胎盤因子的制備及其對(duì)淋巴細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用的體外研究_醫(yī)學(xué)論文_醫(yī)藥學(xué)論文__8404

胎盤因子的制備及其對(duì)淋巴細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用的體外研究_醫(yī)學(xué)論文_醫(yī)藥學(xué)論文_【摘要】為了建立制備胎盤因子（PLACENTAFACTOR,PF）的新方法，研究PF理化性質(zhì)，并探討PF體外應(yīng)用對(duì)淋巴細(xì)胞的影響，應(yīng)用超濾法制備PF，對(duì)PF的含量及各種成分的分子量進(jìn)行測(cè)試，并以環(huán)孢素ACSA為陽(yáng)性對(duì)照，生理鹽水NS為陰性對(duì)照。應(yīng)用甲基噻唑基四唑（MTT）法檢測(cè)植物血凝素（PHA）誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖及混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR）；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T細(xì)胞CD69的表達(dá)；應(yīng)用乳酸脫氫酶釋放法測(cè)定自然殺傷（NK）細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞K562的殺傷作用。結(jié)果表明在本研究中所制備的PF是一組小分子多肽類物質(zhì)，主要含有兩種成分，分子量分別為9187KD及4794KD；用BRADFORD法證實(shí)，多肽質(zhì)量為5769MG/G鮮重胎盤。體外研究顯示，PF抑制PHA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖及混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的作用與環(huán)孢菌素A（CSA）相當(dāng)（P005）。PF和CSA均可下調(diào)佛波酯（PMA）離子霉素（IONOMYCIN）刺激后T淋巴細(xì)胞活化抗原CD69的表達(dá)（PFVSCSA,P005）。細(xì)胞殺傷試驗(yàn)顯示，PF組NK細(xì)胞殺傷活性略高于或等于NS組（P005），而CSA組殺傷活性明顯低于NS組（P005）BOTHPFANDCSACOULDDOWNREGULATETHEEXPRESSIONOFCD69ONTCELLSWHICHHADBEENSTIMULATEDBYPMAPLUSIONOMYCINPFVSCSA,P005THECYTOTOXICITYOFNKCELLSAGAINSTK562CELLSINPFGROUPWASSLIGHTLYHIGHEROREQUIVALENTASCOMPAREDWITHTHATINNSGROUPP005,BUTTHECYTOTOXICITYINCSAGROUPWASMUCHLOWERTHANTHATINNSGROUPP005），并呈劑量依賴關(guān)系。CD69抗原亦稱早期激活抗原，文獻(xiàn)報(bào)道CD69可通過(guò)提高鈣離子濃度，上調(diào)IL2R的P55鏈，產(chǎn)生TH1型細(xì)胞因子，引發(fā)淋巴細(xì)胞增殖，起到信號(hào)傳遞功能17，CD69僅表達(dá)于活化的T細(xì)胞，而在靜止的T細(xì)胞表面沒(méi)有表達(dá)。我們應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)了PMA離子霉素刺激后T細(xì)胞CD69的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)PF可顯著抑制由PMA離子霉素誘導(dǎo)的T細(xì)胞活化，亦與劑量相關(guān)，尤其是在高劑量組，抑制作用強(qiáng)于CSA（P005）。NK細(xì)胞具有廣譜的抗腫瘤作用，尤其對(duì)淋巴瘤、白血病最為有效。另外，NK細(xì)胞還可以殺傷病毒感染的靶細(xì)胞，并且對(duì)某些胞內(nèi)感染的細(xì)菌、真菌及寄生蟲(chóng)也有殺傷作用。我們應(yīng)用乳酸脫氫酶釋放法檢測(cè)NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞K562的殺傷活性，研究證實(shí)，PF不影響NK細(xì)胞對(duì)腫瘤的殺傷，甚至在某些劑量組，還可促進(jìn)NK細(xì)胞對(duì)腫瘤的殺傷，但CSA卻明顯降低NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性。上述體外試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)T細(xì)胞而言，PF可以產(chǎn)生與CSA相當(dāng)?shù)拿庖咭种谱饔?；但與CSA不同，它不影響甚或促進(jìn)NK細(xì)胞對(duì)腫瘤的殺傷。本研究建立了一種制備PF的新方法，并首次證實(shí)PF體外應(yīng)用對(duì)T細(xì)胞有強(qiáng)大的免疫抑制作用，可抑制由絲裂原及異基因抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖及活化，同時(shí)不影響甚或促進(jìn)NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。這些結(jié)果表明，PF在抑制GVHD的同時(shí)，或許可以較好地保留移植物抗腫瘤效應(yīng)（GVT），是一種較理想的、有應(yīng)用潛能的抗GVHD制劑。今后，我們將進(jìn)一步研究PF在動(dòng)物體內(nèi)應(yīng)用對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)功能的影響?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1LIUF，LUDPPURIFICATIONOFPLACENTAELUTEDGAMMAGLOBULINSANDTHEIRSTRONGEFFECTAGAINSTGRAFTVERSUSHOSTREACTIONSINVITROANDINVIVOINTJHEMATOL,2005821621682CULOUSCOUJM,REMACLEBONNETMM,POMMIERG,ETALIMMUNOSUPPRESSIVEPROPERTIESOFHUMANPLACENTASTUDYOFSUPERNATANTSFROMSHORTTERMSYNCUTIOTROPHOBLASTCULTURESJREPRODIMMUNOL,1986933473SILVERRK,TURBOVJM,BEAIRDJA，ETALSOLUBLEFACTORPRODUCEDBYISOLATEDFIRSTTRIMESTERCHORIONICVILLIDIRECTLYINHIBITPROLIFERATIONOFTCELLSAMJOBSTETGYNECOL,1990163191419194SANYALMK,BRANICJ,BISCHOFP,ETALIMMUNOREGULATORYACTIVITYINSUPERNATANTSFROMCULTURESOFNORMALHUMANTROPHOBLASTCELLSOFTHEFIRSTTRIMESTERAMJOBSTETGYNECOL,1989,1614464535劉月新，王勛楚，段茂芳等一種新的免疫調(diào)節(jié)劑中國(guó)免疫學(xué)雜志,1985151536梁積恒，張麗生，張力圖等胎盤免疫調(diào)節(jié)因子治療惡性腫瘤313例的臨床研究廣西醫(yī)學(xué),199921137黃寧玲，齊準(zhǔn)，馬寧等胎盤肽為主治療兒童支氣管哮喘12例醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐,199581191208焦文舉，張甫，戴巍等胎盤肽治療乙型慢性活動(dòng)型肝炎療效觀察哈爾濱醫(yī)藥,19961615179元曉茗，黃春林，趙月菊等胎盤肽治療變應(yīng)性鼻炎臨床觀察中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科雜志，20031111812010任建梅，吳駿，王玉珍胎盤因子的研制包頭醫(yī)學(xué)，199721192011黃楚華，殷學(xué)倫超濾法制備胎盤肽的初步研究中國(guó)生化藥物雜志,19911513313412張曉楠，曹云新，程司坤等用于測(cè)定小分子多肽的兩種電泳方法的比較生物工程進(jìn)展,200117747613石繼紅，趙永同，王俊樓等SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析小分子多肽第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),20002176176314馬布仁，李素華，謝軼勛等胎盤免疫活性的實(shí)驗(yàn)研究解放學(xué)醫(yī)學(xué)雜志,19881333533715李恩善，董邦金，楊琨等胎盤免疫調(diào)節(jié)因子理化性質(zhì)及生物學(xué)活性的實(shí)驗(yàn)研究上海免疫學(xué)雜志,19931320520616VOGELSANGGB,HESSADGRAFTVERSUSHOSTDISEASENEWDIRECTIONSFORAPERSISTENTPROBLEMBLOOD，1994842061206717RUTELLAS,RUMIC,LUCIAM