基因工程、細(xì)胞工程、胚胎工程流程.ppt

1、某種生物 （所有或部分DNA),限制酶,多個(gè)DNA片段,多個(gè)重組DNA,受體菌的不同個(gè)體,分別導(dǎo)入,DNA連接酶,載體,群體（基因組或部分基因文庫）,（不同個(gè)體含不同DNA片段）,（同種限制酶切割）,1.從基因組文庫中提取目的基因,目的基因的制備：,2.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,(1)反轉(zhuǎn)錄法： 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需的基因。,目的基因的mRNA,雜交雙鏈 (單鏈RNA/單鏈DNA),單鏈DNA,反轉(zhuǎn)錄酶,DNA聚合酶,雙鏈DNA (目的基因),3、人工合成目的基因（DNA合成儀）,已知核苷酸序列，且基因較小

2、，也可通過DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成。,(2)根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNA法 ：,根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應(yīng)的信使RNA序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對原則，推測出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。,蛋白質(zhì)的氨基酸序列,mRNA的核苷酸序列,基因的核苷酸序列,推測,推測,目的基因,化學(xué)合成,蛋白質(zhì)的氨基酸排列順序可以用測序儀自動完成。,如何構(gòu)建？,導(dǎo)入的方法？,如何檢測？,進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),1.基因工程流程圖：,（重組DNA分子導(dǎo)入農(nóng)桿菌，再讓農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞）,1. 目的基因?qū)胫参锛?xì)胞,雙子葉+裸子植物,單子葉,3.目的基因?qū)?微生物細(xì)

3、胞,2、目的基因?qū)雱游锛?xì)胞（常用受精卵）,2.蛋白質(zhì)工程流程圖：,蛋白質(zhì) 三維結(jié)構(gòu),氨基酸序列 多肽鏈,基因 DNA,mRNA,1、植物組織培養(yǎng)技術(shù),注意技術(shù)的原理、培養(yǎng)的條件、特點(diǎn)、優(yōu)點(diǎn)。,營養(yǎng)、激素,營養(yǎng)、激素,雜種植株,融合的原生質(zhì)體AB,再生出細(xì)胞壁,脫分化,愈傷組織,再分化,2.植物體細(xì)胞雜交技術(shù),1.植物細(xì)胞的融合,2.植物組織培養(yǎng),植物細(xì)胞A,原生質(zhì)體B,原生質(zhì)體A,雜種細(xì)胞AB,去 壁,人 工 誘 導(dǎo),融合完成的 標(biāo)志,植物細(xì)胞B,去壁,-酶解法,融合內(nèi)容：膜、質(zhì)、核的融合。,（篩選出雜種細(xì)胞）,融合原理：膜的流動性；,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官,胰蛋白酶處理,單個(gè)細(xì)胞,

4、加培養(yǎng)液,制成,細(xì)胞懸浮液,不死細(xì)胞,原理：細(xì)胞增值,無限傳代,作用：去掉組織間蛋白質(zhì),思考:動物細(xì)胞培養(yǎng)最終能培養(yǎng)成生物體?,1.動物細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)過程：,不能,部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)改變,原代培養(yǎng),隨細(xì)胞數(shù)增多，細(xì)胞分裂貼壁生長到表面相互接觸時(shí)就會停止分裂增殖細(xì)胞接觸抑制,傳代培養(yǎng),動物細(xì)胞培養(yǎng)條件,1、無菌、無毒的環(huán)境: （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液.） 2、營養(yǎng): （葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、維生素、動物血清等。） 3、溫度和PH: 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、氣體環(huán)境（注意作用） O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）,O2是細(xì)胞代謝的需要， CO2

5、是維持培養(yǎng)液的PH值,某種生物（供體）,M期的卵母細(xì)胞,體細(xì)胞,細(xì)胞質(zhì),體細(xì)胞,卵裂,重組細(xì)胞,體細(xì)胞核移植,細(xì)胞培養(yǎng),受體（代孕）母體子宮,胚胎移植,2.克隆動物產(chǎn)生的過程：,細(xì)胞培養(yǎng),3.動物細(xì)胞融合,雜交細(xì)胞的特點(diǎn)是什么？,克隆化培養(yǎng)和抗體檢測,4.單克隆抗體的制備,1、植物組織培養(yǎng)與動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較,2、植物體細(xì)胞雜交與動物細(xì)胞融合的區(qū)別,主要用于制備單克隆抗體,獲得雜種植株,用 途,物理、化學(xué)方法（同左）,滅活的病毒,物理（離心、振蕩、電刺激）,化學(xué)（聚乙二醇）,誘導(dǎo)方法,使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合,去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合,細(xì)胞融合的過程,細(xì)胞膜的流動性,細(xì)胞膜的流動性、,植物細(xì)胞全能性,細(xì)胞融合的原理,動物細(xì)胞融合,植物體細(xì)胞雜交,比較項(xiàng)目,精子、卵子發(fā)生的比較,胚胎移植,采集卵母細(xì)胞,體外培養(yǎng),采集精子,體外獲能,體外受精,早期胚胎培養(yǎng),受體牛,（時(shí)期： ）,1）超數(shù)排卵（試劑） 2）活體取卵（儀器） 3）從屠宰的卵巢取卵,方法,（方法，試劑）,（試劑）,（培養(yǎng)條件、目的階段）,成熟的卵子,獲能的精子,MII中期,方法,胚胎工程,選擇,供體母牛,受體母牛,同期發(fā)情處理,超數(shù)排卵,供體公牛,配種,沖卵,質(zhì)量檢查、培養(yǎng),胚胎移植,妊娠檢查,分娩（胚胎移植的犢牛）,胚胎移植的基本程序：,同期發(fā)情技術(shù)：主要是借助外源激素剌激卵巢，使其按照預(yù)定的要求發(fā)生變化，使處