勻后繼續(xù)水浴加熱,從1號試管中每隔1min取一滴液體,滴入白瓷板中,再滴一滴碘液與之反應,觀察顏色變化,當顏色變黃時,取出212號試管,然后沸水浴 15min ,使酶失活,酶促反應停止。然后后取出各試管,冷卻至室溫,往各支試管滴加12滴碘液。6)測量吸光度并記錄數(shù)據用分光光度計測出212號試管中溶液的吸光度A值,做好記錄7)作圖在坐標紙上作出平滑曲線,取曲線最低點對應的pH值,即為唾液淀粉酶的最適pH值 三、結果圖表四、討論 本實驗中,當唾液淀粉酶的活性最大時,淀粉被分解得最多,剩余底物的量最少,A值最小,過酸或過堿均會抑制酶的活性,使之分解的底物減少,A值增大。 由所作曲線可知唾液淀粉酶的最適pH值在6.8左右。在PH6.8時唾液淀粉酶的活性隨PH的升高而增大,在PH=6.8達到最大值,在PH6.8時唾液淀粉酶的活性隨PH的升高而降低,因此唾液淀粉酶的最適pH值為6.8,如果過酸或過堿均會降低酶的催化活性。最適PH不是酶的特征性常數(shù),它受底物濃度、緩沖液種類與濃度以及酶純度等因素的影響。溶液PH高于或低于最適PH時,酶活性降低,遠離最適PH時還會導致酶變性。在測定酶活性時,應選用適宜的緩沖液以保持酶活性的相對恒定。五、參考文獻 1 許冰 ,
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