【畢業(yè)學(xué)位論文】利用酵母雙雜交系統(tǒng)從番茄中篩選稻瘟菌激活蛋白的互作蛋白碩士論文

密級(jí)： 論文編號(hào)： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 學(xué)位論文 利用酵母雙雜交系統(tǒng)從番茄中篩選稻瘟菌激活蛋白的互作蛋白 士研究生：尚 威 指 導(dǎo) 教 師：邱德文 研究員 申請(qǐng)學(xué)位類別：理學(xué)碩士 專 業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué) 研 究 方 向：微生物分子生物學(xué)與基因工程 培 養(yǎng) 單 位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院 植物保護(hù)研究所 提交日期 2007 年 6 月 s. 007 獨(dú) 創(chuàng) 性 聲 明 本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下 進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。 研究生簽名： 時(shí)間： 年 月 日 關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明 本人完全了解中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。 (保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議 ) 論文作者簽名： 時(shí)間： 年 月 日 導(dǎo)師簽名： 時(shí)間： 年 月 日 論文評(píng)閱人、答辯委員名單 論文題目 利用酵母雙雜交系統(tǒng)從番茄中篩選稻瘟菌激活蛋白的互作蛋白微生物分子生物 生物化學(xué)與論文作者 尚威 專 業(yè) 研究方向?qū)W與基因工程 指導(dǎo)教師 邱德文研究員 培養(yǎng)單位（研究所） 植物保護(hù)研究所 碩 （博）姓名 職稱 單 位 專 業(yè) 簽 名 馮潔 研究員 碩導(dǎo)博導(dǎo)中國(guó)農(nóng)科院植保所 植物病理學(xué) 評(píng) 閱 碩導(dǎo)向華 研究員 中科院微生物所 分子微生物學(xué) 人 博導(dǎo)答辯 碩導(dǎo)李懷方 教授 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物病理學(xué) 主席 博導(dǎo)生物化學(xué)與 碩導(dǎo)李贊東 教授 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 分子生物學(xué) 博導(dǎo)碩導(dǎo)簡(jiǎn)恒 教授 植物病理學(xué) 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 博導(dǎo)答 張春義 研究員 碩導(dǎo)博導(dǎo)中國(guó)農(nóng)科院生物所 分子生物學(xué) 辯 曾凡榮 研究員 碩導(dǎo)博導(dǎo)中國(guó)農(nóng)科院植保所 生物化學(xué)與 分子生物學(xué) 委 碩導(dǎo)博導(dǎo)員 碩導(dǎo)博導(dǎo)會(huì)議記錄（秘書） 楊秀芬 論文答辯時(shí)間地點(diǎn) 中國(guó)農(nóng)科院中日中心 116 房間 I 摘 要 激活蛋白是從多種真菌中分離、純化出的一類原發(fā)、外源性的蛋白激發(fā)子。不同來源的激活蛋白在理化性質(zhì)上略有差異，但生物學(xué)功能相近，具有較強(qiáng)的誘導(dǎo)抗病防蟲、促進(jìn)植物生長(zhǎng)等生物活性。然而目前對(duì)它們的信號(hào)傳導(dǎo)途徑等方面的作用機(jī)理研究還比較薄弱。稻瘟菌激活蛋白作為從稻瘟菌（中分離的一種激活蛋白，揭示其分子作用機(jī)理和植物體內(nèi)的受體蛋白具有十分重要的意義。 本論文借助酵母雙雜交技術(shù)，首先將稻瘟菌激活蛋白（基因 后篩選克隆在庫(kù)，以期獲得稻瘟菌激活蛋白的互作蛋白，最終實(shí)驗(yàn)得到了十二組陽性克隆。 序列分析表明稻瘟菌激活蛋白可能影響了番茄的蛋白質(zhì)合成和修飾過程，并可能與一種植物肽類生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)相互作用，促進(jìn)植物細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化。在抗病機(jī)理方面發(fā)現(xiàn)：與稻瘟菌激活蛋白作用的4- 香豆酸 在苯丙烷類生物合成途徑中是關(guān)鍵酶，這就暗示激活蛋白可能影響了苯丙烷類生物合成途徑，同時(shí)影響黃酮類植保素、木質(zhì)素、水楊酸等與抗病有關(guān)的植物次生代謝物的生物合成，起到激發(fā)抗病防蟲功能的作用。 關(guān)鍵詞： 稻瘟菌激活蛋白，酵母雙雜交，蛋白互作 I a of is a of to of as in is It is a to of in In of D of by be in of a to In we 4 is a in an on It of to as to I 目 錄 第一章 引言 .獻(xiàn)綜述酵母雙雜交系統(tǒng) . 1 酵母雙雜交系統(tǒng)的原理 . 1 酵母雙雜交系統(tǒng)的類型 . 3 酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)和局限性 . 3 酵母雙雜交系統(tǒng)的應(yīng)用 . 3 雙雜交的其他形式 . 5 酵母雙雜交系統(tǒng)的未來展望 . 7 究背景 . 8 蛋白激發(fā)子 . 8 過敏蛋白（ . 9 隱地蛋白（ . 10 激活蛋白（ . 10 究目的和意義 . 11 第二章 酵母雙雜交系統(tǒng)載體構(gòu)建和自激活作用檢測(cè) .驗(yàn)材料 . 13 株和質(zhì)粒 . 13 要試劑 . 14 規(guī)儀器 . 14 驗(yàn)方法 . 14 因 . 14 化物 . 15 切物 . 16 收酶切產(chǎn)物 . 16 備誘餌質(zhì)粒載體. 17 餌載體的酶切和回收 . 18 建重組誘餌載體. 18 母感受態(tài)細(xì)胞的制備 . 19 組誘餌載體的酵母轉(zhuǎn)化及自激活作用檢測(cè) . 19 果與分析 . 20 因的擴(kuò)增 . 20 組誘餌載體酶切鑒定 . 20 序結(jié)果比對(duì) . 21 激活檢測(cè) . 22 結(jié)與討論 . 23 成功構(gòu)建重組誘餌融合質(zhì)粒. 23 無自激活作用 . 23 第三章 利用酵母雙雜交篩選稻瘟菌激活蛋白的互作蛋白 . 驗(yàn)材料 . 24 株和文庫(kù) . 24 要試劑 . 24 規(guī)儀器 . 24 驗(yàn)方法 . 24 劑配制 . 24 母感受態(tài)細(xì)胞制備 . 27 庫(kù)質(zhì)粒的酵母轉(zhuǎn)化 . 27 平板 . 27 選文庫(kù)假定陽性共轉(zhuǎn)化子 . 28 母質(zhì)粒的提取 . 28 D/文庫(kù)質(zhì)粒插入片段 . 29 酶切物進(jìn)行分組 . 30 腸桿菌電轉(zhuǎn)化 . 30 腸桿菌性質(zhì)粒提取 . 32 定陽性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化與提取 . 32 D/文庫(kù)質(zhì)粒自激活的檢測(cè) . 32 性質(zhì)粒的酵母雙雜交再次轉(zhuǎn)化驗(yàn)證 . 32 性克隆的測(cè)序比對(duì)分析 . 32 果與分析 . 33 化效率 . 33 庫(kù)共轉(zhuǎn)化子的篩選 . 33 定陽性克隆的分組 . 34 性克隆的測(cè)序比對(duì)分析 . 34 結(jié)與討論 . 36 化效率 . 36 陽性的排除 . 37 對(duì)結(jié)果討論 . 37 用機(jī)理探討 . 38 第四章 結(jié)論 .考文獻(xiàn) .謝 .者簡(jiǎn)歷 .V 英文縮略表 英文縮寫 英文全稱 中文名稱 基酸 活結(jié)構(gòu)域 甲基甲酰胺 甲基亞砜 NA 合結(jié)構(gòu)域 磷酸脫氧核苷酸 省成分添加劑 乳糖 氨酸 氨酸 合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 子糖 導(dǎo)培養(yǎng)基，半乳糖和棉子糖作碳源 SD SD D 培養(yǎng)基：合成缺陷培養(yǎng)基，葡萄糖作碳源 SD 氨酸 游激活序列 嘧啶 哚- 半乳糖苷V 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言 第一章 引言 獻(xiàn)綜述 酵母雙雜交系統(tǒng) 蛋白質(zhì)相互作用幾乎是所有生物學(xué)過程都必需的重要的生理過程，從遺傳物質(zhì)的復(fù)制、基因的表達(dá)調(diào)控到細(xì)胞的代謝過程、細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，以及細(xì)胞與細(xì)胞之間的短程、遠(yuǎn)程通訊，生物體的形態(tài)形成、病原微生物的致病、宿主對(duì)病原微生物的免疫等，蛋白質(zhì)相互作用都在其中扮演著重要的角色。蛋白質(zhì)相互作用已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。 近十年來，多個(gè)諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)項(xiàng)目都與蛋白質(zhì)相互作用研究有關(guān)。一般認(rèn)為諾貝爾獎(jiǎng)對(duì)社會(huì)產(chǎn)生社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益約需要40年左右時(shí)間，但蛋白質(zhì)及其相互作用研究在實(shí)際應(yīng)用方面已經(jīng)顯示出了良好的前景。了解蛋白質(zhì)相互作用的方式、作用強(qiáng)度、作用結(jié)果，進(jìn)行蛋白質(zhì)功能分析、生命發(fā)育探索，不僅具有重要的理論意義，還可以為探明致病微生物的致病機(jī)理，開發(fā)新藥，提高人民的生活質(zhì)量提供指導(dǎo)（唐澤耀等，2005 ）。 隨著實(shí)驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，目前研究蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)方法主要有酵母雙雜交系統(tǒng)（ 1989）、噬菌體展示技術(shù)（1985 ）、 et 2000 ；et 2002）、免疫共沉淀（ et 1995）、串聯(lián)親和純化技術(shù)（ et 1999；2001）、表面等離子共振技術(shù)（ et 1992）、熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)（ ， 1948）、蛋白質(zhì)芯片（ et 2001）、射線晶體衍射、核磁共振等多種，這些技術(shù)為蛋白質(zhì)相互作用研究做出了重大貢獻(xiàn)，也積累了寶貴的資料。 酵母雙雜交系統(tǒng)自建立以來就成為分析蛋白質(zhì)相互作用的強(qiáng)有力的方法之一，經(jīng)過不斷完善，如今不僅可以用來檢驗(yàn)體內(nèi)蛋白質(zhì)間的相互作用，還可以用來發(fā)現(xiàn)新的作用蛋白質(zhì)，在對(duì)蛋白質(zhì)組中特定的代謝途徑中蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)的認(rèn)識(shí)上發(fā)揮了重要的作用。據(jù) 2001年估計(jì)，當(dāng)時(shí)已經(jīng)發(fā)表的研究蛋白質(zhì)相互作用的文獻(xiàn)中超過一半的發(fā)現(xiàn)來源于酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)（ et 2001）。 酵母雙雜交系統(tǒng)的原理 酵母雙雜交系統(tǒng)的建立得力于對(duì)真核生物調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過程的認(rèn)識(shí)。細(xì)胞起始基因轉(zhuǎn)錄需要有反式轉(zhuǎn)錄激活因子的參與。80年代中后期的工作表明，轉(zhuǎn)錄激活因子在結(jié)構(gòu)上是組件式的(即這些因子往往由兩個(gè)或兩個(gè)以上相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其中有合結(jié)構(gòu)域(稱為和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(簡(jiǎn)稱為，它們是轉(zhuǎn)錄激活因子發(fā)揮功能所必需的（ 1984； et 1985； et 1986），單獨(dú)的然能和啟動(dòng)子結(jié)合，但是不能激活轉(zhuǎn)錄，而單獨(dú)的有它們?cè)诳臻g上彼此聯(lián)系時(shí)才能發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活作用。同樣，不同來源的轉(zhuǎn)錄激活因子的能具有正常的激活轉(zhuǎn)錄的功能（ 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言 1985）。酵母雙雜交正是基于以上原理，將空間上可以分離，功能上相對(duì)獨(dú)立的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域分別融入外源蛋白，與合的蛋白“X ”一般稱為“誘餌蛋白”(，與 ”一般稱為“獵物蛋白”或“靶蛋白”(or 。如果分別融合于餌蛋白”和“獵物蛋白”之間存在相互作用，那么而激活相應(yīng)報(bào)告基因(的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。相反，通過對(duì)報(bào)道基因表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)，就可以判別“誘餌”和“獵物”兩個(gè)蛋白質(zhì)之間是否存在相互作用（圖1高寧& 胡寶成，2006 ）。 圖1母雙雜交原理 of ： 白形成融合蛋白， 合，但在缺少激活結(jié)構(gòu)域時(shí)，不能激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄； B：同樣，激活結(jié)構(gòu)域與Y 蛋白形成融合蛋白，但在缺少合結(jié)構(gòu)域時(shí)也不能激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄； C：X 蛋白和Y 蛋白之間的相互作用導(dǎo)致合結(jié)構(gòu)域與激活結(jié)構(gòu)域的重組而形成有功能的轉(zhuǎn)錄因子，激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。 2 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言 酵母雙雜交系統(tǒng)的類型 目前，酵母雙雜交主要有兩套系統(tǒng)，主要區(qū)別在于轉(zhuǎn)錄因子組成和使用的報(bào)告基因不同。 989 ），是利用酵母的錄因子的和激活結(jié)構(gòu)域（以及使用為報(bào)告基因。因的表達(dá)產(chǎn)物可以通過在缺少組氨酸的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)來選擇相互作用的細(xì)胞。而統(tǒng)“ 作用陷阱”是由其同事們（ et 1993）建立的，是利用細(xì)菌的皰疹病毒大腸桿菌D 來作為轉(zhuǎn)錄因子的組分，這種非酵母轉(zhuǎn)錄因子組分的應(yīng)用降低了其他方式產(chǎn)生的假陽性數(shù)量。同時(shí)用為報(bào)告基因，并且用誘導(dǎo)型啟動(dòng)子使獵物有在相互作用時(shí)表達(dá)，因此降低了有毒獵物蛋白對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制。 酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)和局限性 酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)：酵母是真核細(xì)胞，表達(dá)的蛋白可保持天然狀態(tài)下在細(xì)胞中產(chǎn)生相互作用，一定程度上代表了細(xì)胞內(nèi)的真實(shí)情況；易于轉(zhuǎn)化、便于回收擴(kuò)增質(zhì)粒，而酵母菌能同時(shí)容納兩種質(zhì)粒；具有可直接進(jìn)行選擇的標(biāo)記基因和特征性報(bào)道基因；酵母的內(nèi)源性蛋白不易同來源于哺乳動(dòng)物的蛋白結(jié)合，避免了對(duì)文庫(kù)編碼蛋白的干擾；具有高度敏感性，可檢測(cè)存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或瞬時(shí)性的相互作用；可采用不同組織、器官、細(xì)胞類型和分化時(shí)期材料來構(gòu)建分析細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核及膜蛋白等多種不同亞細(xì)胞部位及功能的蛋白；酵母菌有很多營(yíng)養(yǎng)缺陷型標(biāo)記，篩選方便。 酵母雙雜交系統(tǒng)的局限性：有些誘餌蛋白質(zhì)本身具有激活轉(zhuǎn)錄功能或在酵母中表達(dá)時(shí)發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活的作用，使在無特異激活結(jié)構(gòu)域情況下激活轉(zhuǎn)錄；有些雜交蛋白質(zhì)不能穩(wěn)定地在酵母中表達(dá)或定位于酵母細(xì)胞核內(nèi)，比如有些蛋白質(zhì)相互作用通常要在細(xì)胞表面發(fā)生；有些合蛋白或者破壞了蛋白質(zhì)的正確折疊，從而影響了蛋白間作用的能力；有些蛋白質(zhì)的正確折疊、修飾和功能有賴于其它非酵母蛋白的輔助，這限制了某些胞外蛋白（如哺乳動(dòng)物）和細(xì)胞膜受體蛋白等的研究；反之，在酵母中相互作用的哺乳動(dòng)物蛋白并不一定反映其天然環(huán)境下的相互作用；有些蛋白質(zhì)本身對(duì)酵母細(xì)胞具有毒性作用。 酵母雙雜交系統(tǒng)的應(yīng)用 酵母雙雜交技術(shù)創(chuàng)立至今的十幾年中，在基因和蛋白質(zhì)研究中已得到廣泛應(yīng)用，并取得了許多有價(jià)值的結(jié)果。除了在酵母中應(yīng)用外，此項(xiàng)技術(shù)已擴(kuò)展到哺乳動(dòng)物和植物細(xì)胞的研究中（et 1992）。用酵母雙雜交技術(shù)鑒定的多種受體、轉(zhuǎn)錄因子、蛋白激酶、磷酸化酶、腫瘤發(fā)生蛋白、細(xì)胞骨架蛋白以及參與細(xì)胞周期調(diào)控的因子不勝枚舉（張樹民& 陳英碚，1999 ）。 3 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言 檢驗(yàn)已知蛋白質(zhì)之間的相互作用 檢驗(yàn)已知蛋白間的相互作用，就是將已知的兩個(gè)蛋白基因分別克隆到求開放閱讀框正確，然后分別進(jìn)行自激活檢測(cè)，最后共轉(zhuǎn)入酵母菌株中進(jìn)行相互作用的檢驗(yàn)。例如，在篩選大豆庫(kù)時(shí)，得到了與體相結(jié)合的兩個(gè)具有97 % 同一性的蛋白們具有參與植物光呼吸作用的一個(gè)重要的酶依賴 羥基丙酮酸還原酶) 特性，但是為了檢驗(yàn)是否兩個(gè)或其中之一結(jié)合于受體于是將因克隆到體（上，與克隆在體(上的 因共表達(dá)，最終證明受體與 蛋白結(jié)合（et ，2002 ）。 研究蛋白質(zhì)之間發(fā)生相互作用所必需的結(jié)構(gòu)域 可應(yīng)用于確定兩已知有生理作用的蛋白間的作用位點(diǎn)或結(jié)構(gòu)域。利用此系統(tǒng)已分析和測(cè)定了多種重要的結(jié)構(gòu)域（ et 1997；et ，1999），當(dāng)證實(shí)了兩個(gè)蛋白有相互作用后，可以對(duì)其進(jìn)行缺失實(shí)驗(yàn)而找到相互作用發(fā)生所必須的氨基酸殘基。通過該方法還能研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能。通常需要對(duì)待測(cè)蛋白做點(diǎn)突變或缺失突變的處理。 發(fā)現(xiàn)新的作用蛋白質(zhì)，以研究蛋白質(zhì)之間相互作用的信號(hào)傳遞途徑 用已知功能的蛋白基因篩選雙雜交研究蛋白質(zhì)之間相互作用的傳遞途徑，尋找與靶蛋白相互作用的新蛋白，是雙雜交系統(tǒng)目前應(yīng)用最廣泛和最有價(jià)值的應(yīng)用之一。戴良英等用酵母雙雜交系統(tǒng)研究了從擬南芥的茉莉素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)鏈中分離得到的第一個(gè)基因 良英等， 2002）。 花青素生物合成途徑調(diào)節(jié)機(jī)制，并證實(shí)特異 子 與另一個(gè) 子及含與光誘導(dǎo)子 則不發(fā)生作用。他們認(rèn)為 花青素生物合成基因有調(diào)節(jié)作用（et 2003）。嚴(yán)景華等應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)，以誘餌蛋白，從卵巢文庫(kù)中篩選到了與IM 。并通過其他生物化學(xué)方法證明不與構(gòu)域結(jié)合?；プ饔玫陌l(fā)現(xiàn)為研究及腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)（嚴(yán)景華等，2003）。齊兵等從人肺細(xì)胞系(互作用蛋白基因結(jié)果發(fā)現(xiàn)與因一樣， 生長(zhǎng)，誘發(fā)細(xì)胞凋亡，但效率比（齊兵等，2000 ）。 分析新基因的生物學(xué)功能 即以功能未知的新基因克隆在體上，酵母雙雜交篩選克隆在據(jù)篩選到的已知基因的功能推測(cè)該新基因的功能。已從基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中發(fā)現(xiàn)了一族參與籠形蛋白包被小泡運(yùn)輸?shù)闹参?南芥含 蛋白）。通過亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分級(jí)和免疫定位研究證實(shí)，現(xiàn)在內(nèi)膜系統(tǒng)，集中在籠形蛋白上。體外進(jìn)行脂類結(jié)合鑒定法證明， 一結(jié)合在內(nèi)陷的小窩或內(nèi)吞小泡中累積的脂類家族。另外，免疫組織化學(xué)研究和肌動(dòng)蛋白結(jié)合鑒定法分析表明： 調(diào)控沿肌動(dòng)蛋白細(xì)4 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言 胞骨架的膜泡運(yùn)輸。酵母互補(bǔ)研究表明與了胞吞作用和肌動(dòng)蛋白排列。通過酵母雙雜交篩選、免疫定位和體外結(jié)合鑒定法試驗(yàn)證明，在輔助蛋白類蛋白間有一種新的相互作用。這種相互作用是通過域和輔助蛋白的富集脯氨酸區(qū)域介導(dǎo)的。輔助蛋白類蛋白通過激籠形蛋白包被的囊泡脫殼，這一反應(yīng)明顯受生所抑制。因此，籠形蛋白包被囊泡分裂和脫殼過渡過程中起調(diào)節(jié)或支架作用（et ， 2001）。 尋找具有藥物治療作用的小分子多肽 通過雙雜交系統(tǒng)篩選和目標(biāo)蛋白相互作用的多肽，如靶蛋白是藥物設(shè)計(jì)的目標(biāo)，則有可能得到一些具有藥物治療作用的小分子多肽藥物。胡承香等通過將隨機(jī)段與而成功構(gòu)建了一個(gè)可篩選、擴(kuò)增的酵母雙雜交隨機(jī)肽庫(kù)，可用于篩選和設(shè)計(jì)靶蛋白相互作用多肽，主要用于藥