sn 0668-1997 出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗方法 杯碟法

SN06681997出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗方法杯碟法SN中華人民共和國進出口商品檢驗行業(yè)標準SN06681997出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗方法杯碟法METHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORT一CYLINDERPLATEMETHOD19970815發(fā)布19980101實施中華人民共和國國家進出口商品檢驗局發(fā)布SN0668一1997前言本標準是根據(jù)GB/T111993標準化工作導則第1單元標準的起草與表述規(guī)則第1部分標準編寫的基本規(guī)定及SN/T00011995出口商品中農(nóng)藥、獸藥殘留量及生物毒素檢驗方法標準編寫的基本規(guī)定的要求進行編寫的。其中測定方法采用了日本厚生省1990年編寫的畜、水產(chǎn)食品中的殘留物質(zhì)檢驗方法中的枯菌素檢驗方法。技術(shù)內(nèi)容上稍作改變，經(jīng)驗證后，按規(guī)定格式要求作了編輯性修改。在標準中同時制定了抽樣和制樣方法。本標準的附錄A是標準的附錄。本標準的附錄9B是提示的附錄。本標準由中華人民共和國國家進出口商品檢驗局提出并歸口。本標準由中華人民共和國浙江進出口商品檢驗局負責起草。本標準主要起草人費飛金、高雯潔。本標準系首次發(fā)布的行業(yè)標準。食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN06681997前言本標準是根據(jù)GB/T111993標準化工作導則第1單元G標準的起草與表述規(guī)則第1部分2標準編寫的基本規(guī)定及SN/T0001一1995出口商品中農(nóng)藥、獸藥殘留量及生物毒素檢驗方法標準編寫的基本規(guī)定的要求進行編寫的。其中測定方法采用了日本厚生省1990年編寫的畜、水產(chǎn)食品中的殘留物質(zhì)檢驗方法中的粘菌素檢驗方法技術(shù)內(nèi)容上稍作改變，經(jīng)驗證后，按規(guī)定格式要求作了編輯性修改在標準中同時制定了抽樣和制祥方法。本標準的附錄A是標準的附錄本標準的附錄B是提示的附錄本標準由中華人民共和國國家迸出口商品檢驗局提出并歸口本標準由中華人民共和國浙江迸出口商品檢驗局負責起草本標準主要起草人費飛金、高雯潔本標準系首次發(fā)布的行業(yè)標準。中華人民共和國進出口商品檢驗行業(yè)標準出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗方法杯碟法METHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORTCYLINDERPLATEMETHODSN0668一1997范圍本標準規(guī)定了出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗的抽樣、制樣和杯碟測定方法。本標準適用于出口鴨肉中粘菌素殘留量的檢驗。抽樣和制樣21檢驗批以不超過2500件為一檢驗批。同一檢驗批的商品應具有相同的特征，如包裝、標記、產(chǎn)地、規(guī)格和等級等。22抽樣數(shù)量批量，件最低抽樣數(shù)，件12512610051012501025150015501100017100125002023抽樣方法按22規(guī)定的抽祥件數(shù)隨機抽取，逐件開啟。每件至少取500G或一袋作為原始樣品，抽取的原始樣品總量不少于2KG，放入清潔容器內(nèi)，加封后，標明標記，及時送交實驗室。24試樣制備從所取回的原始樣品中取出部分有代表性樣品，將可食部分放人絞碎機中絞碎，充分混勻。用四分法縮分至不少于500G作為試樣。裝入清潔容器內(nèi)，加封后標明標記。25試樣保存將試樣于一18以下冷凍保存。注在抽樣及制樣的操作過程中，必須防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。測定方法方法提要用磷酸鹽緩沖液抽提試祥中殘留的粘菌素，經(jīng)均質(zhì)、離心，取上清液進行杯碟法測定。利用樣液中的中華人民共和國國家進出口商品檢驗局19970815批準1998一01一01實施I食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENET中華人民共和國進出口商品檢驗行業(yè)標準出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗方法杯碟法SN066819971范圍METHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORT一CYLINDERPLATEMETHOD本標準規(guī)定了出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗的抽樣、制樣和杯碟測定方法。本標準適用于出口鴨肉中粘菌素殘留量的檢驗。2抽樣和制樣21檢驗批以不超過2500件為一檢驗批。同一檢驗批的商品應具有相同的特征，如包裝、標記、產(chǎn)地、規(guī)格和等級等。22抽樣數(shù)量批量，件最低抽樣數(shù)，件125261001012501025150015501100017100125002023抽樣方法按22規(guī)定的抽樣件數(shù)隨機抽取，逐件開啟。每件至少取500G或一袋作為原始樣品，抽取的原始樣品總量不少于2KG，放入清潔容器內(nèi)，加封后，標明標記，及時送交實驗室。24試樣制備從所取田的原始樣品中取出部分有代表性樣品，將可食部分放入絞碎機中絞碎，充分混勻。用四分法縮分至不少于500G作為試祥裝入清潔容器內(nèi)，加封后標明標記。25試樣保存將試樣于18C以下冷凍保存。注在抽樣及制樣的操作過程中必須防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化3測定方法31方法提要用磷酸鹽緩沖液抽提試樣中殘留的粘菌素，經(jīng)均質(zhì)、離心，取上清液進行杯碟法測定。利用樣液中的中華人民共和國國家進出口商品位驗局19970815批準19980101實施SN0668一1997殘留粘菌素與支氣管敗血性博代氏桿菌的作用，根據(jù)產(chǎn)生抑菌圈的大小用標準曲線法定量。32試劑和材料除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。321枯菌素甲基磺酸鈉標準品已知效價標準品。1PG相當于。613PG粘菌素。322緩沖液IPH6。士。1,稱取800G無水磷酸二氫鉀溶于700ML水中，另取200G無水磷酸氫二鉀溶于300ML水中，兩者混合，于121高壓滅菌15MIN,323緩沖液QPH60士01稱取800G無水磷酸二氫鉀溶于700ML水中，另取200G無水磷酸氫二鉀溶于300ML水中，兩者混合。稱取鐵氰化鉀以。2比例溶解于該溶液中。324試驗菌種支氣管敗血性博代氏桿菌BRNDETELLABRONCHISEPTICA，由美國標準菌株收藏中心提供，菌株號ATCC4617,325粘菌素標準儲備液稱取適量的粘菌素甲基磺酸鈉標準品精確到。1MG，用緩沖液工溶解并制備成濃度為1000PG/ML的粘菌素標準儲備液。置4C保存，可使用8天。326粘菌素標準工作液分別吸取一定量枯菌素標準儲備液，用緩沖液I稀釋成濃度為。0125,0025,005,01,02PG/ML的粘菌素標準工作液。需當日配制和使用。327培養(yǎng)基I見附錄A中AD328培養(yǎng)基見附錄A中A2,3,29培養(yǎng)基M見附錄A中A3,33儀器和設備33門培養(yǎng)皿內(nèi)徑90MM，底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿，具陶瓦蓋。332牛津杯不銹鋼圓筒，外徑80101MM，內(nèi)徑60士01MM，高度100士01MM,333游標卡尺測量范圍。200MM,精度。02MM，或抑菌圈測量儀。334絞碎機電動。335均質(zhì)器不低于10000R/MIN,336離心機不低于4000R/MIN,337恒溫培養(yǎng)箱36士1C，擱板應保持水平。33,8高壓滅菌器。339恒溫水浴鍋恒溫士1C。34測定步驟341祥液制備稱取100G試樣精確至。1G于均質(zhì)杯內(nèi)，加入10ML緩沖液II，攪勻，放置60MIN。均質(zhì)2MIN10000R/MIN后，放入水浴鍋中煮沸3MIN。移入離心管中離心不少于10MIN4000R/MIN以上，取出上清液。在殘渣中再加10ML緩沖液Q，按上述方法均質(zhì)、離心，取出上清液。合并兩次上清液，并定容為20M1_作為樣液。342菌懸液的制備將支氣管敗血性博代氏桿菌接種于培養(yǎng)基F制成的試管斜面上于361C培養(yǎng)1624H后，再轉(zhuǎn)種到培養(yǎng)基II中，于36土1C培養(yǎng)1624H，制成菌懸液使用時注意搖勻。343菌懸液最佳用星測定測試前應先用。025PG/ML粘菌素標準工作液，對上述菌懸素液進行預測試。以不同量的菌懸液加入經(jīng)熔化并冷卻至4550C的培養(yǎng)基11中，充分混合，并經(jīng)36士1C培養(yǎng)17士1H后，選擇能使該標準工作液產(chǎn)生直徑大于等于10MM清晰完整的抑菌圈的菌懸液加入量，即為菌懸液的最佳用量。344檢定平板制備將培養(yǎng)基M熔化，注20ML于滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)保持水平，待其凝固，作為基層。另取培養(yǎng)基Z熔化，冷卻至45SOC，加入上述測得的最佳菌懸液用量，充分混合，取約4ML注入已鋪有基層培養(yǎng)基的平板食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN06681997殘留粘菌素與支氣管敗血性博代氏桿菌的作用，根據(jù)產(chǎn)生抑菌圈的大小用標準曲線法定量32試劑和材料除另有規(guī)定外所用試劑均為分析純，水為蒸館水。321粘菌素甲基磺酸納標準品己知效價標準品。1月相當于0613G粘菌素。322緩沖液1,PH60101稱取800G無水磷酸二氫御溶于700ML水中，另取200G無水磷酸氫二御溶于300ML水中，兩者混合，于121C高壓滅菌15MIN323緩沖液1,PH60土01。稱取800G無水磷酸二氫餌溶于700ML水中，另取200G無水磷酸氫二梆溶于300ML水中，兩者混合。稱取鐵氟化餌以02比例溶解于該溶液中。324試驗菌種3支氣管敗血性博代氏桿菌BRDETELLAHRANCHISE戶TICA，由美國標準菌株收藏中心提供，菌株號ATCC4617。325粘菌素標準儲備液稱取適量的粘菌素甲基硫酸錦標準品精確到01MG，用緩沖液I溶解并制備成濃度為1000問/ML的粘菌素標準儲備液。置4C保存，可使用8天。326粘菌素標準工作液2分別吸取一定量粘菌素標準儲備液，用緩沖液I稀釋成濃度為00125、0025、O町、01、02G/ML的粘菌素標準工作液。需當日配制和使用。327培養(yǎng)基1見附錄A中A1。328培養(yǎng)基H見附錄A中A2。329培養(yǎng)基M見附錄A中A3。33儀器和設備331培養(yǎng)皿內(nèi)徑90MM，底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿，具陶瓦蓋。332牛津杯不銹鋼圓筒，外徑80士0MM內(nèi)徑60士01MM，高度000101MM333游標卡尺測量范圍。200MM，精度。02MM，或抑菌圈測量儀。334絞碎機電動。335均質(zhì)器不低于10000R/MIN336離心機不低于4000R/MIN。337恒溫培養(yǎng)箱361C，擱板應保持水平。338高壓滅茜器E339恒溫水浴鍋恒溫土1C34測定步驟341佯液制備稱取100G試祥精確至01G于均質(zhì)杯內(nèi)，加入10ML緩I中液N，攪勻，放置60MINT均質(zhì)2MINO000R/MIN后，放入水浴鍋中煮沸3MIN移入離心管中離心不少于10MIN4000R/MIN以上，取出上清液。在殘渣中再加10ML緩沖液N，按上述方法均質(zhì)、離心，取出上清液甸合并兩次上清液，并定容為20ML作為樣液。342菌懸液的制備將支氣管敗血性博代氏桿菌接種于培養(yǎng)基I制成的試管斜窗上于36士1C培養(yǎng)1624H后，再轉(zhuǎn)種至IJ培養(yǎng)基E中，于36士1C培養(yǎng)1624H，制成茵懸液使用時注意搖勻。343菌懸液最佳用最測定測試前應先用0025月/ML粘菌素標準工作液，對上述菌懸素液進行預測試。以不同量的菌懸液加入經(jīng)熔化并冷卻至4550C的培養(yǎng)基E中，充分混合，并經(jīng)36士1C培養(yǎng)0711H后，選擇能使該標準工作液產(chǎn)生直徑大于等于10MM清晰完整的抑菌圈的菌懸液加入量，即為菌懸液的最佳用量。344儉定平板制備將培養(yǎng)基E熔化，注20ML于滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)保持水平，待其凝固，作為基層。另取培養(yǎng)基E熔比，冷卻至4550C，加入上述四H導的最佳菌懸液用量，充分混合，取約4ML主入已鋪有基層培養(yǎng)基的平板SN0668一1997中作種層，保持水平，使其凝固，制成檢定用的平板。所用平板需當天制備。345標準曲線的繪制用粘菌素標準工作液326繪制標準曲線。以。05PG/ML濃度的標準工作液為參考濃度以00125PG/ML濃度的標準工作液作陰性對照用。每個標準工作液濃度取三個檢定平板作為一組每個平板上置4個牛津杯，使牛津杯在半徑為25CM的圓面成900角間距，對角兩個杯中注滿005PG/ML參考濃度標準工作液，另兩個對角杯中注滿其他濃度的一種標準工作液。4個濃度標準工作液共12個檢定平板，用于制備標準曲線。其中005PG/ML參考濃度的標準工作液將得到24個抑菌圈直徑的數(shù)值，而其他標準工作液分別得到6個抑菌圈直徑的數(shù)值。蓋好平皿蓋，置36士1培養(yǎng)17士1H,翻轉(zhuǎn)平板，除去牛津杯，測量各個濃度產(chǎn)生的抑菌圈直徑精確到。1MM，求得各自的平均值。再求出。05PG/ML參考濃度24個抑菌圈直徑的平均值。用參考濃度的抑菌圈直徑的總平均值減去每組平板參考濃度的抑菌圈直徑平均值的差，即為各組平板的校正值。將校正后的值用式1和式2算出L和H點的直徑值，在半對數(shù)坐標紙上，以抑菌圈直徑為橫坐標算術(shù)級，粘菌素濃度為縱坐標對數(shù)級，通過L和H點連一直線即為標準曲線。7A4BC一2D1017D十4CB一2A102式中L標準曲線上最低濃度抑菌圈的直徑，MMH標準曲線上最高濃度抑菌圈的直徑，MMB參考濃度。05PG/ML的24個抑菌圈直徑的平均值，MMA,C,D分別表示標準曲線上其他標準工作液濃度0025,01,02PG/ML的抑菌圈直徑經(jīng)校正后的平均值，MM,346樣液的測定每份祥液取3個檢定平板在每個平板上置4個已滅菌的牛津杯按制備標準曲線方法放置，在對角的2只牛津杯里注滿被檢樣液，在剩余的2只牛津杯里分別注滿粘菌素參考濃度標準工作液即005PG/ML。于36士1C培養(yǎng)17士1H,翻轉(zhuǎn)平板，除去牛津杯。如有抑菌圈產(chǎn)生，量取抑菌圈直徑精確到01MM35結(jié)果的計算和表述如樣液抑菌圈的直徑小于10MM，即報告為“陰性”。如樣液抑菌圈的直徑大于等于10MM，求出每組三個檢定平板上樣液和參考濃度標準工作液抑菌圈直徑的平均值，經(jīng)校正后，從標準曲線上查出相應的粘菌素的濃度，通過式3，計算試樣中粘菌素殘留的含量3式中X試樣中粘菌素殘留的含量,MG/KGC從標準曲線上查得樣液中粘菌素濃度，KG/ML。每毫升最終徉液所代表的試樣量,G注如測定結(jié)果呈陽性，即所顯的抑菌圈直徑的平均值大于等于10MM必要時尚需進行確證試驗可用薄層層析法，參見附錄T3以證明抑菌物確系粘菌素。測定低限和回收率測定低限本方法的測定低限為。05MG/KG回收率食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN06681997中作種層，保持水平，使其凝固制成檢定用的平板所用平板需當天制備345標準曲線的繪制用粘菌素標準工作液326繪制標準曲線以005G/ML濃度的標準工作液為參考濃度以00125何/ML濃度的標準工作液作陰性對照用每個標準工作液濃度取三個檢定平板作為一組，每個平板上置4個牛津杯，使牛津杯在半徑為25CM的困面成90角間距，對角兩個杯中注滿005月/ML參考濃度標準工作液，另兩個對角杯中注滿其他濃度的一種標準工作液。4個濃度標準工作液共12個檢定平板，用于制備標準曲線。其中005G/ML參考濃度的標準工作液將得到24個抑菌圈直徑的數(shù)值，而其他標準工作液分別得到U6個抑菌圈直徑的數(shù)值。蓋好平皿蓋，置36土1C培養(yǎng)17J1H，翻轉(zhuǎn)平板除去牛津杯，測量各個濃度產(chǎn)生的抑菌圈直徑精確J1JO1MM，求得各自的平均值。再求出005G/ML參考濃度24個抑菌圍直徑的平均值用參考濃度的抑菌圈直徑的總平均值減去每組平板參考濃度的抑菌圈直徑平均值的差，即為各組平板的校正值。將校正后的值用式1和式2算出L和H點的直徑值，在半對數(shù)坐標紙上，以抑菌圈直徑為橫坐標算術(shù)級，粘菌素濃度為縱坐標對數(shù)級，通過L和H點連一直線RP為標準曲線。L一7A4BC2D10H一7D4CB一2A10式中L一一標準曲線上最低濃度JLJ菌圈的直徑，MMH一一標準曲線上最高濃度抑菌圈的直徑，MMB一一參考濃度005月/ML的24個抑菌圈直徑的平均值，MM12A，C、D一一分別表示標準曲線上其他標準工作液濃度0025、01、02問IML的抑菌圈直徑經(jīng)校正后的平均值，MM。346樣液的測定每份樣液取3個檢定平板在每個平板上置4個己滅菌的牛津杯按制備標準曲線方法放置，在對角的2只牛津杯里注滿被檢樣液，在剩余的2只牛津杯里分別注滿粘菌素參考濃度標準工作液即005噸/ML。于36士1C培養(yǎng)L7J1H，翻轉(zhuǎn)平板，除去牛津杯。如有抑菌圈產(chǎn)生，量取抑菌圈直徑精確J1J01MM35結(jié)果的計算和表述如樣液抑菌圈的直徑小于10MM，即報告為陰性。如樣液抑菌固的直徑大于等于10MRN，求出每組三個儉定平板上樣液和參考濃度標準工作液抑菌圈直徑的平均值，經(jīng)校正后，從標準曲線上查出相應的粘菌素的濃度，通過式3，計算試祥中粘菌素殘留的含量X二3式中X試樣中粘菌素殘留的含量，MG/KGC從標準曲線上查得樣液中粘菌素濃度，F(xiàn)G/MLM一一每毫升最終佯液所代表的試樣量，G。注G如測定結(jié)果呈陽性N所里的抑菌圈直徑的平均值大于等于10MM必要時尚需進行確證試驗可用薄層層析法，參見附錄BJ以證明仰菌物確果粘菌素。4測定低限和回收率41測定低限本方法的測定低限為005MG/KG,42回收率SN0668一1997鴨肉中枯菌素添加濃度及其回收率的實驗數(shù)據(jù)0050MG/KG時，回收率為780寫，0100MG/KG時，回收率為8500200MG/KG時，回收率為GOOE食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN06681997鴨肉中粘菌素添加濃度及其回收率的實驗數(shù)據(jù)20050MG/KG時，回收率為780，0100MG/同時，回收率為850，0200MG/同時，回收率為900SN0668一1997附錄A標準的附錄培養(yǎng)基K1培養(yǎng)基I蛋白陳100G牛肉浸膏50G抓化鈉259瓊脂150G水1000ML將上述成分于水中加熱溶解，調(diào)節(jié)PH使其滅菌后PH為65士。1，分裝于試管或克氏瓶中，于121高壓滅菌15MIN。滅菌后可制成斜面。A2培養(yǎng)荃I蛋白豚100G牛肉浸膏509氯化鈉25G水1OOOML將上述成分溶解于水中，調(diào)節(jié)PH使其滅菌后PH為7。士。1，分裝于試管或克氏瓶中，于121C高壓滅菌15MINA3培養(yǎng)垂，蛋白陳170G氯化鈉50G葡萄塘259磷酸氫二鉀259木瓜酶水解大豆30G瓊脂120G水1000ML將上述成分于水中加熱溶解，調(diào)節(jié)PH使其滅菌后PH為73士。1，分裝于錐形瓶中，于121高壓滅菌15MIN附錄B提示的附錄確證試驗確證試驗采用薄層層析法，用粘菌素標準品作對照，求R，值，以確證試樣中是否存在粘菌素。薄層層析條件薄層板硅膠G板點樣量50TAL點狀。展開劑丙酮一水1十1食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN0668一1997A1地弊基I蛋白陳100G牛肉浸膏50G氯化鏘25G瓊脂150G水1000ML附錄A標準的附錄蠟基將上述成分于水中加熱溶解，調(diào)節(jié)PH使其滅菌后PH為65士01，分裝于試管或克氏瓶中，于121C高壓滅菌15MIN滅菌后可制成斜面A2培養(yǎng)基E蛋白煉100G牛肉漫膏50G氯化銷25G水1000ML將上述成分溶解于水中，調(diào)節(jié)PH使其滅菌后PH為70土0，1，分裝于試管或克氏瓶中，于121C高壓滅菌15MINOA3膏，豐基E蛋白陳170G氯化納50G葡萄糖25G磷酸氫二錚25G木瓜酶水解大豆30G瓊脂120G水1000ML將上述成分于水中加熱溶解，調(diào)節(jié)PH使其滅菌后PH為73士0，1，分裝于錐形瓶中，于121C高壓滅菌15MINO附錄B提示的附錄確證試驗確證試驗采用薄層層析法，用粘菌素標準品作對照，求RI值，以確證試樣中是否存在粘菌素。薄層層析條件薄層板G硅膠G板點樣量，50L點狀展開JFTJ，丙翻水110SX0668一1997展開在飽和槽內(nèi)進行顯色劑。5MTV布三酮丙酮溶液。檢測噴灑顯色劑布三酮溶液，反應時間約5MIN食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN06681997展開Z在飽和槽內(nèi)進行顯色1FJO5V茍三閣丙嗣溶液檢測Z噴灑顯包劑茍三爵溶液，反應時間約5MINOSN0668一1997FOREWORDTHISSTANDARDWASDRAFTEDINACCORDANCEWITHTHEREQUIREMENTSOFGB/T111993DIRECTIVESFORTHEWORKOFSTANDARDIZATIONUNIT1DRAFTINGANDPRESENTATIONOFSTANDARDSPART1GENERALRULESFORDRAFTINGSTANDARDSANDSN/T00011995GENERALRULESFORDRAFTINGTHESTANDARDMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFPESTICIDE,VETERINARYDRUGRESIDUESANDBIOTOXINSINCOMMODITIESFOREXPORTTHISSTANDARDADOPTSTHERELEVANTMETHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINTHEMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFRESIDUESINANIMALANDAQUATICFOODS1990ED,APUBLICATIONOFMINISTRYOFPUBLICHEALTHOFJAPAN,ASTHEMETHODOFDETERMINATION,WHICHISTECHNICALLYEQUIVALENTTOTHATOFTHEORIGINAL,BUTWITHSLIGHTMODIFICATIONAFTERGOINGTHROUGHVERIFICATIONTHESTANDARDWASDRAFTEDACCORDINGTOTHEEDITORIALREQUIREMENTSFORTHESTIPULATEDFORMATINADDITIONTHEMETHODSOFSAMPLINGANDSAMPLEPREPARATIONAREALSOSPECIFIEDINTHISSTANDARDANNEXAOFTHISSTANDARDISANORMATIVEANNEXANNEXBOFTHISSTANDARDISANINFORMATIVEANNEXTHISSTANDARDWASPROPOSEDBYANDISUNDERTHECHARGEOFTHESTATEADMINISTRATIONOFIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINATHISSTANDARDWASDRAFTEDBYTHEZHEJIANGIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONBUREAUOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINATHISSTANDARDWASMAINLYDRAFTEDBYFEIFEIJIN,GAOWENJIETHISSTANDARDISAPROFESSIONALSTANDARDPROMULGATEDFORTHEFIRSTTIMENOTETHISENGLISHVERSION,ATRANSLATIONFROMTHECHINESETEXT,ISSOLELYFORGUIDANCE食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN0668一1997FOREWORDTHISSTANDARDWASDRAFTEDINACCORDANCEWITHTHEREQUIREMENTSOFGB/T11一1993DIRECTIVESFORTHEWORKOFSTANDARDIZATIONUNIT1DRAFTINGANDPRESENTATIONOFSTANDARDSPART1GENERALRULESFORDRAFTINGSTANDARDSANDSN/TOOOL1995GENERALRULESFORDRAFTINGTHESTANDARDMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFPESTICIDE,VETERINARYDRUGRESIDUESANDBIOTOXINSINCOMMODITIESFOREXPORTTHISSTANDARDADOPTSTHERELEVANTMETHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINTHEMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFRESIDUESINANIMALANDAQUATICFOODS0990EDAPUBLICATIONOFMINISTRYOFPUBLICHEALTHOFJAPANASTHEMETHODOFDETERMINATIONWHICHISTECHNICALLYEQUIVALENT怕也ATOFTHEORIGINALBUTWITHSLIGHTMODIFICATIONAFTERGOINGTHROUGHVERIFICATIONTHESTANDARDWASDRAFTEDACCORDINGTOTHEEDITORIALREQ山REMENTSFORTHESTIPULATEDFORMATINADDITIONTHEMETHODSOFSAMPLINGANDSAMPLEPREPARATIONAREAL50SPECIFIEDINTHISSTANDARDANNEXAOFTHISSTANCLARDISANORMATIVEANNEXANNEXBOFTHISSTANDARDISANNFORMATIVEANNEXTHISSTANDARDWASPROPOSEDBYANDISUNDERTHECHARGEOFTHESTATEADMINISTRATIONOFIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINATHISSTANDARDWASDRAFTEDBYTHEZHEJIANGIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONBUREAUOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINATHISSTANDARDWASMAINLYDRAFTEDBYFEIFEIJINGAOWENJIETHISSTANDARDISAPROFESSIONALSTANDARDPROMULGATEDFORTHEFIRSTTIMENOTETHISENGLISHVERSION,ATRANSLATIONFROMTHECHINESETEXTISSOLELYFORGUIDANCEPROFESSIONALSTANDARDOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINAFORIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONMETHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLITINRESIDUESSN0668一1997INMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORTCYLINDERPLATEMETHOD1SCOPETHISSTANDARDSPECIFIESTHEMETHODSOFSAMPLING,SAMPLEPREPARATIONANDDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESBYCYLINDERPLATEMETHODINMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORTTHISSTANDARDISAPPLICABLETOTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINDUCKMEATFOREXPORT2SAMPLINGANDSAMPLEPREPARATION21INSPECTIONLOTTHEQUANTITYOFANINSPECTIONLOTSHOULDNOTBEMORETHAN2500PACKAGESTHECHARACTERISTICSOFTHECARGOWITHINTHESAMEINSPECTIONLOT,SUCHASPACKING,MARK,ORIGIN,SPECIFICSTIONANDGRADE,SHOULDBETHESAME22QUANTITYOFSAMPLETAKENNUMBEROFPACKAGESINEACHINSPECTIONLOTMINIMUMNUMBEROFPACKAGESTOBETAKEN12512610051012501025150015501100017100125002023METHODOFSAMPLETAKENANUMBEROFPACKAGESSPECIFIEDIN22ARETAKENATRANDOMANDOPENEDONEBYONEFROMEACHATLEAST500GORONEBAGSHALLBETAKENASPRIMARYSAMPLETHETOTALWEIGHTOFALLPRIMARYSAMPLESSHOULDNOTBELESSTHAN2KG,WHICHISTHENPLACEDINACLEANCONTAINER,SEALED,LABELEDANDSENTTOTHELABORATORYINTIME24PREPARATIONOFTESTSAMPLEAPARTOFREPRESENTATIVESAMPLESHALLBETAKENFROMTHEMIXEDPRIMARYSAMPLE,THEEDIBLEPORTIONSAREHOMOGENIZEDBYGRINDINGINAMEATGRINDERTHEHOMOGENIZEDSAMPLEISTHOROUGHLYMIXEDANDREDUCEDTOATLEAST500GBYQUARTERINGASTHETESTSAMPLETHETESTSAMPLEISPLACEDINACLEANCONTAINER,WHICHISTHENSEALEDANDLABELED25STORAGEOFTESTSAMPLEAPPROVEDBYTHESTATEADMINISTRATIONOFIMPORTIMPLEMENTEDFROMJAN1,1998ANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINAONAUG15,19978食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETPROFESSIONALSTANDARDOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINAFORIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONMETHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESSN06681997INMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORT一CYLINDERPLATEMETHOD1SCOPETHISSTANDARDSPECILIESTHEMETHODS01SAMPLINGSAMPLEPREPARATIONANDDETERMINATION01COLISTINRESIDUESBYCYLINDERPLATEMETHODINMEATSANDMEATPRODUCTSLOREXPORTTHISSTANDARDISAPPLICABLETOTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINDUCKMEATFOREXPORT2SAMPLINGANDSAMPLEPREPARATION21INSPECTIONLOTTHEQUANTITY01ANINSPECTIONLOTSHOULDNOTBEMORETHAN2500PACKAGESTHECHARACTERISTICSOFTHECARGOWITHINTHESAMEINSPECTIONLOT,SUCHASPACKING,MARK,ORIGIN,SPECIFICATIONANDGRADESHOUDBETHESAME22QUANTITY01SAMPLETAKENNUMBEROFPACKAGESINEACHINSPECTIONLOTMINIMUMNUMBEROFPACKAGESTOBETAKEN12526100101250251500501100010012500NUM氣JV巾NULL223METHOD01SAMPETAKENANUMBER01PACKAGESSPECIFIEDIN22ARETAKENATRANDOMANDOPENEDONEBYONEFROMEACHATEAST500GORONEBAGSHA11BETAKENASPRIMARYSAMPLETHETOTALWEIGHT01A11PRIMARYSAMPESSHOUDNOTBELESSTHAN2KG,WHICHISTHENPLACEDINACLEANCONTAINER,SEALED,LABELEDANDSENTTOTHELABORATORYINTIME24PREPARATION01TESTSAMPLEAPART01REPRESENTATIVESAMPLESHA11BETAKENIROMTHEMIXEDPRIMARYSAMPLETHEEDIBLEPORTIONSAREHOMOGENIZEDBYGRINDINGINAMEATGRINDERTHEHOMOGENIZEDSAMPEISTHOROUGHYMIXEDANDREDUCEDTOATEAST500GBYQUARTERINGASTHETESTSAMPETHETESTSAMPEISPLACEDINACLEANCONTAINERWHICHISTHENSEAEDANDABEED25STORAGE01TESTSAMPEAPPROVEDBYTHESTATEADMINISTRATLONOFIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTLONORTHEPEOPLESREPUBLICORCHLNAONAUG151997IMPLEMENTEDFROMJAN11998SN0668一1997THETESTSAMPLESHOULDBESTOREDBELOW一18CNOTE,INTHECOURSEOFSAMPLINGANDSAMPLEPREPARATION,PRECAUTIONSMOSTBETAKENTOAVOIDCONTAMINATIONORANYFACTORSWHICHMAYCAUSETHECHANGEOFRESIDUECONTENT3METHODOFDETERMINATION11PRINCIPLETHECOLISTINRESIDUESINTHETESTSAMPLEAREEXTRACTEDWITHPHOSPHATEBUFFERSOLUTIONAFTERHOMOGENIZING,ANDCENTRIFUGING,CYLINDERPLATEMETHODISUSEDTODETERMINETHECOLISTININTHESUPERNATANT,WHICHISMADEREACTEDWITHBORDETELLABRONCHISEPTICWITHFORMATIONOFINHIBITIONZONEQUANTITATIONISMADEBYMEASURINGTHESIZEOFINHIBITIONZONE,USINGSTANDARDCURVEMETHOD12REAGENTSANDMATERIALSUNLESSOTHERWISESPECIFIEDALLREAGENTSUSEDSHOULDBEANALYTICALLYPURE,WATERISDISTILLEDWATER121COLISTINSODIUMMETHANESULFONATESTANDARDSTANDARDOFKNOWNPOTENCY1YGISEQUALTO0613MGOFCOLISTIN322BUFFERSOLUTIONIPH60土01DISSOLVE8O0GOFANHYDROUSPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN700MLOFWATERANDDISSOLVE200GOFANHYDROUSDIPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN300MLOFWATERMIXANDAUTOCLAVEAT121CFOR15MIN323BUFFERSOLUTIONIPH60士01DISSOLVE800GOFANHYDROUSPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN700MLOFWATERANDDISSOLVE200GOFANHYDROUSDIPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN300MLOFWATERMIXANDADD020OOFPOTASSIUMFERRICYANIDETOTHEMIXTURE,STIRTODISSOLVE124TESTSTRAINBORDETELLABRONCHISEPTIC,ATCC4617PROVIDEDBYTHEAMERICANTYPECULTURECOLLECTION325COLISTINSTANDARDSTOCKSOLUTIONACCURATELYWEIGHACCURATETO01MGAPROPERQUANTITYOFCOLISTINSODIUMMETHANESULFONATESTANDARDANDDISSOLVEINBUFFERSOLUTIONITOPREPAREASTANDARDSTOCKSOLUTIONOF1000PGCOLISTIN/MLINCONCENTRATIONSTOREINAREFRIGERATORAT4C，WHICHCANBEUSEDWITHIN8DAYS126COLISTINSTANDARDWORKINGSOLUTIONPIPETASERIESOFCOLISTINSTANDARDSTOCKSOLUTION,ANDDILUTESEPARATELYWITHBUFFERSOLUTIONITOPREPAREASERIESOFSTANDARDWORKINGSOLUTIONSOF001250025,005,01,02PG/MLINCONCENTRATIONS,WHICHSHOULDBEUSEDONTHESAMEDAYOFPREPARATION327MEDIUMISEEALINANNEXA328MEDIUMNSEEA2INANNEXA329MEDIUMMSEEA3INANNEXA33APPARATUSANDEQUIPMENT331CULTUREDISH90MMID,GLASSORPLASTICDISHESWITHSMOOTHANDFLATBOTTOMANDWITHCLAYCOVER332OXFORDCUPSTAINLESSSTEELCYLINDERS,80士。1MMOD,60士01MMID,HEIGHT10。土01MM333VERNIERCALIPERMEASURINGRANGE0200MM,PRECISION002MMORMETERFORMEASURINGTHEINHIBITIONZONE334MEATGRINDERELECTRIC335HOMOGENIZERNOTLESSTHAN10000R/MIN336CENTRIFUGENOTLESSTHAN4000R/MIN337INCUBATOR36士1C,THESHELFMUSTBEKEPTHORIZONTALI18AUTOCLAVE食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN06681997THE膽STSAMPLESHOULDBESTOREDBELOW18CNOTE,INTHECQUR陋。F回RNPLINGANDSAMPLEPREPARATIONPECAUTIONSRNO哨BETAKENTOAVODCONTAMINATIONORANYFACTORSWHICHMAYCAUSETHECHANGEOFRESIDUECONTENT3METHODOFDETERMLNATION3甸PRINCIPLETHECOLISTINRESIDUESINTHETESTSAMPLEAREEXTRACTEDWITHPHOSPHATEBUFFERSOLUTIONAFTERHOMOGENZING,ANDCENTRIFUGING,CYLINDERPLATEMETHODISUSEDTODETERMINETHECOLISTININTHESUPERNATANT,WHICHSMADEREACTEDWITHB曠DETELLAHRONCHSEPTICWITHFORMATONOFINHIBITIONZONEQUANTITATIONISMADEBYMEASURNGTHESZEOFINHIBITIONZONE,USINGSTANDARDCURVEMETHOD32REAGENTSANDMATERIALSUNLESSOTHERWISESPECIFIEDAUREAGENTSUSEDSHOULDBEANALYTICALLYPURE,WATERISDSTILLEDWATER321COLISTIN四DIUMMETHANESULFONATES阻NDARDSTANDARDOFKNOWNP。但NCY1GISEQUALTOO613G。FCOLISTIN322BUFFERSOUTIONIPH60土O1DISSOLVE800GOFANHYDROUSPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN700MLOFWATERANDDISSOLVE200GOFANHYDROUSDIPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN300MLOFWATERMIXANDAUTOCLAVEAT121CFOR15MIN323BUFFERSOLUTION1PH60士O1DISSOLVE800GOFANHYDROUSPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN700MLOFWATERANDDISSOLVE200GOFANHYDROUSDIPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN300MLOFWATERMIXANDADDO2OFPOTASSIUMFERRICYANIDETOTHEMIXTURE,STIRTODISSOLVE324TESTSTRAINBARDETELLABRANCHISEPTICATCC4617PROVIDEDBYTHEAMERICANTYPECULTURECOLLECTION325COLISTINSTANDARDSTOCKSOLUTIONACCURATELYWEIGHACCURATETOO1MGAPROPERQUANTITYOFCOLSTNSODIUMMETHANESU1FONATESTANDARDANDDISSOLVEINBUFFERSOLUTON1TOPREPAREASTANDARDSTOCKSOLUTIONOF1000GCOLISTIN/MLINCONCENTRATIONSTOREINAREFRIGERATORAT4C,WHICHCANBEUSEDWITHIN8DAYS326COLISTINSTANDARDWORKINGSOLUTIONPIPETASERIESOFCOLISTINSTANDARDSTOCKSOLUTION,ANDDILUTESEPARATELYWITHBUFFERSOLUTION1TOPREPAREASERIESOFSTANDARDWORKINGSOLUTIONSOFQ0125O025O050102G/MLINCONCENTRATIONS,WHICHSHOULDBEUSEDONTHESAMEDAYOFPREPARATION327MEDIUMISEEALINANNEXA328MEDIUMSEEA2INANNEXA329MEDIUMMSEEA3INANNEXA33APPARATUSANDEQUIPMENT331CULTUREDISH90MMIDGLASSORPLASTICDISHESWITHSMOOTHANDFLATBOTLOMANDWITHCLAYCOVER332OXFORDCUPSTAINLESSSTEELCYLINDERS80士。1MMOD60土01LMMIDJHEIGHTOO0土01MM333VERNIERCALIPERMEASURINGRANGEO200MM,PRECSON00