【畢業(yè)學(xué)位論文】（Word原稿）用酶法評(píng)定鴨飼料代謝能的方法學(xué)研究動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)博士論文

密級(jí) 論文編號(hào) 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 博士學(xué)位論文 用酶法評(píng)定鴨飼料代謝能的方法學(xué)研究 on on 摘 要 本研究根據(jù)鴨在常態(tài)條件下小腸液中消化酶酶譜的變異幅度，設(shè)計(jì)了與鴨小腸液中消化酶活性近似的人工 小 腸液，建立了以胃蛋白酶人工 鴨小 腸液兩步酶水解法估測(cè)鴨飼料代謝能值的離體評(píng)定方法，為構(gòu)建我國(guó)水禽飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的有效能值參數(shù)提供了現(xiàn)代化的測(cè)定手段。 本論文第一部分模擬鴨小腸液酶譜首先需要在克服應(yīng)激條件下獲得足夠量的小腸液的手段，關(guān)鍵技術(shù)是采集食糜的 T 型套管設(shè)計(jì)。本試驗(yàn)在參照豬、牛、羊小腸套管的基礎(chǔ)上優(yōu)選出了可持續(xù)采集食糜的專用套管及配套的食糜采集的方法。結(jié)果表明，本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的套管對(duì)腸道的損傷輕微，腸道與腹 脂的粘連率少。試驗(yàn)鴨安裝套管后 15 天內(nèi)能恢復(fù)到術(shù)前體重。經(jīng)套管收集的食糜量平均可達(dá) h。 第二部分為了獲得一般生產(chǎn)條件下，鴨小腸液消化酶酶譜的變異幅度，就通過簡(jiǎn)單 T 型套管獲得有代表性腸液的采樣方案及日糧營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)鴨小腸液消化酶活性的影響進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，北京鴨在自由采食、飲水的條件下，小腸液中消化酶活性具有晝夜節(jié)律及日間變化。代表性腸液的采樣方案為，采樣時(shí)間為 9:30 18:30，每次采集 1h，每次采樣后間隔 3h，然后重復(fù)采樣過程。一天共采集 3 次，隔日重復(fù)采樣過程 1 次，共采集 3 天。日糧能量水 平對(duì)鴨小腸液消化酶活性沒有顯著地影響，而蛋白質(zhì)水平對(duì)小腸液中淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶有顯著地影響。在一般生產(chǎn)條件下，北京鴨空腸液中消化酶活性 的變異范圍 分別為：淀粉酶 ，胰蛋白酶 ，糜蛋白酶 ，脂肪酶 ，蔗糖酶 ，麥芽糖酶 。 第三部分為了確定胃蛋白酶人工 鴨小 腸液的最適酶水解條件參數(shù)，就胃 蛋白酶 、 人工鴨小腸 液酶水解的 溫度、時(shí)間、 條件進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，酶水解法中，胃蛋白酶 的 濃度及人工腸液中酶的種類及活性可以代表鴨胃腸道中參與飼料消化的主要消化酶的生理水平。胃蛋白酶 的適宜水解時(shí)間為 3 小時(shí)，水解溫度為 38 。 人工 小腸 液酶水解 的最適 宜水解時(shí)間為 22 小時(shí)。 第四部分為了通過酶水解物總能值 （ 估測(cè)鴨飼料的生物學(xué)法代謝能值，以玉米為例研究了以酶法測(cè)值估測(cè)生物學(xué)法代謝能值的數(shù)學(xué)模型。結(jié)果表明，以玉米酶法測(cè)值回歸校正到鴨 排空強(qiáng)飼 法 代 謝 能 值 的 數(shù) 學(xué) 模 型 為 ： （ (g), (g). of ME J/J/ME J/J/Kg of to In of of In of ME J/J/ME J/J/Kg be I 目 錄 第一章 緒論 . 1 究目的和意義 . 1 內(nèi)外研究進(jìn)展 . 2 禽飼料有效能評(píng)定體系沿革 . 2 禽飼料代謝能的生物學(xué)評(píng)定方法 . 4 家禽飼料代謝能值評(píng)定方法中若干誤區(qū)的探討 . 7 酶法評(píng)定家禽飼料的代謝能值 . 10 究?jī)?nèi)容和技術(shù)路線 . 14 第二章 鴨的空腸食糜連續(xù)采集方法及其空腸套管的設(shè)計(jì) . 15 料與方法 . 15 驗(yàn)動(dòng)物、日糧及飼養(yǎng)管理 . 15 管設(shè)計(jì) . 16 管安裝部位與過程 . 16 理方案 . 17 本瓶的制備 . 19 糜的采集及流量測(cè)定 . 19 腸分段 . 19 計(jì)分析 . 20 結(jié)果與分析 . 20 術(shù)鴨的術(shù)后健康狀況及術(shù)部愈后局部的損害 . 20 后體重恢復(fù)狀況 . 21 管安裝位置 . 22 糜收集量 . 22 論 . 22 管的設(shè)計(jì)及材料篩選 . 23 管術(shù)部的篩選 . 23 管的使用效果 . 24 糜樣品保鮮 . 24 結(jié) . 24 第三章 鴨小腸液消化酶活性的晝夜節(jié)律及日糧能量蛋白比對(duì)消化酶活性的影響 . 25 料與方法 . 25 驗(yàn)動(dòng)物及其管理 . 25 驗(yàn)設(shè)計(jì)及日糧組成 . 25 果與分析 . 27 京鴨小腸液消化酶活性的晝夜節(jié)律 . 28 糧能量蛋白比對(duì)北京鴨小腸液中消化酶活性的影響 . 29 論 . 30 京鴨小腸液消化酶活性的變異 . 30 典型食糜樣品的采集方案 . 31 同能量蛋白比下北京鴨小腸液消化酶活性的變異 . 32 結(jié) . 33 第四章 胃蛋白酶人工鴨小腸液的酶水解條件的研究 . 35 料與方法 . 35 驗(yàn)日糧 . 35 驗(yàn)設(shè)計(jì) . 35 水解參數(shù)研究 . 36 水解物與未水解物的分離方法 . 37 樣品測(cè)定指標(biāo) . 38 法消化率的計(jì)算 . 38 據(jù)分析與統(tǒng)計(jì) . 38 果與分析 . 38 蛋白酶水解參數(shù)的確立 . 38 工小腸液酶水解參數(shù)的確立 . 40 論 . 42 水解法中消化酶的組成及活性 . 42 蛋白酶的水解時(shí)間與最適溫度 . 44 工小腸液酶水解的最適 時(shí)間 . 45 結(jié) . 46 第五章 玉米酶法測(cè)值估測(cè)生物學(xué)法代謝能值數(shù)學(xué)模型的研究 . 48 料與方法 . 48 驗(yàn)動(dòng)物及其管理 . 48 驗(yàn)設(shè)計(jì)及定標(biāo)玉米 . 48 謝能測(cè)定方案 . 50 驗(yàn)室酶水解法操作規(guī)程 . 52 品測(cè)定指標(biāo) . 52 據(jù)分析與統(tǒng)計(jì) . 52 果與分析 . 53 標(biāo)模擬玉米酶水解物總能值與排空強(qiáng)飼法 比較 . 53 米酶水解物總能值與排空強(qiáng)飼法 的數(shù)學(xué)模型 . 53 酶法估測(cè)的玉米代謝能值與排空強(qiáng)飼法 測(cè)值的比較 . 57 論 . 57 法測(cè)值與排空強(qiáng)飼法測(cè)值的比較 . 57 酶法測(cè)值為變量以排空強(qiáng)飼法代謝能值為依變量的數(shù)學(xué)模型建立原則及優(yōu)化 . 60 酶法估測(cè)鴨飼料代謝能值的 精度 . 61 結(jié) . 63 第六章 用酶法估測(cè)鴨飼料代謝能值的精度及重演性 . 65 料與方法 . 65 驗(yàn)動(dòng)物及其管理 . 65 驗(yàn)設(shè)計(jì)及驗(yàn)證玉米 . 65 謝能測(cè)定方案 . 66 實(shí)驗(yàn)室酶水解法操作規(guī)程 . 66 樣品測(cè)定指標(biāo) . 66 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì) . 66 果與分析 . 67 酶法估測(cè)的玉米鴨代謝能值的精度 . 67 排空強(qiáng)飼法測(cè)出的 與酶水解物總能值的比較 . 68 論 . 69 酶法評(píng)定鴨的玉米代謝能值的精度 . 69 水解法估測(cè)生物學(xué)效價(jià)的重演性 . 69 結(jié) . 70 第七章 結(jié)論 . 71 論 . 71 待深入研究的領(lǐng)域 . 71 研究創(chuàng)新之處 . 71 參考文獻(xiàn) . 72 致謝 . 78 個(gè)人簡(jiǎn)歷 . 79 目 錄 表 1前各國(guó)使用的家禽飼料有效能評(píng)定系統(tǒng) . 4 表 1驗(yàn)日糧中基礎(chǔ)日糧與待測(cè)飼料比例對(duì)待測(cè)飼料代謝能值（ MJ/影響 . 7 表 1 測(cè)家禽飼料的代謝能值 . 9 表 2京鴨典型日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平 . 16 表 2后荷術(shù)鴨的健康狀況（只） . 21 表 2管安裝部位 . 22 表 3驗(yàn) 日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分 . 26 表 3京鴨小腸液消化酶活性的日內(nèi)變異 . 28 表 3京鴨小腸液中消化酶活性的晝夜差異 . 29 表 3糧能量蛋白比對(duì)北京鴨小腸液消化酶活性的影響 . 29 表 3同條件下食糜的采集方案 . 32 表 3般生產(chǎn)條件下北京鴨小腸液消化酶活性的變異范圍 . 33 表 4型日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平 . 35 表 4粉劑消化酶活性及人工小腸液的配制 . 37 表 4 L 酸鹽緩沖液的配制 . 37 表 4蛋白酶水解時(shí)間、溫度對(duì)典型日糧水解率的影響 . 39 表 4間、 人工小腸液酶水解率的影響 . 40 表 4禽消化道中主要 消化酶的組成及來源 . 42 表 4體法估測(cè)飼料生物學(xué)效價(jià)中所使用的胃蛋白酶溶液濃度 . 43 表 4腸消化期酶的來源、緩沖液體系、 解溫度及時(shí)間 . 45 表 5標(biāo)模擬玉米概略養(yǎng)分（ 礎(chǔ)）的分布概率 . 49 表 5米及玉米副產(chǎn)品的概略養(yǎng)分 (礎(chǔ) ) . 50 表 5E 測(cè)定方案 . 50 表 5標(biāo)模擬玉米組成及概略養(yǎng)分 . 51 表 5米 排空強(qiáng)飼法 酶水解物總能值 的線性失擬分析 . 54 表 5標(biāo)模擬玉米排 空強(qiáng)飼法 酶水解物總能值的多項(xiàng)式回歸 . 55 表 5 差為參考優(yōu)化的回歸模型 . 56 表 5粗纖維為參考優(yōu)化的回歸模型 . 57 表 5米排空強(qiáng)飼法 與酶法 測(cè)值比較 . 58 表 5法水解率測(cè)值與生物學(xué)法消化率實(shí)測(cè)值之差 . 59 表 5離體法估測(cè)飼料生物學(xué)效價(jià)的數(shù)學(xué)模型 . 60 表 5排空強(qiáng)飼法代謝能值的精度 . 62 表 6證玉米產(chǎn)地、品種及營(yíng)養(yǎng)成分 . 66 表 6法估測(cè)的代謝能 值與鴨排空強(qiáng)飼法代謝能值的比較 . 67 表 6證玉米排空強(qiáng)飼法代謝能值的精度 . 68 表 6法中五種消化酶的專一性 . 69 V 圖 目 錄 圖 1前家禽飼料有效能評(píng)定體系沿革 . 3 圖 1麥攝入量對(duì)其表觀代謝能值的影響 . 5 圖 1禽飼料代謝能的測(cè)定方法 . 6 圖 1酶法估測(cè)家禽飼料有效能值的原理 . 12 圖 2管尺寸 . 16 圖 2術(shù)部在消化道中的位置 . 17 圖 2部除