無菌檢測方法

1、.四川樂至貴均衛(wèi)生材料有限公司醫(yī)療器械產(chǎn)品無菌檢測方法1. 目的建立無菌檢測標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程，對滅菌后的醫(yī)療器械產(chǎn)品進(jìn)行無菌檢測，以確定滅菌的有效性。2. 范圍本規(guī)程適用于本公司對醫(yī)療器械產(chǎn)品的無菌檢測。3. 依據(jù)中國藥典2015版4. 設(shè)備、器皿、藥品的準(zhǔn)備4.1 設(shè)備的準(zhǔn)備電子天平、干熱滅菌箱、高壓滅菌箱、潔凈工作臺、放大鏡、移液槍、電熱培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、冰箱、斜口鉗、接種環(huán)、酒精燈4.2 器皿的準(zhǔn)備錐心瓶（500ml）、燒杯（1000ml）、試劑瓶（60ml）、量筒（50ml、1000ml）、培養(yǎng)皿（90mm15mm）、斜口鉗、玻璃棒。4.3 藥品的準(zhǔn)備硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)

2、基、純化水、pH7.0 無菌氯化鈉溶液。5. 器皿的清洗 將所需的錐形瓶、燒杯、試劑瓶、培養(yǎng)皿、玻璃棒放入超聲波清洗機(jī)中用純化水清洗兩次，每次15分鐘，將清洗完的器皿在180條件下進(jìn)行干熱滅菌2小時(shí)。6. 取樣 按滅菌批次或者生產(chǎn)批次進(jìn)行取樣，隨機(jī)抽取同一型號的產(chǎn)品4件作無菌檢測樣品7. 培養(yǎng)基的制備7.1 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的制備取15g硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和1000ml純化水于燒杯中混合，加熱至微沸（注意加熱過程中要不斷地?cái)嚢?，使其混合均勻）用棉花塞塞緊復(fù)用無塵布和繩子綁好后轉(zhuǎn)移至高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌，滅菌溫度為121，滅菌時(shí)間30分鐘。滅菌后搖均，冷卻至45待用。7.2 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)

3、基的制備取15g胰酪大豆胨和1000ml純化水于燒杯中混合，操作方法同6.1。8. 培養(yǎng)基靈敏度檢查8.1 菌種的要求培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株（金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌）傳代次數(shù)不得超過5代。8.2 菌液的制備 接種金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基上，30-35培養(yǎng)24小時(shí)；接種枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基上，20-25培養(yǎng)24小時(shí)。將上述經(jīng)24小時(shí)培養(yǎng)后的培養(yǎng)物用0.9無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu(菌落形成單位)的菌懸液。制備好的菌液應(yīng)在2-8條件下保存，并在24小時(shí)內(nèi)使用。8.3 接種及培養(yǎng) 取每管裝量15ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)

4、基3支，其中2支接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌，另一支不接種作為空白對照，30-35培養(yǎng)3天逐日觀察并記錄。 取每管裝量10ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基3支，其中2支接種小于100cfu的枯草芽孢桿菌，另1支不接種作為空白對照，20-25培養(yǎng)5天，逐日觀察記錄。8.4 靈敏度檢測結(jié)果判斷 空白對照管應(yīng)無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基試管菌落均生長良好，則判定該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。9. 供試品的無菌檢測9.1 對照試驗(yàn) 取每管裝量15ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基3支，接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌，另一支不接種作為空白對照，30-35培養(yǎng)14天逐日觀察并記錄。取每管裝量10ml的胰酪大豆

5、胨液體培養(yǎng)基3支，其中2支接種小于100cfu的枯草芽孢桿菌，另1支不接種作為空白對照，20-25培養(yǎng)14天，逐日觀察記錄。 9.2 供試品的準(zhǔn)備及接種于微生物實(shí)驗(yàn)室超凈工作臺內(nèi)將樣品剪成小碎段（23cm）,其中2件接種于各培養(yǎng)皿足以浸沒供試品的適量硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，另外2件接種于各培養(yǎng)皿足以浸沒供試品的適量胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，冷卻。9.2 培養(yǎng) 將接種過的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿倒置于電熱培養(yǎng)箱中3035條件下培養(yǎng)14天，逐日觀察是否有菌落生長并記錄； 將接種過的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿倒置于霉菌培養(yǎng)箱中2025條件下培養(yǎng)14天，逐日觀察是否有菌落生長并記錄。10. 供試品

6、無菌檢測結(jié)果判定 若上述接種后的培養(yǎng)基經(jīng)14天培養(yǎng)后均無菌落生長，則可判定供試液為無菌，即為合格；反之，則為不合格。11. 無菌檢測報(bào)告（見附表1）.無菌檢測報(bào)告檢測依據(jù)中國藥典2015版 檢測日期樣品數(shù)量樣品批號樣品名稱樣品規(guī)格培養(yǎng)基的靈敏度檢測硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（培養(yǎng)3天）胰酪大豆胨培養(yǎng)基（培養(yǎng)5天）培養(yǎng)天數(shù)接種金黃色葡萄球菌接種金黃色葡萄球菌空白接種枯草芽孢桿菌接種枯草芽孢桿菌空白12345結(jié)論： 日期： 供試品的無菌檢測培養(yǎng)天數(shù)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（培養(yǎng)14天）改良馬丁培養(yǎng)基（培養(yǎng)14天）金黃色葡萄球菌樣品1樣品2空白白色念珠菌樣品3樣品4空白1234567891011121314結(jié)論： 報(bào)告日期： 備注“+”表示有菌生長；“-”表示無菌生長；培養(yǎng)基的靈敏度檢測中空白試驗(yàn)應(yīng)無菌生