第八章昆蟲(chóng)病原細(xì)菌利用

第八章昆蟲(chóng)病原細(xì)菌的利用,昆蟲(chóng)病原細(xì)菌的主要類群金龜子乳狀病芽孢桿菌球性芽孢桿菌蘇云金桿菌的毒素和致病機(jī)理蘇云金桿菌的使用技術(shù),自然界中，細(xì)菌種類繁多，數(shù)量大，分布廣泛，其中能使昆蟲(chóng)感染致病的蟲(chóng)生細(xì)菌相當(dāng)多，昆蟲(chóng)因細(xì)菌而引起的疾病稱為細(xì)菌病。細(xì)菌病有多種，但細(xì)菌病有其共同的特征，即當(dāng)昆蟲(chóng)感病后，不大活動(dòng)，食欲減退，口腔及肛門(mén)常有排泄物，病原菌侵入體腔后引起敗血癥。死后蟲(chóng)體色加深，一般都有一股臭味。由于體都軟化腐爛，所以通稱為軟化病。,一、昆蟲(chóng)病原細(xì)菌的主要類群,Bucher（1960）分為專性病原細(xì)菌、產(chǎn)生晶體的芽孢桿菌、兼性病原細(xì)菌和潛勢(shì)病原細(xì)菌。通常分為3類：專性兼性潛勢(shì)病原細(xì)菌,（一）專性昆蟲(chóng)病原細(xì)菌（Obligateentomopathogenicbacteria）只能在寄主細(xì)胞中生長(zhǎng)繁殖，不能在人工培養(yǎng)基上正常生長(zhǎng)，一般經(jīng)口服傳染。自然界中寄主范圍較窄。日本金龜子芽孢桿菌（Bacilluspopilliae）天幕毛蟲(chóng)芽孢桿菌（Clostridiummalacosomae）,Bacilluspopilliae,（二）兼性病原細(xì)菌（Facultativeentomopathogenicbacteria）可在昆蟲(chóng)體以外的生境中增殖，也能在人工培養(yǎng)基上正常生長(zhǎng)發(fā)育的細(xì)菌。包括產(chǎn)孢和不產(chǎn)孢的桿菌。寄主范圍較廣。蘇云金桿菌Bt粘質(zhì)沙雷氏菌等,（三）潛勢(shì)病原菌（Potentialentomopathogenicbacteria）普遍存在于昆蟲(chóng)的消化道中，主要是一些不產(chǎn)生芽孢的桿菌。由于毒素和酶的產(chǎn)生數(shù)量少，難以侵入體腔內(nèi)給宿主造成危害。,（四）細(xì)菌殺蟲(chóng)劑的特點(diǎn)（1）毒力高。菌劑毒力足以壓倒害蟲(chóng)的抗病力，能夠穩(wěn)定可靠地使害蟲(chóng)發(fā)病致死；（2）穩(wěn)定性。菌劑不致因受自然環(huán)境影響（如日光、干燥等）、人工處理、懸浮劑、載體、貯藏、不同施藥方式等而減低殺蟲(chóng)效力；,（3）殘效期長(zhǎng)，并有在害蟲(chóng)種群中自然傳播的能力；（4）作用迅速；（5）有選擇性。即對(duì)防治對(duì)象劇毒，而對(duì)植物、益蟲(chóng)以及哺乳動(dòng)物等無(wú)毒；（6）可以大規(guī)模生產(chǎn)，經(jīng)濟(jì)安全。,二、金龜子乳狀病芽孢桿菌,Dutky（1940）報(bào)道日本金龜子芽孢桿菌（B.popilliae）能引起日本金龜子等幼蟲(chóng)的乳狀?。∕ilkydisease）。其后世界各國(guó)從不同金龜子幼蟲(chóng)分離出乳狀病原細(xì)菌多種。用金龜子芽孢桿菌防治日本金龜子是生物防治最典型的例子之一。第一個(gè)日本金龜子芽孢桿菌制劑于1950年在美國(guó)登記，成為美國(guó)政府批準(zhǔn)的第一個(gè)生物防治制劑。,Grubinfectedwithmilkydisease(left)causedbyabacteriumcallBacilluspopilliae,1、侵染過(guò)程金龜子芽孢桿菌主要通過(guò)芽孢感染和傳播，芽孢經(jīng)口攝入。當(dāng)幼蟲(chóng)吞食芽孢后，芽孢在腸道中萌發(fā)成桿狀的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞侵染中腸細(xì)胞，隨后穿過(guò)腸壁進(jìn)入體腔，大量繁殖，形成芽孢，使幼蟲(chóng)的血淋巴呈乳狀，死亡幼蟲(chóng)呈乳白色，故稱為乳狀病（Milkydisease）。,2、致病機(jī)制尚不清楚，主要有兩種觀點(diǎn)由于細(xì)菌在生長(zhǎng)過(guò)程中利用了昆蟲(chóng)的大量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和多種生長(zhǎng)素，致使昆蟲(chóng)不能正常發(fā)育。破壞了昆蟲(chóng)的某種酶系統(tǒng)，從而抑制了寄主昆蟲(chóng)的生活機(jī)能。,3、培養(yǎng)繁殖金龜子芽孢桿菌的芽孢能在寄主體外存活，營(yíng)養(yǎng)體也能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖，但卻不能在人工培養(yǎng)基上正常地形成芽孢。因此，商品制劑Doom、Japidemic和MilkySpore都是采用幼蟲(chóng)活體培養(yǎng)的方法制備的。,3齡幼蟲(chóng),飼育缸,微量注射，3ml/頭100萬(wàn)芽孢/ml,研碎，稀釋，晾干、包裝,1-3周,1億芽孢/g菌劑,4、應(yīng)用研究由于芽孢在土壤中能長(zhǎng)期存活，感病死亡后的蠐螬又會(huì)不斷增加土壤中的芽孢數(shù)量，因此疾病一旦形成，芽孢便能在土壤中逐漸累積和傳播，從而達(dá)到長(zhǎng)期控制的效果。利用金龜子芽孢桿菌防治蠐螬是一種有效的生物防治法。美國(guó)在13個(gè)州和哥倫比亞地區(qū)利用金龜子芽孢桿菌防治蠐螬面積達(dá)10余萬(wàn)英畝，防治效果為6080。,5、注意事項(xiàng)土壤中含菌量與乳狀病感病率成正相關(guān)。如每千克土壤含芽孢4109個(gè)，乳狀病發(fā)病率為82,每千克土壤含0.25109個(gè)芽孢時(shí)，則發(fā)病率僅為44。溫度條件。乳狀病發(fā)病適溫為28-30，如溫度低于16，幾乎不發(fā)病。,三、球性芽孢桿菌,球形芽孢桿菌(Bacillussphaericus)在自然界分布廣泛，大多數(shù)菌株對(duì)昆蟲(chóng)沒(méi)有毒性，但有一些對(duì)蚊幼蟲(chóng)有高毒力，它的毒效成分在細(xì)胞內(nèi)，不分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)液中。因此，只有昆蟲(chóng)吞食細(xì)胞后才顯示毒性。,1、球形芽孢桿菌的毒素（1）二元毒素（BinaryToxin,Btx）分子量為42kDa和51kDa的蛋白質(zhì)，只有當(dāng)兩種蛋白質(zhì)在一起時(shí)才產(chǎn)生毒性，兩種蛋白等量時(shí)達(dá)到最大殺蚊毒效。它的伴孢晶體被部分地包在芽孢外壁之中，使得芽孢和伴孢晶體在離體的條件下仍是一個(gè)整體。目前已對(duì)多個(gè)菌株的二元毒蛋白基因進(jìn)行了測(cè)序。,（2）蛋白毒素（Mtx）在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，同芽孢的合成無(wú)關(guān)。Mtx毒素不穩(wěn)定，熱處理、反復(fù)凍熔都會(huì)嚴(yán)重影響其殺蚊活性。這種蛋白的基因已被克隆和作序列分析。,2、球形芽孢桿菌的殺蟲(chóng)范圍球形芽孢桿菌的殺蟲(chóng)范圍僅限于蚊蟲(chóng)的幼蟲(chóng)，它通過(guò)取食過(guò)程進(jìn)行感染，蚊子的幼蟲(chóng)在取食8-12h后，即可發(fā)生死亡，幼蟲(chóng)吞入球狀芽孢桿菌后，菌體在腸道中被消化，細(xì)胞壁破裂，菌體內(nèi)的毒素釋放出來(lái)，從而殺死蚊蟲(chóng)的幼蟲(chóng)。,3、球形芽孢桿菌的利用球形芽孢桿菌在昆蟲(chóng)死后，可以在蟲(chóng)尸中重新增殖，芽孢的數(shù)目增加。球形芽孢桿菌的芽孢和伴孢晶體在環(huán)境中持效期較長(zhǎng)，并有可能在環(huán)境中再循環(huán)。因此，從20世紀(jì)80年代中后期開(kāi)始，球形芽孢桿菌高毒菌株的篩選工作開(kāi)始受到重視。迄今為止，美國(guó)、法國(guó)及我國(guó)等10個(gè)國(guó)家研制了不同劑型的產(chǎn)品10余種，主要用于殺蚊幼蟲(chóng)的效果評(píng)價(jià)。,目前使用最多的球形芽孢桿菌制劑主要是乳劑和粉劑。,四、蘇云金桿菌,蘇云金芽孢桿菌（Bacillusthuringiensis，Bt）最早發(fā)現(xiàn)于1902年，1938年世界上第一個(gè)Bt制劑Sporeine在法國(guó)問(wèn)世，從而掀開(kāi)了蘇云金芽孢桿菌殺蟲(chóng)劑生產(chǎn)的序幕。近10年來(lái)，Bt已成為加拿大控制樅色卷蛾（Sprucebudworm）的主要手段。在其它國(guó)家，Bt運(yùn)用于控制毛蟲(chóng)、吉卜賽毒蛾（gypsymoths）等。目前全世界約有Bt殺蟲(chóng)劑100多個(gè)品種，年銷(xiāo)售額近1億美元。,ThisleafrollercaterpillardiedafteringestingBacillusthuringiensis.Discolourationofthegut,asseenhere,istypicalofmortalityfromBacillusthuringiensis,（一）基本特征1、形態(tài)特征（1）營(yíng)養(yǎng)期G+的好氣性芽孢桿菌，兩端鈍圓，周生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，少數(shù)無(wú)鞭毛，營(yíng)養(yǎng)體單個(gè)存在或2-5個(gè)成鏈狀。內(nèi)生芽孢橢圓形或圓形。,營(yíng)養(yǎng)體為繁殖階段，橫裂生殖，對(duì)數(shù)生殖期往往2、4、8個(gè)或更多的營(yíng)養(yǎng)體連在一起成串狀。此時(shí)繁殖快、代謝旺盛，適于用作接種材料。營(yíng)養(yǎng)體在芽孢出現(xiàn)前先停止繁殖，細(xì)胞質(zhì)濃縮，出現(xiàn)液泡和微粒，并逐漸形成芽孢和伴孢晶體。,（2）孢子囊期當(dāng)菌體成長(zhǎng)老熟時(shí)，其一端斜生一個(gè)橢圓形的芽孢，另一端同時(shí)出現(xiàn)菱形(或其他形狀)的晶體即伴孢晶體(Parasporalcrystal)，是其主要的活性成分，伴孢晶體由不同分子量的多肽原毒素（protoxin）組成，此時(shí)為孢子囊期。孢子囊呈長(zhǎng)卵圓形，比營(yíng)養(yǎng)體粗壯。用石炭酸復(fù)紅染色時(shí)，營(yíng)養(yǎng)體為紅色，晶體深紅色，而芽孢不著色僅見(jiàn)具有輪廓的折光體。,Bacillusthuringiensissporeandproteincrystals,（3）芽孢和伴孢晶體的釋放孢子囊到一定時(shí)間后破裂，釋放出游離的芽孢和殺蟲(chóng)晶體蛋白。芽孢是細(xì)菌的休眠體，對(duì)高溫、干燥等不良環(huán)境條件有較強(qiáng)的抵抗力，菌劑即以芽孢粉狀態(tài)可以長(zhǎng)期貯存。芽孢遇適宜條件可萌發(fā)成新的營(yíng)養(yǎng)體。伴孢晶體內(nèi)含蛋白質(zhì)毒素，是殺蟲(chóng)的主要有效物質(zhì)。,2、培養(yǎng)特征蘇云金桿菌能在多種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，在不同的培養(yǎng)基上形成的茵落形態(tài)有所不同。蘇云金桿菌的不同變種在相同的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)性狀基本上頗為近似，但也表現(xiàn)有一定程度的差異。,3、生理特性Bt.對(duì)營(yíng)養(yǎng)條件要求不高。碳源：淀粉、糊精、麥芽糖、葡萄糖等。氮源：牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、花生餅粉、豆餅粉、魚(yú)粉，玉米漿等。無(wú)機(jī)鹽：磷酸氫二鉀、硫酸鎂、碳酸鈣等。Bt.在12-40間的溫度條件下都能生長(zhǎng)，以27-32較為適宜，35-40生長(zhǎng)很快，但易衰老，溫度低則生長(zhǎng)緩慢。該菌適于微堿性條件，最適pH是7.5，當(dāng)pH達(dá)8.5時(shí)還能正常形成芽孢，如pH降至5以下則不能形成芽孢。,4、蘇云金芽孢桿菌的類群根據(jù)營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞鞭毛抗原的血清學(xué)反應(yīng)及其它特性，蘇云金芽孢桿菌可劃分為71個(gè)血清型和88個(gè)血清型亞種。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)蘇云金芽胞桿菌的伴孢晶體蛋白至少對(duì)脊椎動(dòng)物中4個(gè)門(mén)和節(jié)肢動(dòng)物門(mén)中9個(gè)目的有害生物有活性。少數(shù)蘇云金桿菌產(chǎn)生外毒素（exotoxin）血清，對(duì)家蠅亦有毒性。,5、蘇云金桿菌不同亞種或菌株對(duì)昆蟲(chóng)的致病性和毒力的差異蘇云金桿菌的不同亞種對(duì)昆蟲(chóng)的毒力差異很大。即使是同一個(gè)亞種，不同菌株對(duì)昆蟲(chóng)的毒力差異也可以很大。毒力的大小與產(chǎn)生的毒素有關(guān)，也與細(xì)菌的致病機(jī)制和寄主昆蟲(chóng)的特異性有關(guān)。,（二）蘇云金桿菌的毒素和致病機(jī)理1、蘇云金桿菌的毒素蘇云金桿菌能產(chǎn)生對(duì)多種昆蟲(chóng)或其他無(wú)脊椎動(dòng)物有害的活性成分，這些活性成分是其殺蟲(chóng)的核心。目前，已從Bt中發(fā)現(xiàn)了10幾種有不同功能的生物活性成分。,（1）殺蟲(chóng)晶體蛋白（Insecticidalcrystalprotein，ICP）伴孢晶體（Parasporalcrystal）、伴孢晶體包含體（Parasporalcrystalinclusionbody）、晶體蛋白（Crystalprotein）、晶體毒素（Crystaltoxin），又稱-內(nèi)毒素，是蘇云金桿菌具有殺蟲(chóng)性能的主要毒素。ICP由cry基因和cyt基因編碼，這些基因大多位于染色體外的質(zhì)粒上。ICP的分子量27-140kDa,形狀各異。Bt的殺蟲(chóng)活性與ICP的形狀、結(jié)構(gòu)、大小密切相關(guān)。,ICP基因的命名1981年Schnepf從HD-1中克隆到了第1個(gè)ICP基因。1998年Crickmore依據(jù)ICP基因的核苷酸序列及其演化關(guān)系，將ICP基因分為4級(jí)。2009年8月，ICP基因按照核苷酸序列的同源性已被分為cry1-cry59,cyt1和cyt2共61類，487個(gè)，其中cry基因460個(gè)，cyt基因27個(gè)。,ICP的三維結(jié)構(gòu)及功能ICP中最先獲得三維結(jié)構(gòu)的是鞘翅目昆蟲(chóng)特異性毒素蛋白Cry3A，接著又獲得鱗翅目昆蟲(chóng)特異性毒素蛋白Cry1Aa的三維結(jié)構(gòu)。,結(jié)構(gòu)域：由8個(gè)螺旋組成，與細(xì)胞膜插入及孔隙形成有關(guān)；結(jié)構(gòu)域：由3個(gè)折疊片和2個(gè)短的螺旋組成，與昆蟲(chóng)上皮細(xì)胞表面毒素受體的結(jié)合有關(guān)；結(jié)構(gòu)域：由2個(gè)折疊片形成一個(gè)面對(duì)面的夾層結(jié)構(gòu)，具有毒素的穩(wěn)定性、特異性與結(jié)合有關(guān)。,（2）營(yíng)養(yǎng)期殺蟲(chóng)蛋白（Vegetativeinsecticidalprotein，VIP）是專指營(yíng)養(yǎng)期表達(dá)的殺蟲(chóng)蛋白。具有熱不穩(wěn)定性的可溶蛋白，95處理20min便失去活性。2009年8月，有65個(gè)vip基因被鑒定分離。VIP由vip1、vip2、vip3三種基因編碼，殺蟲(chóng)活性各不相同，且在氨基酸序列的進(jìn)化上與ICP沒(méi)有任何同源性。,Vip3A以可溶性蛋白的形式存在于害蟲(chóng)中腸，與中腸上皮細(xì)胞上的受體結(jié)合，形成穩(wěn)定的離子通道，破壞中腸形成孔洞，造成昆蟲(chóng)死亡。對(duì)夜蛾科害蟲(chóng)具有廣譜的殺蟲(chóng)活性。一些對(duì)Bt殺蟲(chóng)晶體蛋白有很強(qiáng)抗性的昆蟲(chóng)對(duì)Vip3A都較為敏感，如Vip3A對(duì)小地老虎的毒性要比Cry1Ac高260多倍。,（3）-外毒素（蘇云金素thuringiensin）是Bt在生產(chǎn)階段產(chǎn)生的一種熱穩(wěn)定（121處理15min，殺蟲(chóng)毒力不降低）、低分子量（701kDa）腺嘌呤核苷酸衍生物，主要存在于Bt血清型H1菌株中。它是一種胞外因子，對(duì)蠅類毒力高，稱為“蠅因子”或“蠅毒素”；對(duì)紫外線穩(wěn)定。殺蟲(chóng)譜較殺蟲(chóng)晶體蛋白廣，對(duì)線蟲(chóng)、螨類均有毒殺作用。主要通過(guò)抑制RNA聚合酶的活性阻斷RNA合成導(dǎo)致昆蟲(chóng)死亡，因而對(duì)人類和動(dòng)物有一定毒性。,（4）雙效菌素（zwittermiciaA）即ZwA因子，是在Bt和蠟質(zhì)芽孢桿菌Bacilluscereus(Bc)中發(fā)現(xiàn)的一種線形氨基多元醇類化合物?？扇苡谒?，堿性條件下易水解，對(duì)熱敏感?？梢种谱幽揖?dān)子菌的生長(zhǎng)。雖然其殺蟲(chóng)活性低，但對(duì)Bt的其他殺蟲(chóng)活性物質(zhì)具增效作用，特別是與許多ICP混用時(shí)，不但具高的增效作用，還可減緩害蟲(chóng)的抗性。雙效菌素化學(xué)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，可以人工合成，具有很好的開(kāi)發(fā)利用前景。,2、蘇云金桿菌致病機(jī)理蘇云金桿菌對(duì)昆蟲(chóng)的致病作用主要是通過(guò)昆蟲(chóng)食入菌劑而引起的。菌劑包括芽孢和細(xì)菌所產(chǎn)生的毒素。菌體本身的繁殖可導(dǎo)致害蟲(chóng)的死亡，而昆蟲(chóng)能在短時(shí)間內(nèi)死亡往往是蘇云金桿菌產(chǎn)生的毒素所致。蘇云金桿菌對(duì)多種昆蟲(chóng)能引起發(fā)病而致死，但對(duì)另一些昆蟲(chóng)則致病力很差，甚至沒(méi)有作用。,ICP的致病機(jī)理首先溶解在昆蟲(chóng)的中腸中，ICP被昆蟲(chóng)的中腸蛋白酶加工成有活性的毒素；隨后被激活的ICP結(jié)合到中腸上皮細(xì)胞的刷狀緣膜上的特異受體上；最后ICP與受體結(jié)合從而引起毒素構(gòu)象變化，并使之能夠融合到中腸膜上，使膜形成孔隙和離子通道，導(dǎo)致昆蟲(chóng)死亡。昆蟲(chóng)對(duì)ICP抗性的產(chǎn)生往往就是因?yàn)槭荏w結(jié)構(gòu)的改變。,WhalonandWinge,2003,（三）Bt內(nèi)毒素的利用1、含Bt內(nèi)毒素新菌株的利用從20世紀(jì)80年代中后期開(kāi)始，利用DNA重組技術(shù)對(duì)毒素基因進(jìn)行改造，構(gòu)建綜合性能優(yōu)良的重組菌株已成為國(guó)外各大生物農(nóng)藥公司的目標(biāo)，目前已有10余種遺傳重組殺蟲(chóng)劑被批準(zhǔn)進(jìn)行后期田間試驗(yàn)。通過(guò)構(gòu)建重組菌株可以實(shí)現(xiàn)以下目標(biāo)：（1）擴(kuò)大殺蟲(chóng)譜；（2）延長(zhǎng)殺蟲(chóng)毒素的持效期及改進(jìn)釋放性能；（3）提高毒力和殺蟲(chóng)晶體蛋白的產(chǎn)量。,2、含Bt內(nèi)毒素的轉(zhuǎn)基因作物的利用1981年，Schnepf等人首次成功地克隆了第一個(gè)編碼Bt殺蟲(chóng)晶體蛋白基因，揭開(kāi)了利用基因工程培育抗蟲(chóng)植物的序幕。目前全世界總共已獲得了50多種轉(zhuǎn)Bt殺蟲(chóng)晶體蛋白基因植物，其中以雙子葉植物居多，而單子葉植物由于其遺傳轉(zhuǎn)化較困難，所以獲得的轉(zhuǎn)Bt基因的植物就相對(duì)較少。在已獲得的轉(zhuǎn)Bt殺蟲(chóng)晶體蛋白基因植物中，絕大多數(shù)植物對(duì)靶標(biāo)昆蟲(chóng)產(chǎn)生了強(qiáng)烈的毒殺作用，有效地減少了害蟲(chóng)損失。,2004年全球轉(zhuǎn)基因玉米、大豆、棉花和其它作物播種面積達(dá)到了2億英畝，比2003年的1.67億英畝增長(zhǎng)了20%。,Unsprayed,non-transgeniccotton(left)andunsprayedBt(Cry1Ac)cotton(right)priortoharvest,轉(zhuǎn)基因作物的優(yōu)點(diǎn)：（1）己發(fā)現(xiàn)的高水平的Bt抗性基因都是隱性基因，在植物體內(nèi)可穩(wěn)定地遺傳與表達(dá)；（2）殺蟲(chóng)蛋白對(duì)昆蟲(chóng)的幼蟲(chóng)特別有效，可實(shí)現(xiàn)蟲(chóng)害的早期防治；（3）可實(shí)現(xiàn)植物的整株保護(hù)，尤其是化學(xué)藥劑噴施不到的部位的防治（如鉆心蟲(chóng)）（4）對(duì)人、畜及非靶標(biāo)動(dòng)物群休無(wú)害，不會(huì)破壞生態(tài)平衡。由于毒蛋白存留在植物組織中，不會(huì)污染環(huán)境；（5）抗性持久，不易被環(huán)境因素所破壞。,3、害蟲(chóng)對(duì)Bt的抗性自20世紀(jì)90年代以來(lái)，在美國(guó)、泰國(guó)、馬來(lái)西亞、日本、中國(guó)等先后發(fā)現(xiàn)小菜蛾田間種群對(duì)Bt產(chǎn)生抗性以來(lái)，至少已有10種蛾類、2種甲蟲(chóng)、4種蚊蠅類經(jīng)50次以上反復(fù)Bt處理而表現(xiàn)有選擇抗性。在16種蟲(chóng)種中經(jīng)3120代后增高10倍。大多數(shù)對(duì)Cry毒素抗性產(chǎn)生的機(jī)理都和受體結(jié)合區(qū)域的突變有關(guān)。,SomeinsectspeciesandnematodesresistanttoCrytoxins,BravoandSoberon,2008.,延緩害蟲(chóng)產(chǎn)生抗性的方法：（1）在轉(zhuǎn)基因作物中加入新的殺蟲(chóng)基因，如Bin-like-Cry、Mtx-like-Cry和Vip毒素等。（2）在轉(zhuǎn)基因作物或工程菌中加入多種作用機(jī)理不同的cry基因，如將能夠與不同受體結(jié)合的cry基因在一株植物中表達(dá)。這樣，害蟲(chóng)世代間同時(shí)產(chǎn)生對(duì)多種毒素抗性的可能性就呈指數(shù)級(jí)下降了。,（3）對(duì)Cry毒素進(jìn)行分子改造，使其繞過(guò)與主要受體的作用，而直接產(chǎn)生活性。（4）利用鈣粘蛋白碎片來(lái)抑制害蟲(chóng)的抗性。鈣粘蛋白的CR12區(qū)域能夠提高Cry1A對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)的活性。,五、蘇云金桿菌在害蟲(chóng)防治上的應(yīng)用,1、殺蟲(chóng)范圍蘇云金芽孢桿菌類的各變種對(duì)鱗翅目、膜翅目、直翅目、雙翅目、鞘翅目等350余種昆蟲(chóng)有不同程度的防治效果，但主要應(yīng)用于防治下列害蟲(chóng)：（1）經(jīng)濟(jì)作物類：棉鈴蟲(chóng)、紅鈴蟲(chóng)、造橋蟲(chóng)、煙青蟲(chóng)；（2）蔬菜類：菜青蟲(chóng)、小菜蛾、菜螟；（3）糧食作物類：二化螟、三化螟、稻苞蟲(chóng)、稻縱卷葉螟，玉米螟等，（4）果樹(shù)類：松毛蟲(chóng)、桃小食心蟲(chóng)、尺