glp1類似物exendin4對糖尿病腎病大鼠腎臟sod、8ohdg的影響(可編輯)

GLP1類似物EXENDIN4對糖尿病腎病大鼠腎臟SOD、8OHDG的影響單位代碼分類號號學密級一類似物一對糖尿病腎病大鼠腎臟、的影響生究研嫠紹自師教導指蘭亟堡揚煎熬援一一申請學位門類級別醫(yī)堂亟登堂堂笪上一名稱業(yè)專凼型堂一向至型蕉屋疸盟莖型點監(jiān)遢型址方研究院學在笠魚壓匡堂瞳所年月同學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明,所呈交的學位論文系導師指導下本人獨立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果,均已做出明確標注或得到許可。論文內容未包含法律意義上已屬于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他學位申請的論文或成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本文如違反上述聲明,愿意承擔以下責任和后果、交回學校授予的學位證書、學?？稍谙嚓P媒體上對作者本人的行為進行通報、本文按照學校規(guī)定的方式,對因不當取得學位給學校造成的名譽損害,進行公開道歉。、本人負責因論文成果不實產生的法律糾紛。論文作者簽名亟雌學位論文版權使用授權書本人完全了解山西醫(yī)科大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定,同意學校保留或向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版,允許論文被查閱和借閱本人授權山西醫(yī)科大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索,可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。本人離校后發(fā)表或使用學位論文或與該論文直接相關的學術論文或成果時,署名單位仍然為山西醫(yī)科大學。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定日期論文作者簽名蘭望年一月叢乙日指導教師簽名日期紐蘭年丘月改善較低劑量治療組更明顯,其差異具有顯著性。與對照組相比,其余兩組療前后的總膽固醇、高密度脂蛋白有差異,但差異無統(tǒng)計學意義,具體結果見表及圖、。表各組大鼠生化指標的變化義士,土分組/尿蛋白/士士士土士雖羼注與組相比較,”,與低劑量治療組相比較厶釬歸磐扎筋加惦日對照組低劑量治療者高劑量治療組圖各組大鼠血糖數(shù)值與對照組相比較,與低劑量治療組相比較,”印口尿蛋白加對照組低劑量治療者高劑量治療組圖各組大鼠小時尿蛋白比較與對照組相比較,與低劑量治療組相比較,”山西醫(yī)科大學磺士學位論文團對照組口低劑量治療者囚高劑量治療組圖各組大鼠血脂比較與對照組相比較,與低劑量治療組相比較,”染色觀察各組大鼠腎臟的病理變化通過染色鏡下觀察,對照組腎臟組織可見明顯腎小球萎縮,基質增生,毛細血管袢受壓,腎小管管壁增厚,管腔狹窄等典型的改變。上述病理改變在低劑量治療組和高劑量治療組中有不同程度的減輕,以高劑量治療組減輕更為顯著,見圖。圖各組大鼠腎臟染色對照組倍低劑量組倍高劑量組倍各組大鼠腎組織、的蛋白表達水平免疫組織化學法觀察大鼠腎臟組織、的蛋白表達水平,其表達部位均位于腎小球系膜細胞區(qū)、腎小管上皮細胞及間質去,黃色或棕黃色顆粒即可為染色陽性,染色結果見圖二、三,統(tǒng)計學分析結果見表、圖、。坐墮墨苧奎蘭堡圭主壘絲蘭一一圖蛋白表達水平對照組倍低劑量組倍高劑量組倍圖蛋白表達水平對照組倍低劑量組倍高劑量組倍表治療后各組大鼠腎組織、的平均光密度值士一,士一一一分組例數(shù)一一組低劑量治療組士高劑量治療組士叫一一注與組相比較,與低劑量治療組相比較。仃朝,坐墮墨壁查蘭堡圭蘭垡絲苧一木撐團組口低劑量治療組因高劑量治療組姆趟齠米轷圖治療后各組大鼠腎組織、的平均光密度值山西醫(yī)科大學碩士學位論文討論近年來,隨著生活生活的不斷進步,人們生活方式的轉變,糖尿病患者的數(shù)量急劇增加,隨之而來的是糖尿病腎病,的患病率的逐年升高,如果缺乏正規(guī)的治療,糖尿病腎病易演變成為終末期腎病,后者既是糖尿病患者死亡的主要原因之一,又是腎臟疾病引起死亡最常見的原斟。其發(fā)病機制甚為復雜,雖已證實多種致病基因及病理生理環(huán)節(jié)參與其發(fā)病,但具體機制尚不十分明確,如何更好的預防及治療糖尿病腎病是目前臨床工作迫切需要解決的問題,學術界為此投入了巨大的人力物力試圖解決這一問題。越來越多的證據(jù)表明,糖尿病導致的體內氧化與抗氧化的失衡在糖尿病腎病發(fā)生。發(fā)展中起到了十分關鍵的作用關于人們對氧化應激的認識可以追溯到年前人們對衰老這一現(xiàn)象的理解。英國學者認為,衰老的本質是由于自由基攻擊生命大分子引起的細胞損傷,這種損傷同時可誘發(fā)腫瘤及其他多種疾病,即所謂的自由基衰老學說。直至年,美國學者等【】首先提出了氧化應激的概念,同時指出了的學說中所存在的種種缺陷,從此人們對氧化應激有了一個初步的認識。氧化應激是指機體各種有害刺激的作用下產生大量的活性氧簇,和活性氮簇這類具有高反應性、高活性的物質,一旦這類物質的數(shù)量超出了機體抗氧化系統(tǒng)所能承受的范圍,氧化及抗氧化系統(tǒng)之間的動態(tài)平衡被打破,引發(fā)一系列的不良后果。這類物質主要包括超氧陰離子、羥自由基和過氧化氫等及一氧化氮、二氧化氮和過氧化亞硝酸鹽等活性氮簇,這些物質可與體內的脂質、蛋白質、核糖核酸等生物大分子發(fā)生反應,引起病理生理改變。同時,體內還存著一類物質,這類物質可起到清除自由基、減輕氧化損傷的作用,可以認為這類物質構成了機體的抗氧化系統(tǒng)。體內的抗氧化系統(tǒng)可分為兩類一類是酶抗氧化系統(tǒng),包括超氧化物歧化酶,、谷胱甘肽過氧化物酶,、過氧化氫酶,等另一類是非酶抗氧化系統(tǒng),包括維生素、維生素、硫辛酸、類胡蘿卜素、褪黑素、谷胱甘肽、微量元素銅、鋅、硒等。大多數(shù)的時間里,這兩個系統(tǒng)之間處于一個動態(tài)平衡的狀態(tài),一旦這一平衡被打破,則會引起一系列病理生理改變,并最終導致疾病。近年來,氧化應激與疾病的關系逐漸成為臨床科研的一個熱點,研究主要集中在氧化應激與衰老、腫瘤、糖尿病及細胞凋亡等方面。有一種學說認為氧化應激是包括糖尿病、胰島素抵抗、心血管疾病等多種疾病在內的共同始動因素,這就是著名的“共同土壤”學山西醫(yī)科大學硬士學位論文說】。隨著這方面的研究深入,目前這一學說的正確性己得到了學術界的公認。同時,糖尿病也可導致氧化應激反應的加重,氧化應激反應的加重反過來加速細胞的凋亡、胰島功能的破壞,形成惡性循環(huán)。這一結果不僅會導致難以控制的血糖升高,同時也會加速糖尿病各種慢性并發(fā)癥如糖尿病腎病的出現(xiàn),最終導致終末期腎病。有研究報道,高糖環(huán)境下培養(yǎng)的內皮細胞較正常環(huán)境下培養(yǎng)的內皮細胞會產生更多的活性氧簇,其機制是高血糖時體內可產生大量的電子供體,這些物質明顯增加了線粒體膜兩側的電化學勢能,超氧化物的產生也隨之增加【】。因此,線粒體是產生活性氧簇的主要部位,糖尿病時過量活性氧簇的產生主要是線粒體膜兩側電化學是能增加導致的功能紊亂。而過量的可通過糖基化終末產物途徑、多元醇途徑、己糖胺旁路、途徑等多條途徑參與組織損傷,并最終導致糖尿病腎病【。電子傳遞鏈復合體抑制劑、解偶聯(lián),蛋白,和錳超氧化物歧化酶可抑制該類物質,從而延緩糖尿病腎病的進展。高糖狀態(tài)下,糖基化終末產物主要是來自于單糖與機體內大分子物質通過非酶反應結合,與其特異性受體結合后,產生的生物學效應主要包括降低的酶活性、改變蛋白質的分子結構、釋放某些細胞因子及損傷核酸分子等【。梭甲基賴氨酸大量沉積于腎小球系膜區(qū)及毛細血管壁被認為是糖尿病重要始動因素之一【,而這一物質就來自于糖基化終末產物作用下的蛋白質非酶糖化?；钚匝醮剡€可以通過增強多元醇途徑而消耗大量還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸,使得體內某些具有抗氧化功能的物質生成減少,從而使機體能容易遭受過氧化損傷【】己糖胺旁路主要通過上調細胞因子轉化生長因子,的表達,從而參與腎臟的病理改變的過程【而蛋白激酶,可激活絲裂原活化蛋白激酶,通路,導致系膜細胞的細胞周期紊亂,長時間停留于促進系膜細胞增生的期,結果導致加速糖尿病腎病的進展【。此外,過量的,表達的上調擔引,而后者在糖尿病腎病發(fā)展可造成血管緊張素過程中起到的作用不言而喻。由此可見,糖尿病時氧化應激導致糖尿病腎病是一個復雜的病理生理過程,高糖時產生的可與其他物質互為因果,共同參與糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展。因此,體內的水平可客觀地反應體內氧化應激的嚴重程度,并可作為判斷預后的一項重要指標。但由于具有高反應性,可以迅速的與周圍物質反應,故直接準確檢測體內數(shù)量在技術上還存在很多困難。目前體內氧化應激的定量描述主要依賴于與山西醫(yī)科大學碩士學位論文脂質、核糖核酸、蛋白質等物質發(fā)生反應后的氧化產物的測定。羥基脫氧鳥苷是受到氧化攻擊后的產物,其產生的原因是由于攻擊了鳥嘌呤的第位碳原子而形成的堿基修飾產物。近年來受越來越多的關注,不僅是由于與正常人相比,糖尿病。腎病患者,尤其在伴有腎功能異常的患者體內的水平是顯著增高的,反映了糖尿病及患者體內氧化應激水平的增高刃】,還因為該物質可直接從尿液中檢測,且檢測成本相對較為低廉,因此可能會成為今后臨床評價氧化應激水平的一項重要指標。體內清除自由基的生物酶在氧化應激反應的過程中大量消耗,因此,這些酶的定量檢測也可從一個側面反,是體內清除自由應氧化應激的嚴重程度。超氧化物歧化酶基的重要生物酶,但其作用不僅限于清除體內氧自由基。有研究表明,糖尿病大鼠成模及周時,其腎組織內活性較對照組顯著下斛引。另外,有人通過免疫沉降技術發(fā)現(xiàn),糖尿病的大鼠腎臟組織內糖基化/非糖基化的比例明顯升高,這一研究從側面印證了腎臟組織活性的下降。因此,也可作用一個衡量機體或局部組織內氧化應激嚴重程度的指標。類似物最早是由生活在美國西南部及墨西哥北部地區(qū)的一種蜥蜴唾液中分離出來的,隨著生物科技的不斷發(fā)展,目前已經(jīng)實現(xiàn)了生物合成及量產。其分子結構與高度同源,因此可產生許多類似于的生物學效應,主要有、刺激胰島素分泌,且這種作用為葡萄糖依賴,即只在血糖異常升高時產生作用,因此可避免低血糖的發(fā)生,具有良好的臨床安全性、可通過減少胰島細胞的凋亡起到保護胰島功能,延緩糖尿病進展的作用、減少糖異生,促進糖原合成,從而起到不依賴胰島素的降糖作用、可直接抑制饑餓時胰高血糖素的分泌、抑制食欲,減緩胃排空。此外,一可能還具有營養(yǎng)神經(jīng)、預防治療阿爾茨海默病,及心血管方面的某些作用罐,因此,未來一的臨床應用很可能不僅僅局限于糖尿病的治療。但目前的研究主要集中在控制血糖、保護胰島功能等方面,關于與糖尿病腎病的關系的研究還略顯欠缺。基于目前糖尿病腎病的治療現(xiàn)狀,尋找一種有效治療糖尿病腎病的新途徑顯得十分重要,而。由于其受體在體內的廣泛分布,可產生廣泛的生物學效應,這可能會成為解決這一問題的突破口。本實驗中治療組糖尿病大鼠與對照相比,一般狀況較好,血糖、時尿蛋白定量、血脂等生化指標均有不同程度的好轉,腎臟組織病理改變明顯減輕,說明通過一為期周的治療,實驗動物糖尿病腎病的進展確實被延緩了。而通過免疫組化技術觀察,治療組腎臟組織水平明顯降低,說明可減輕氧化應激引起的山西醫(yī)科大學碩士學位論文損傷,與對照組相比,治療組表達水平明顯增高,說明在病程中,治療組大鼠的腎臟組織消耗更少的,即抗氧化酶,也可從一個側面印證了經(jīng)過一的治療,大鼠腎臟組織局部氧化應激水平的明顯下降。綜上所述,確實可以通過降低腎臟組織局部氧化應激的水平,減輕其誘導的組織損傷,從而起到預防及治療糖尿病腎病的作用。關于一抗氧化的機制,一方面來自于血糖的改善,另一方面,腎臟中可能存在的特異性受體,直接與該受體結合,產生一系列生物學效應,這些效應可阻斷或減少自由基的產生,抑或抑制引起組織損傷通路中的一個或幾個環(huán)節(jié),避免過量自由基造成的組織損傷,減少有害物質在腎小球的沉積,從而起到腎臟保護的作用。但是目前國內外研究的焦點集中在類似物的降糖作用及對胰島細胞的保護作用,關于對其他器官影響的研究還不夠深入,加強這方面的研究可能會對這類藥物的應用提供新的思路。總之,本研究提示,不僅可以改善血糖、血脂等生化指標,還可以通過減少糖尿病腎病大鼠腎臟組織的氧化損傷,減輕腎臟組織病理改變,可能會起到延緩糖尿病腎病的作用,其具體的作用機制尚不十分明確,藥物與受體的特異性結合可能參與其中。隨著研究的不斷深入,糖尿病腎病的治療可能將不再是一道困擾我們的難題,如何降低糖尿病是腎臟組織氧化應激的水平可能會成為今后糖尿病。腎病治療及預防的關鍵。結論、一類似物能有效改善糖尿病腎病鼠血糖、小時尿蛋白定量、血脂等生化指標。、類似物干預糖尿病腎病大鼠,可使腎臟組織上調、的表達下調。、類似物的這種作用呈劑量依賴。山西醫(yī)科大學碩士學位論文參考文獻【,【】,【,【,【,一【】,【,【,【,【山西醫(yī)科大學碩士學位論文,【】,【】,【】,【】,【】,【陳玲,賈汝漢,丁國華,等纈草油對型糖尿病人鼠腎臟的保護作用及其機制探討【】中華腎臟病雜志,【】,【】【】,【山西醫(yī)科大學碩士學位論文,【】【常潔,姜宗培,余學清氧化應激及其在糖尿病腎病中的作用【】國際內科學雜志,【,/【】,一【,一一【】,鯽,【,/【】山西醫(yī)科大學碩士學位論文綜述糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展與氧化應激【摘要】近年的研究結果表明,糖尿病引起的體內氧化與抗氧化的失衡是導致糖尿病慢性并發(fā)癥的重要原因。多種因素參與了糖尿病中的氧化應激損傷,促進了糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展。降低體內氧化應激水平將為糖尿病慢性并發(fā)癥的預防和治療提供新的方向和途徑。本文將就近年氧化應激與糖尿病。腎病發(fā)生發(fā)展關系的研究做一綜述?！娟P鍵詞】糖尿病腎病氧化應激活性氧簇糖尿病。腎病,是糖尿病常見的微血管并發(fā)癥,其患病率逐年提高,造成了巨大的社會經(jīng)濟負擔。其發(fā)病機制較復雜,屬多因素致病,多個致病基因或病理生理環(huán)境被證實可能參與其中。近些年,氧化應激在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展過程中的作用逐漸引起學術界的重榭。氧化應激概述英國學者認為,衰老的本質是由于自由基攻擊生命大分子引起的細胞損傷,這種損傷同時可誘發(fā)腫瘤及其他多種疾病,即所謂的自由基衰老學說。直到年,美國學者等首先提出了氧化應激的概念,同時指出的學說中所存在的缺陷,從此人們對氧化應激有了一個初步的認識。氧化應激是指機體各種有害刺激的作用下產生大量的高活性分子如和活性氮簇,超出了機體抗氧化系統(tǒng)所能承受的范圍,氧化及抗氧化系統(tǒng)之間的動態(tài)平衡被打破,引發(fā)一系列的不良后果。包括超氧陰離子、羥自由基和等活性氮簇包括一氧化氮、二氧化氮和過氧化亞硝酸鹽等。而體內的抗氧化系統(tǒng)可分為兩類一類是酶抗氧化系統(tǒng),包括超氧化物歧化酶,、谷胱甘肽過氧化物酶,、過氧化氫酶,等另一類是非酶抗氧化系統(tǒng),包括維生素、維生素、僅一硫辛酸、類胡蘿卜素、褪黑素、谷胱甘肽、微量元素銅、鋅、硒等。氧化應激導致糖尿病腎病的機制持續(xù)高糖狀態(tài)產生過量的主要由線粒體產生,糖尿病是過量的與高糖狀態(tài)下線粒體功能的紊亂有著密不可分的關系。過量的電子供體可顯著提高了線粒體膜內外電化學勢能,使超氧化物生成顯著增加了】。且高糖環(huán)境培養(yǎng)的血管內皮細胞產生過量的,可被電子傳遞鏈復合體抑制劑、解偶聯(lián)蛋白和錳超氧化物歧化酶所抑制引。除此之外,高糖時腎小球足細胞中的脂肪氧化酶途徑的激活也可產生,從而加山西醫(yī)科大學碩士學位論文劇的體內氧化抗氧化的失衡引。過量引起糖尿病。腎病的機制有學者【提出,線粒體電子傳遞鏈過氧化物的過量產生可引起糖尿病腎病及多種血管損傷,。生成增加可引起途徑、多元醇途徑、己糖胺旁路及蛋白激酶途徑的激活,造成組織損傷,最終導致。途徑高糖狀態(tài)下,糖與蛋白質、脂質和核酸的非酶反應形成,可產生酶活性降低、蛋白質交叉連接或降解、細胞毒途徑的激活及核酸的損傷等一系列有害的生物學效應。蛋白非酶糖化生成梭甲基賴氨酸,可沉積在擴增的系膜區(qū)和增厚的腎小球毛細血管壁,在早期糖尿病腎病中發(fā)揮重要作用。發(fā)揮其生物學效應的主要途徑是通過與其特異受體結合實現(xiàn)的。在各種腎臟細胞中均有表達,可激活核因子一曲,后者在高糖情況下可上調系膜細胞的表達,最終導致腎小球和腎小管的損傷【。除此之外,還可作為內皮粘附受體直接參與炎癥,促進白細胞的集聚【】。在腎小管細胞,的激活可促使小管細胞轉變?yōu)槌衫w維細胞,引起腎小管的萎縮及問質的纖維化。另外,的相互作用也可增加形成,進而通過血管緊張素轉化生長因子。信號途徑上調衣纖連蛋白的表達,分別引起系膜細胞肥大和腎小球硬化導致糖尿病腎病的發(fā)生,形成惡性循環(huán)。另外,可增力在系膜區(qū)和小管細胞的表達,從而刺激胞外基質蛋白的產生,主要包括纖維連接蛋白及,和型膠原等。同時可通過抑制基質金屬蛋白酶,阻止胞外基質的降解。動物研究表明,糖尿病腎病早期血管內皮生長因子表達增高,拮抗可減輕糖尿病大鼠的高濾過、白蛋白尿及腎臟肥大,而可促進表達。多元醇途徑多元醇途徑的增強可以消耗大量,使得還原型谷胱甘肽和一氧化氮生成減少,自由基生成過多,氧化應激易感性增加。此外,該途徑可使胞漿的比率增高,抑制三磷酸甘油醛脫氫酶的活性,導致丙酮醛的前體增多,從而引起生成增多。己糖胺旁路己糖胺旁路的增強主要通過增加造成腎臟損傷。葡萄糖轉化成一磷酸果糖后,部分在谷氨酰胺果糖磷酸氨基轉移酶作用下生成一磷酸葡糖胺抑偉后發(fā)現(xiàn)高糖誘導的的轉錄增加被抑制。磷酸葡糖胺可為需要乙酞氨基葡萄糖的物質提供底物,而乙酞氨基葡萄糖可修飾,刺激轉錄引。此外,己糖胺旁路增強還可上調一些刺激因子,反向激活啟動子。途徑細胞內高糖可是磷酸二羥丙酮增多,引起二?；视驮黾?激活多個亞型,已經(jīng)證明其抑制劑可緩解糖尿病腎病?？赏ㄟ^激活絲裂原活化蛋白激酶山西醫(yī)科大學碩士學位論文通路,增抑癌基因的表達,而后者主要使系膜細胞在高糖情況下經(jīng)過短期的增殖后,停止在細胞周期的期,其表達證據(jù)可促進系膜細胞的增殖【引。在內皮細胞,還可以通過激活來激活許多炎癥基因。同時,細胞和動物實驗也表明,?；蚩梢种聘咛钦T導的的激活其他大量的臨床試驗證實血管緊張素轉換酶抑制劑或血管緊張素受體拮抗劑類藥物可以顯著延緩糖尿病腎病的發(fā)展,減少蛋白尿,因此在糖尿病腎病的發(fā)生,發(fā)展中的作用不言而喻。研究表明,可以誘導多種致炎因子,細胞因子和生長因子的表達,通過高濾過,腎小球超濾屏障非選擇性孔徑開放,修飾基底膜和使足細胞的表達下降來參與蛋白尿的形成。高糖刺激可引起間質細胞和小管細胞中腎素和的表達,造成腎臟局部】的高濃度,近來,試驗研究發(fā)現(xiàn)參與高糖誘導的的上調。體內氧化應激水平的評價方法的代謝產物自由基具有高反應活性性,能夠迅速與周圍物質發(fā)生反應,決定了其半衰期短暫,這使得直接檢測這些自由基的水平非常困難,而自由基與、蛋白質和脂類反應后的產物,可作為反映自由基水平或者氧化應激的標志物。脂質過氧化產物是目前應用較多的反映糖尿病。腎病氧化還原狀態(tài)的指標,包括丙二醛、一羥基烯醇和一異前列腺素。但這個指標都不能非常準確地反映腎組織中脂質過氧化產物水平,丙二醛、羥基烯醇是前列腺素代謝的副產物,異前列腺素則受組織花生四稀酸代謝的影響,丙二醛是脂質過氧化的最終分解產物,丙二醛具有強交聯(lián)性質,能與含游離氨基的蛋白質、核酸等交聯(lián)形成堿,該交聯(lián)物具有熒光性質,難溶于水,不易排除而堆積,以至妨礙蛋白質、核酸及細胞功能、加速組織老化。丙二醛等尚可進步氧化修飾低密度脂蛋白,使得低密度脂蛋白對細胞的毒性作用明顯增強,與動脈硬化的發(fā)生顯著相關,因此該物質對微血管并發(fā)癥亦起一定作用。丙二醛是反映體內氧化應激狀態(tài)較可靠、穩(wěn)定的指標,因此,體內丙二醛含量可以通過反映脂質過氧化的程度,間接反映出細胞過氧化損傷的程度”。羥基脫氧鳥苷,是受