【畢業(yè)學位論文】肉仔雞氧化應(yīng)激模型的研究博士論文

密級： 論文編號： 中國農(nóng)業(yè)科學院 博士學位論文 肉仔雞氧化應(yīng)激模型的研究 士 研 究 生：武書庚 指 導 教 師：齊廣海 研究員 申請學位類別：農(nóng)學博士 專 業(yè)：動物營養(yǎng)與飼料科學 研 究 方 向：家禽應(yīng)激與營養(yǎng) 培 養(yǎng) 單 位：研究生院 飼料研究所 提交日期 2007 年 6 月 F i 2007 獨 創(chuàng) 性 聲 明 本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下 進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其它人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果， 也不包含為獲得中國農(nóng)業(yè)科學院或其它教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。 與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。 研究生簽名： 時間： 年 月 日 關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明 本人完全了解中國農(nóng)業(yè)科學院有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即：中國農(nóng)業(yè)科學院有權(quán)保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意中國農(nóng)業(yè)科學院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容。 (保密的學位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議 ) 論文作者簽名： 時間： 年 月 日 導師簽名： 時間： 年 月 日 中國農(nóng)業(yè)科學院博士學位論文 摘要 要 本文首先研究了激素處理（注射或口服）對肉仔雞生產(chǎn)性能、消化能力、免疫功能和肉質(zhì)的影響，建立了急性和慢性動物營養(yǎng)應(yīng)激模型；研究了 肌衛(wèi)星細胞的影響，建立了細胞氧化應(yīng)激模型；進一步研究了激素對衛(wèi)星細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。研究表明，三種激素處理的應(yīng)激模型均能引起肉仔雞肉質(zhì)、激素、細胞活性等的變化，產(chǎn)生氧化應(yīng)激，激素可通過細胞內(nèi)鈣離子途徑的轉(zhuǎn)導引起肌肉細胞的代謝變化，從而影響肉質(zhì)。本研究可為研究應(yīng)激對肉仔雞的影響及其機理提供方法學借鑒。現(xiàn)摘要如下： 1、急性氧化應(yīng)激動物試驗模型的研究 選擇 21d 體重相近的健康肉仔雞公雛 210 只，隨機分成 7 組，每組 3 個重復，每重復 10 只。處理分別為 C(對照組 )、 S（生理鹽水注射 1 ） 、 S+R(S+ D(6 mg/W)、 D+R（ D+、 A(6 IU/W)、 A+R（ A+， 量為 50 mg/W； 40d 時重復上述過程。結(jié)果表明： （ 1）注射 顯著影響了肉品品質(zhì)（ 降低、滴水損失和肉品剪切強度增加） ，同時注射 肉品質(zhì)的不正常狀況得到了緩解，但均未恢復到未注射狀態(tài)；腿肌的 、滴水損失、剪切強度均顯著高于胸?。?； 升到了最高，顯著高于對照組（ 。同時相應(yīng)注射 ，血液 高，血液 低，與相應(yīng)的不注射組均差異顯著（ 。注射 引起動物血液有關(guān)生化指標的激烈變化， 引起氧化應(yīng)激。 這些結(jié)果表明， 40d 肉仔雞， 6 mg/W） 或 6 IU/國農(nóng)業(yè)科學院博士學位論文 摘要 射處理后 8h 后，可用于開展有關(guān)氧化應(yīng)激的試驗研究。 2、慢性氧化應(yīng)激動物試驗模型的研究 選擇 320 只 21d 仔雞隨機分為 4 個處理組， 每組設(shè) 8 個重復， 每個重復 10 只試雞。 、和組分別飲用加有 0、 10、 20 和 30 /L 的可的松水，自由飲水和采食，試驗期 10d。結(jié)果表明： （ 1）可的松飲水對肉雞 F/G 均無顯著影響（ P ；血液生化分析表明，可的松飲水對血液 酐含量無顯著影響（ P ，但 20 和 30可的松飲水 10d 肉雞血漿 量（ of of EX 8h 2h 4h ( ST 0d DA 9d , P ( of d、 6d ( ；30%。一般認為雞在 30范圍內(nèi)，其體溫調(diào)節(jié)機能健全，能夠保持穩(wěn)定的體溫。環(huán)境溫度高于 30時，機體體溫調(diào)節(jié)功能失控，常出現(xiàn)喘氣、飲水量增加，食量大減，生產(chǎn)性能（如生長速度、產(chǎn)肉力、產(chǎn)蛋量、蛋品質(zhì)、種蛋受精率等）明顯下降等不良現(xiàn)象，發(fā)生熱應(yīng)激。環(huán)境溫度高于 40時，生產(chǎn)能力完全喪失，死亡率極高。具體在何種溫、濕度條件下、多長時間才能稱為應(yīng)激，即應(yīng)激程度如何評價，需要進一步研究。 表 1不同動物可能產(chǎn)生應(yīng)激的溫濕度及其與正常環(huán)境的比較 常環(huán)境 激環(huán)境 差 物 ， % T， % 文獻來源 雄性 仔雞 21 24 505 4005 1619 李靜等， 2004 仔雞 22） 50 0 軍喬， 2004 肉雜雞 34 85 90 黃志毅等， 2004 肉仔雞 22 40 50 0 90 劉思當?shù)龋?2003 仔雞 33 吳東等， 2003 肉仔雞 36 吳孝兵， 2003 雞 32 李有業(yè)， 2003 肉仔雞 19 25 65 75 29 35(75 85 10 效梅等， 2003 肉仔雞 35（ 2h） ， 2003 “882”肉仔雞 2 忠等， 2002 艾維茵肉仔雞 332h) 高樹新等， 2002 艾維茵肉仔雞 332（ 6h） 胡蘭等， 2001 肉仔雞 32（ 2h） 75 2001 仔雞 20 25 65 70 32 35 80 82 文杰等， 2000 仔雞 28 33 80 90 李紹鈺等， 2000 公雞 20 23 33 傅偉龍等， 2000 雞 27 35 83 90 劉鈾等， 1999 肉仔雞 4 35 夏東等， 1999 仔雞 35 37(48h) 應(yīng)如海等， 1999 仔雞 24 25 32 74 G， 1985 對濕度； T： 度； 雜雞。 中國農(nóng)業(yè)科學院博士學位論文 第一章 文獻綜述 3 冷應(yīng)激 寒冷應(yīng)激通常是指雞對突然下降環(huán)境溫度（ 10）刺激或是長期處于低溫環(huán)境（ P 2 分； ?？傊⑸?及生理鹽水均影響了肉品 時注射 ，這種增加均得到了改善，提示我們宰前應(yīng)激時，血液 加，導致宰后肉品 變化，通過肌注激素的方法可以作為研究應(yīng)激對肉品 另外， 290d（ =。動物的年齡越小，其肌肉水分含量越高，肉細胞壁越容易破裂而失去其中的水分。 29d 處理后 4、 8、 12 和 24h 后屠宰，肉的 無顯著差異（表 2，但注射后 12h 屠宰的肉 高， 24h 屠宰的 所降低，各處理之間 變異較大，是造成屠宰時間間 異不顯著的原因； 40d 處理的肉 處理后 24h 最高，顯著高于 4h 屠宰（ 。以本研究處理的劑量，激素處理后 12 24h 可能是激素發(fā)揮作用的區(qū)間。但是本研究未作激素處理 24h 以后有關(guān)肉質(zhì)指標，需要進一步研究激素處理后的具體發(fā)揮作用的時間區(qū)間，以便更好的模擬應(yīng)激。 可見，激素注射處理對肉品 一定影響。注射 影響了肉品 時注射 ，這種增加均得到了改善，但未恢復到未注射的狀態(tài)；注射 的 大， 29d 屠宰時，兩處理組均極顯著高于其它處理組（ ， 40d 處理組激素處理后 12h 肉品 著增加，尤以 ；其中注射 剪切強度最高， 射處理組依次降低， 3 處理間差異不顯著（ P； 3 個注射 理組的肉品剪切強度均未見顯著差異（ P，但高于對照組。 3種注射劑均可影響肉品的剪切強度，注射 均得到了改善。因為 爭性地與細胞膜內(nèi) 結(jié)合，阻止了 結(jié)合，阻止了 起的肌肉細胞中的葡萄糖代謝成乳酸，從而保持了肌肉細胞的正常 ，維持了肌肉的正常代謝，因此會改善肉品的剪切強度?，F(xiàn)有的處理均影響了宰后肉品的剪切強度，對剪切強度升高的次序依次為： 外， 29M 和 切強度分別為 P=； 40d 屠宰 M 的剪切強度分別為 P=； 剪切強度： M（ ；同時相應(yīng)注射 ，蛋白含量比相對應(yīng)的不注射組均顯著降低 (，同時注射 得蛋白降低； 3個注射 處理均高于對照組，但 4 者差異不顯著（ P。另外， 29d 屠宰測定的胸肌勻漿蛋白含量極顯著高于 40d 屠宰（ P= 29d 肉雞胸肌未成熟，提示我們 29d 肉仔雞胸肉在應(yīng)激時容易被動物動用，受到損傷。 激素注射處理后隨 用時間的延長，胸肌蛋白含量先升高，后逐漸降低， 4h、 8h、 12h 和 24h 分別為： =激素處理后 4h 腿肌蛋白含量與對照組無差異， 8h 則極顯著高于其它時間（ ；同時相應(yīng)注射 ，蛋白含量比相對應(yīng)的不注射組均顯著降低 （ ，同時注射 得蛋白降低； 3 個注射 4 者差異不顯著（ P。另外， 29d 測定的腿肌蛋白含量極顯著高于40d（ P=提示我們 29d 肉仔雞腿肉在應(yīng)激時易被動用。 激素注射處理后隨 用時間的延長，腿肌蛋白含量先升高，后逐漸降低， 4h、 8h、 12h 和 24h 分別為： P=激素處理后 4h 腿肌蛋白含量與對照組無差異， 8h 則極顯著高于其它時間（ ，提示我們激素處理后 8h 腿肌肌肉的受損（降解）最為明顯。 表 2理對肉仔雞在腿肌 10%勻漿蛋白含量（g/l）的影響 EX on in of 宰日齡， 射處理后的時間 , 理 9d, n=56 40d, n=42 4h/2818h/14112h/28124h/281C 230222577484 706136663110 307743920854 67731#,C; a,b,c,d, C, S, R, R+S, R+R+同表 2as 1：注射處理到屠宰的時間 /觀察值個數(shù)； to of 2：平均值和 P 值； 中國農(nóng)業(yè)科學院博士學位論文 第二章 急性氧化應(yīng)激動物試驗模型的研究 26 素注射對心肌勻漿中蛋白含量的影響 注射 ，與其它所有處理組相比，心肌蛋白含量顯著升高（ ；同時相應(yīng)注射 ，蛋白含量比相對應(yīng)的不注射組均顯著降低 （ ，同時注射 得蛋白降低； 3 個注射 4 者差異不顯著（ P。另外， 29d 心肌蛋白含量稍高于 40d（ P=。 激素注射后隨 用時間的延長，心肌蛋白含量先升高，后逐漸降低，4h、 8h、 12h 和 24h 分別為： P=。激素處理后 4h 腿肌蛋白含量與對照組無差異， 8h 則極顯著高于 12 和 24h（ ，提示我們激素處理后 8h 心肌受損（降解）最為明顯。 表 2理對肉仔雞在心肌 10%勻漿蛋白含量（g/L）的影響 EX on in 宰日齡， 射處理后的時間 , 理 9d, n=56 40d, n=42 4h/2818h/14112h/28124h/281C 938964879737 322649768434 543810858603 405765,C; a,b,c,d, C, S, R, R+S, R+R+同表 2as 1, 2: 含義同表 2as 表 2理對肉仔雞在肝臟 10%勻漿蛋白含量（g/L）的影響 EX on in 宰日齡， 射處理后的時間 , 理 9d, n=56 40d, n=42 4h/2818h/14112h/28124h/281C 304176031913 130305922495 191491183935 071764,B,C; a,b,c,d, C, S, R, R+S, R+R+同表 2as 1, 2: 含義同表 2as 中國農(nóng)業(yè)科學院博士學位論文 第二章 急性氧化應(yīng)激動物試驗模型的研究 27 素注射對肝臟勻漿中蛋白含量的影響 注射 理鹽水和 ，肝臟勻漿蛋白含量顯著升高（ 。另外， 29d 與 40d 屠宰的肉雞的肝臟勻漿中蛋白含量變異較?。?=，提示我們肝臟與胸肌和腿肌不同，兩個屠宰日齡均對肝臟中蛋白含量影響不明顯，肝臟不是應(yīng)激動用能量的主要來源。 注射處理后激素的作用時間的延長（ 4h、 8h、 12h 和 24h） ，肝臟勻漿中蛋白含量先增加，而后逐漸降低，數(shù)值分別為： = 8h 最高， 顯著高于 12 和 24h(；同時相應(yīng)注射 ， 量比相對應(yīng)的不注射組均顯著升高；但與對照組差異不顯著（ P。另外， 29d 的 著高于 40d（ P=。 隨注射處理后激素作用時間的延長（ 4h、 12h 和 24h） ，心肌 量先降低再增加，數(shù)值分別為： P=，因未測定 8h 的心肌 24h 最高，基本恢復到對照組的水平，顯著高于 4 和 12h（ ；同時相應(yīng)注射 ， 量比相對應(yīng)的不注射組均顯著升高（ 。另外， 29 第二章 急性氧化應(yīng)激動物試驗模型的研究 28 肉雞的心肌 量高于 40d（ P=。 隨注射處理后激素作用時間的延長（ 4h、 12h 和 24h） ，肝臟 量逐漸降低，數(shù)值分別為： P=， 4h 的肝臟 量顯著高于 12h 和 24h（ ；同時相應(yīng)注射 量比相對應(yīng)的不注射組均顯著升高（ 。另外，29d 肉雞的胸肌 量顯著高于 40d（ P=。 隨注射處理后激素作用時間的延長（ 4h、 12h 和 24h） ，胸肌 量逐漸降低，數(shù)值分別為： P=， 4h 的胸肌 量顯著高于12h 和 24h（ ；同時相應(yīng)注射 ， 量比相對應(yīng)的不注射組均顯著升高（ ；同時相應(yīng)注射 ， 量比相對應(yīng)的不注射組均顯著升高（ 。另外， 29d 屠宰的肉雞的心肌 量顯著高于與 40d（ P=。 隨注射處理后激素作用時間的延長（ 4h、 12h 和 24h）心肌 量先降低，后升高， 24著高于其它時間段（ ；同時相應(yīng)注射 ， 量比相對應(yīng)的不注射組均顯著升高（ 。 另外， 29d 肉雞肝臟 量大于 40d（ P=。 隨注射處理后激素作用時間的延長（ 4h、 12h 和 24h）心肌 量先降低，后升高， 244h 最高，顯著高于其它時間段（ ；同時相應(yīng)注射 ， 量比相對應(yīng)的不注射組均顯著升高（ 。另外， 29d 肉雞的肝臟 量顯著高于 40d（ P=。 中國農(nóng)業(yè)科學院博士學位論文 第二章 急性氧化應(yīng)激動物試驗模型的研究 31 隨注射處理后激素作用時間的延長（ 4h、 12h 和 24h）胸肌 量先降低后升高， 24h 仍未恢復到對照組水平，顯著高于 12h（ ；同時相應(yīng)注射 ， 。29d 肉雞的腿肌 量顯著高于 40d（ P=。 隨注射處理后激素作用時間的延長（ 4h、 12h 和 24h） ，腿肌 量先降低后升高， 24高于 12h 處理，但二者差異不顯著（ P，顯著低于 4h（ ；同時相應(yīng)注射 ， 量比相對應(yīng)的不注射組均顯著降低（ 。隨注射處理后激素作用時間的延長（ 4h、 12h 和 24h） ，肝臟 量先升高后降低， 24h 仍未恢復到對照組水平，雖低于 12h 處理，但二者差異不顯著（ P，顯著低于 4h（ ；同時相應(yīng)注射 ， 。隨注射處理后激素作用時間的延長（ 4h、 12h 和 24h）心肌 量先降低后升高， 24h 基本恢復到對照組水平，雖高于 12h 處理，但三時間段差異不顯著（ P，數(shù)值分別為： P=對照組 此 24h 不足以使心臟 復到初始水平。 表 2理對肉仔雞在心肌和肝臟 10%勻漿 量（白）的影響 EX DA in of 肝臟 臟 理 9d,n=42 4h/14112h/14124h/14129d,n=42 4h/14112h/14124h/141C 138 68 5097 2901 52,C; a,b,c,d, C, S, R, R+S, R+R+同表 2as 1， 2， 3：同表 2as 素注射對胸肌勻漿中 量的影響 注射 ，胸肌 量顯著高于對照組（ ；同時相應(yīng)注射 ， 量比相對應(yīng)的不注射組均顯著降低（ 。另外， 29量與 40d 屠宰差異不顯著（ ，數(shù)值分別為： P= 中國農(nóng)業(yè)科學院博士學位論文 第二章 急性氧化應(yīng)激動物試驗模型的研究 33 表 2理對肉仔雞在胸肌 10%勻漿 量（白）的影響 EX DA in of 宰日齡 射處理后的時間 理 9d, n=56 40d, n=42 4h,n=28 12h,n=28 24h,n=28 C 2273 211 9567 57,B,C; a,b,c,d, C, S, R, R+S, R+R+同表 2as 1， 2， 3：同表 2as 素注射對腿肌勻漿中 量的影響 注射 ，腿肌 量顯著高于對照組（ ；同時相應(yīng)注射 ， 量比相對應(yīng)的不注射組均顯著降低（ 。另外， 29d 肉雞的腿肌 量顯著高于 40d（ P=。 隨激素處理后時間的延長（ 4h、 12h 和 24h）腿肌 量幾乎未見差異（ P，數(shù)值分別為： P= 表 2理對肉仔雞在腿肌 10%勻漿 量（白）的影響 EX DA in of 屠宰日齡 射處理后的時間 理 9d, n=56 40d, n=42 4h,n=28 12h,n=28 24h,n=28 C 8383 1342 8348 83#,B,C; a,b,c,d, C, S, R, R+S, R+R+同表 2as 1， 2， #：同表 2as 肉注射 肉仔雞血液生化指標影響的研究 漿 抗氧化能力（ 近幾年研究發(fā)現(xiàn)的用于衡量機體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標。包括酶促谷胱甘肽過氧化物酶 (超氧化物歧化酶 (、過氧化氫酶 (等中國農(nóng)業(yè)科學院博士學位論文 第二章 急性氧化應(yīng)激動物試驗模型的研究 34 （ 1969； 1976）和非酶促（還原型谷胱甘肽 (、 維生素類、尿酸、血漿銅藍蛋白 (胡蘿卜素、葡萄糖等（ ， 1993； ， 1990 ）兩類，其作用是清除自由基、分解過氧化物、除去其催化作用的金屬離子，是代表體內(nèi)抗氧化能力總體水平的一項指標，由于 有很強的代表性，所以是反映機體抗氧化功能的一個良好指標（劉國艷等， 2001） 。 注射 ，與對照組相比血液 著降低（ ； 與對照組相比， 注射生理鹽水反而使得血液 高， 同時注射 得 著高于對照組（ ；注射 降低了血液 兩者差異不顯著（ P，與其它指標不同的是對于 說，注射 反應(yīng)不一致。另外， 29d 血漿 40d 差異不顯著（ P=肉仔雞血液總抗氧化能力與年齡無相關(guān)性。 注射處理后隨著激素和 用時間的延長，血清 逐漸降低， 4h、 8h、 12h 和24h 分別為： P=。 4h 顯著高于 24h 的（ ；同時相應(yīng)注射 ，血液 相對應(yīng)的不注射組均顯著升高（ 。另外， 29d 與40d 相比差異不顯著（ P= 激素注射處理后隨 用時間的延長，血清 逐漸降低， 4h、8h、 12h 和 24h 分別為： P=。8 12h 的至最低，顯著低于 4h 的值（ ；同時相應(yīng)注射 ，血液 相對應(yīng)的不注射組均顯著升高（ 。 290d 差異不顯著（ P= 激素注射處理后隨 用時間的延長，血清 逐漸降低， 4h、8h、 12h 和 24h 分別為： P=激素處理 24h 后，肉仔雞血液 降至最低，顯著低于 4h 的值（ ；同時相應(yīng)注射 ，血液 相對應(yīng)的不注射組均顯著降低（ 。另外， 29d 血液 高于 40d（ P= 激素注射處理后隨 用時間的延長，血清 先升高再降低， 4h、8h、 12h 和 24h 分別為： P=。激素處理 24h 后，肉仔雞血液 降至最低，顯著低于 4h 和 8h 的值（ ，提示我們激素處理后 8h 作實驗更加合適， 24h 激素已經(jīng)基本代謝完畢。 中國農(nóng)業(yè)科學院博士學位論文 第二章 急性氧化應(yīng)激動物試驗模型的研究 37 二醛（ 當機體受到應(yīng)激時， 機體防御體系的抗氧化能力下降， 體內(nèi)自由基代謝產(chǎn)物 (量升高。本文測定不同日齡肉仔雞，隨著應(yīng)激處理時間的延長，其血液 變化情況。 注射 ，與其它所有處理組相比，血液 著升高（ ；同時相應(yīng)注射 ，血液 相對應(yīng)的不注射組均顯著降低（ ；同時相應(yīng)注射 ，血液 相對應(yīng)的不注射組均顯著降低（ ；同時相應(yīng)注射 ，血液 相對應(yīng)的不注射組均顯著降低 （ ； 升到了最高， 顯著高于對照組 （ 。同時相應(yīng)注射 ，血液各生化指標均得到了恢復，與相對應(yīng)的不注射組均有顯著變化（ 。血液生化指標對激素處理的敏感性基本不受日齡的影響。 處理后，隨著激素作用時間（ 4h， 8h， 12h 和 24h）的延長， 漸降低， 8 12h 無差異； 降低再升高， 8 12h 最低，無差異； 漸降低， 4 8 h 無差異； K 先升高再降低， 8h 最高；