



全文預覽已結(jié)束
下載本文檔
版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
免疫組化的經(jīng)驗總結(jié)(1)常見問題 生 物 谷 網(wǎng) 站 免疫組織化學的概念: 免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學。免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。免疫組化實驗所用的組織和細胞標本有哪些?實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類,前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本最常用、最基本的方法,對于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進行抗原修復,是免疫組化中首選的組織標本制作方法。石蠟切片為什么要做抗原修復?有哪些方法?石蠟切片標本均用甲醛固定,使得細胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇,同時蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進行IHC染色時,需要先進行抗原修復或暴露,即將固定時分子之間所形成的交聯(lián)破壞,而恢復抗原的原有空間形態(tài)。常用的抗原修復方法有微波修復法,高壓加熱法,酶消化法,水煮加熱法等,常用的修復液是pH6.0的0.01 mol/L的檸檬酸鹽緩沖液。免疫組化常用的染色方法有哪些?根據(jù)標記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標法,親和組織化學法,后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,其中生物素抗生物素染色法最常用??贵w的保存:抗體儲存容器應由不吸附蛋白質(zhì)的材料制成,常用的有聚丙烯,聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如儲存的抗體中蛋白濃度很低(10-100mg/L),就應另加隔離蛋白以減少容器對抗體蛋白的吸附,隔離蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。絕大多數(shù)已稀釋的抗體應存在4-8條件下,以免凍融對抗體蛋白產(chǎn)生有害效應??贵w原液和已分離的免疫球蛋白組分應保存于-20條件下,并避免反復凍融。冷凍的抗體溶液應置于室溫中緩慢地解凍,應絕對避免用高溫快速解凍。被細菌污染的抗體常會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,應將污染的抗體溶液及其他試劑棄之。為防止細菌污染,可于抗體溶液中加入0.01%疊氮鈉??贵w經(jīng)真空冷凍干燥后置-20以下可保存3-5年。保存稀釋后的單抗應加入0.1%疊氮鈉濃度。大多數(shù)稀釋抗體可進行冷凍保存,少數(shù)抗體可能會丟失抗原活性。大多數(shù)單抗,只要蛋白濃度適當,可在4下保存數(shù)月。多聚賴氨酸溶液(Poly-L-Lysine Solution) Cat.No.: SGP8920 Size: 10mlConc.: 0.1% w/v, in water Storage: 18-26Thimerosal, 0.01%, added as preservative多聚賴氨酸溶液是廣泛應用的組織切片與玻片黏合劑,該多聚陽離子分子與組織切片上的陰離子相互作用會產(chǎn)生較強的黏合力。適用組織學,免疫組織化學,冰凍切片,細胞涂片,原位雜交等使用的玻片的防脫片處理,以防實驗操作過程中組織掉片。也可用于細胞培養(yǎng),增加細胞貼壁能力。使用說明免疫學操作步驟(可直接在玻片上涂布)1 滅菌的ddH2O 1:10稀釋該多聚賴氨酸溶液。2 用之前將稀釋的多聚賴氨酸溶液放在室內(nèi),使其溫度到室溫18-263 將玻片浸在稀釋的多聚賴氨酸溶液5分鐘。注意增加時間不會提高包被效果。4在60烘箱1小時干燥,或室溫18-26過夜干燥待用。注意1 每100mL已稀釋的多聚賴氨酸溶液要包被的玻片40-90張, 超過90張片子將影響其黏合力。2 用之前的玻片必須保持清潔。必要時用含1% HCl的70%乙醇溶液來清洗。4 釋過的多聚賴氨酸溶液要放在2-8,至少在3個月
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 我國數(shù)據(jù)產(chǎn)權的法律供給需求現(xiàn)狀及優(yōu)化路徑研究
- 阿戈美拉汀緩解棕櫚酸誘導卵母細胞減數(shù)分裂異常的作用研究
- 基于深度學習的區(qū)域滑坡易發(fā)性評價研究
- 面向建筑方案設計的沉浸式空間評價研究
- 晶澳科技企業(yè)價值評估研究
- ZIFs的機械化學法合成及CO2吸附性能研究
- 牛羊革及涂層后力學性能研究與分子動力學模擬
- 2024年駐馬店正陽縣育才外國語學校高中部招聘教師考試真題
- 2024年永州江永縣招聘醫(yī)技人員考試真題
- 碳或碳負載金屬催化劑的合成及降解有機污染物的性能研究
- 高速鐵路的電磁干擾及其防護措施
- 迪慶藏族自治州發(fā)電有限責任公司新樂水電站環(huán)境影響后評價報告書
- 《中藥學》課件-中藥思政元素案例
- 高壓水除磷系統(tǒng)在柳鋼熱軋生產(chǎn)線上的使用和創(chuàng)新
- 醫(yī)院保潔服務投標方案(完整技術標)
- 廣東省深圳市寶安區(qū)2022-2023學年二年級下學期期末數(shù)學試卷
- 幼兒園規(guī)范化幼兒園參評自評報告
- 光伏發(fā)電售后合同范本
- 《水資源管理》機考題庫及答案開放大學考試題庫 答案
- 菜鳥WMS(大寶)操作手冊 (修復的)
- 東南亞藝術概論智慧樹知到答案章節(jié)測試2023年云南藝術學院
評論
0/150
提交評論