控制菌檢查法

1、控制菌檢查控制菌檢查用的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適應(yīng)性檢查，成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按培養(yǎng)基處方配置的培養(yǎng)基均應(yīng)檢查。菌種 試驗(yàn)用菌種的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代（從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。大腸埃希菌（Escherichia coli）CMCC(B)44102或CVCC1570金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）CMCC(B)26003或CVCC1882乙型副傷寒沙門(mén)菌（Salmonella paratyphiB）CMCC(B)50094銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）C

2、MCC(B)10104生孢梭菌（Clostridium sporogenes）CMCC(B)64941白色念珠球菌（canidia albicans）CMCC(F)98001菌液制備 接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型副傷寒沙門(mén)菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)1824小時(shí)；接種白色念珠球菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)1824小時(shí)。用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為10100cfu的菌懸液。菌懸液在室溫下放置應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用，若保存在28可在24小時(shí)內(nèi)使用。適應(yīng)性檢查 控制

3、菌檢查用培養(yǎng)基的適應(yīng)性檢查項(xiàng)目包括促生長(zhǎng)能力、抑制能力及指示能力的檢查。表1 控制菌檢查用培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)能力、抑制能力及指示能力檢查控制菌檢查培養(yǎng)基特性試驗(yàn)菌株大腸埃希菌膽鹽乳糖培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌4-甲基傘形酮葡萄糖苷酸培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲基藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌大腸菌群乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲基藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌沙門(mén)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力乙型副傷寒沙門(mén)菌四硫磺酸鈉亮綠培

4、養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力乙型副傷寒沙門(mén)菌抑制能力金黃色葡萄球菌膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基或沙門(mén)、志賀菌屬瓊脂培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力乙型副傷寒沙門(mén)菌曙紅亞甲基藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力乙型副傷寒沙門(mén)菌三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基指示能力乙型副傷寒沙門(mén)菌控制菌檢查培養(yǎng)基特性試驗(yàn)菌株銅綠假單胞菌膽鹽乳糖培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力銅綠假單胞菌抑制能力金黃色葡萄球菌溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力銅綠假單胞菌抑制能力大腸埃希菌綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌亞碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力金黃色葡萄球菌抑制能力大腸埃希菌卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基或甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示

5、能力金黃色葡萄球菌抑制能力大腸埃希菌梭菌梭菌增菌培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力生孢梭菌哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力生孢梭菌白色念珠菌沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力白色念珠菌沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力白色念珠菌念珠菌顯色培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力白色念珠菌抑制能力大腸埃希菌1%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力白色念珠菌液體培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢查 分別接種不大于100cfu的試驗(yàn)菌（表1）于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)。與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好。固體培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢查 取試驗(yàn)菌各0.1ml（含菌數(shù)50100cf

6、u）分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。培養(yǎng)基抑制能力檢查 接種不少于100cfu的試驗(yàn)菌（表1）于被檢培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度計(jì)最長(zhǎng)時(shí)間下培養(yǎng)，試驗(yàn)菌應(yīng)不得生長(zhǎng)。固體培養(yǎng)基指示能力檢查 取試驗(yàn)菌各0.1ml（含菌數(shù)50100cfu）分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基上試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基一致。液體培養(yǎng)基指示能力檢查 分別接種不大于100cfu的試驗(yàn)菌（表1）于被檢

7、培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)。與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗(yàn)菌生長(zhǎng)情況、指示劑反應(yīng)等應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基一致。控制菌檢查方法的驗(yàn)證當(dāng)建立獸藥的微生物限度檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行控制菌檢查方法的驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該獸藥的控制菌檢查。若獸藥的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，檢查方法應(yīng)重新驗(yàn)證。驗(yàn)證時(shí)，依各品種項(xiàng)下微生物限度標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應(yīng)驗(yàn)證的菌株，驗(yàn)證大腸菌群檢查法時(shí)，采用大腸埃希菌作為驗(yàn)證菌株。驗(yàn)證試驗(yàn)按供試液的制備和控制菌檢查法的規(guī)定及下列要求進(jìn)行。菌種及菌液制備 同控制菌檢查用培養(yǎng)基的適應(yīng)性檢查。驗(yàn)證方法 取規(guī)定量供

8、試液及10100cfu試驗(yàn)菌加入增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查法進(jìn)行檢查。當(dāng)采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，取規(guī)定量供試液，過(guò)濾，沖洗，驗(yàn)證菌應(yīng)加在最后一次沖洗液中，過(guò)濾后，注入增菌培養(yǎng)基或取出濾膜接入增菌培養(yǎng)基中。結(jié)果判斷 若上述試驗(yàn)檢出試驗(yàn)菌，按此供試液制備法和控制菌檢查法進(jìn)行供試品的該控制菌檢查；若未檢出試驗(yàn)菌，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法、薄膜過(guò)濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。驗(yàn)證試驗(yàn)也可以與供試品的控制菌檢查同時(shí)進(jìn)行。供試品檢查 供試品的控制菌檢查應(yīng)按已驗(yàn)證的方法進(jìn)行。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn) 進(jìn)行供試品控制菌檢查時(shí)，應(yīng)做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的加菌量為10

9、100cfu，方法同供試品的控制菌檢查。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)檢出相應(yīng)的控制菌。陰性對(duì)照試驗(yàn) 取稀釋液10ml照相應(yīng)控制菌檢查法檢查，作為陰性對(duì)照。陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。（1）大腸埃希菌（Escherichia coli） 取供試液10ml（相當(dāng)于供試品1g、1ml或10cm2），直接或處理后接種至適量（不少于100ml）的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)1824小時(shí)，必要時(shí)可延長(zhǎng)至48小時(shí)。取上述培養(yǎng)物0.2ml，接種至含5mlMUG培養(yǎng)基的試管內(nèi)培養(yǎng)，于5小時(shí)、24小時(shí)在366nm紫外燈下觀察，同時(shí)用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對(duì)照。若管內(nèi)培養(yǎng)基呈現(xiàn)熒光，為MUG陽(yáng)性；不呈現(xiàn)熒光，為MUG陰性。觀察后，沿培養(yǎng)管

10、的管壁加入數(shù)滴靛基質(zhì)試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質(zhì)陽(yáng)性；呈試劑本色，為靛基質(zhì)陰性。本底對(duì)照應(yīng)為MUG陰性和靛基質(zhì)陰性。如MUG陽(yáng)性、靛基質(zhì)陽(yáng)性，判供試品檢出大腸埃希菌；如MUG陰性、靛基質(zhì)陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌；如MUG陽(yáng)性、靛基質(zhì)陰性，或MUG陰性、靛基質(zhì)陽(yáng)性，則應(yīng)取膽鹽乳糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)物劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)1824小時(shí)。表2 大腸埃希菌菌落形態(tài)特征培養(yǎng)基菌落形態(tài)曙紅亞甲藍(lán)瓊脂紫黑色、淺紫色、藍(lán)紫色或粉紅色，菌落中心呈深紫色或無(wú)明顯暗色中心，圓形，稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)，常有金屬光澤麥康凱瓊脂鮮桃紅色或微紅色，菌落中心呈深桃紅色，圓

11、形，扁平，邊緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)（2）大腸菌群（Coliform） 取含適量（不少于10ml）的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管3支，分別加入1：10的供試液1ml（含供試品0.1g或0.1ml）、1：100的供試液1ml（含供試品0.01g或0.01ml）、1:1000的供試液1ml（含供試品0.001g或0.001ml），另取1支乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管加入稀釋液1ml作為陰性對(duì)照管。培養(yǎng)1824小時(shí)。乳糖膽鹽發(fā)酵管若無(wú)菌生長(zhǎng)或有菌生長(zhǎng)但不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，判該管未檢出大腸菌群；若產(chǎn)酸產(chǎn)氣，應(yīng)將發(fā)酵管中的培養(yǎng)物分別劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)1824小時(shí)。若平板上無(wú)菌生長(zhǎng)，或生

12、長(zhǎng)的菌落與表3所列的菌落形態(tài)特征不符或?yàn)榉歉锾m陰性無(wú)芽孢桿菌，判該管未檢出大腸菌群；若平板上生長(zhǎng)的菌落與表3所列的菌落形態(tài)特征相符或疑似，且為革蘭陰性無(wú)芽孢桿菌，應(yīng)進(jìn)行確證試驗(yàn)。表3 大腸菌群菌落形態(tài)特征培養(yǎng)基菌落形態(tài)曙紅亞甲藍(lán)瓊脂紫黑色、紫紅色、紅色或粉紅色，圓形，扁平或稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)麥康凱瓊脂鮮桃紅色或粉紅色，圓形，扁平或稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)確證試驗(yàn) 從上述分離平板上挑選45各疑似菌落，分別接種于乳糖發(fā)酵管中，培養(yǎng)2448小時(shí)。若產(chǎn)酸產(chǎn)氣，判斷該乳糖膽鹽發(fā)酵管檢查大腸菌群，否則判未檢出大腸菌群。根據(jù)大腸菌群檢出的管數(shù)，按表4報(bào)告1g或1ml供試品中的大腸菌群數(shù)

13、。表4 可能的大腸菌群數(shù)表各供試品量的檢出結(jié)果可能的大腸菌群數(shù)（個(gè)或個(gè)）0.1g或0.1ml0.01g或0.01ml0.001g或0.001ml注：代表檢出大腸菌群；代表未檢出大腸菌群。（3）沙門(mén)菌（Salmonella） 取供試品或10ml，直接或處理后接種至適量（不少于200ml）的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，用勻漿儀或其他適宜的方法混勻，培養(yǎng)1824小時(shí)。取上述培養(yǎng)物1ml，接種于10ml四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基中，培養(yǎng)1824小時(shí)后，分別劃線接種于膽鹽硫乳瓊脂（或沙門(mén)、志賀菌屬瓊脂）培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂（或曙紅亞甲藍(lán)瓊脂）培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)1824小時(shí)（必要時(shí)延長(zhǎng)至4048小時(shí)）。若平板上無(wú)菌生長(zhǎng)或

14、生長(zhǎng)的菌落或不同于表5所列的特征，判斷供試品未檢出沙門(mén)菌。若平板上生長(zhǎng)的菌落與表5所列的菌落形態(tài)特征相符或疑似，用接種針挑選23各菌落分別于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基高層斜面上進(jìn)行斜面培養(yǎng)和高層穿刺培養(yǎng)接種，培養(yǎng)1824小時(shí)，如斜面未見(jiàn)紅色、底層未見(jiàn)黃色；或斜面黃色、底層無(wú)黑色，判供試品未檢出沙門(mén)菌。否則，應(yīng)取三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基斜面的培養(yǎng)物進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn)，確認(rèn)是否為沙門(mén)菌。表5 沙門(mén)菌菌落形態(tài)特征培養(yǎng)基菌落形態(tài)膽鹽硫乳瓊脂無(wú)色至淺橙色，半透明，菌落中心帶黑色或全部黑色或無(wú)黑色沙門(mén)、志賀菌屬瓊脂無(wú)色至淡紅色，半透明或不透明，菌落中心有時(shí)帶黑褐色曙紅亞甲藍(lán)瓊脂無(wú)色至淺橙色，透明或半透明，光滑濕潤(rùn)的圓形菌落

15、麥康凱瓊脂無(wú)色至淺橙色，透明或半透明，菌落中心有時(shí)為暗色（4）銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa） 取供試液10ml（相當(dāng)于供試品1g、1ml或10cm2），直接或處理后接種至適量（不少于100ml）的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)1824小時(shí)。取上述培養(yǎng)物，劃線接種于溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)1824小時(shí)。銅綠假單胞菌典型菌落呈扁平、無(wú)定形、周邊擴(kuò)散、表面濕潤(rùn)，灰白色，周?chē)鷷r(shí)有藍(lán)綠色素?cái)U(kuò)散。如平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出銅綠假單胞菌。如平板上生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似，應(yīng)挑選23個(gè)菌落，分別接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

16、斜面上，培養(yǎng)1824小時(shí)。取斜面培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭染色、鏡檢及氧化酶試驗(yàn)。氧化酶試驗(yàn) 取潔凈濾紙片置于平皿內(nèi)，用無(wú)菌玻棒取斜面培養(yǎng)物涂于濾紙片上，滴加新配制的1%二鹽酸二甲基對(duì)苯胺試液，在30秒內(nèi)若培養(yǎng)物呈粉紅色并逐漸變?yōu)樽霞t色為氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，否則為陰性。若斜面培養(yǎng)物為非革蘭陰性無(wú)芽孢桿菌或氧化酶試驗(yàn)陰性，均判供試品未檢出銅綠假單胞菌。否則，應(yīng)進(jìn)行綠膿菌素試驗(yàn)。綠膿菌素（Pyocyanin）試驗(yàn) 取斜面培養(yǎng)物接種于PDP瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)24小時(shí)，加三氯甲烷35ml至培養(yǎng)管中，攪碎培養(yǎng)基并充分振搖。靜置片刻，將三氯甲烷相移至另一試管中，加入1mol/L鹽酸溶液約1ml，振搖后，靜置片刻，觀察

17、。若鹽酸溶液呈粉紅色，為綠膿菌素試驗(yàn)陽(yáng)性，否則為陰性。同時(shí)用未接種的PDP培養(yǎng)基斜面同法做陰性對(duì)照，陰性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)呈陰性。若上述疑似菌為革蘭陰性桿菌、氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性及綠膿菌素試驗(yàn)陽(yáng)性，判供試品檢出銅綠假單胞菌。若上述疑似菌為革蘭陰性桿菌、氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性及綠膿菌素試驗(yàn)陰性，應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn)，確認(rèn)是否為銅綠假單胞菌。（5）金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus） 取供試液10ml（相當(dāng)于供試品1g、1ml或10cm2），直接或處理后接種至適量（不少于100ml）的亞碲酸鈉（鉀）肉湯（或營(yíng)養(yǎng)肉湯）培養(yǎng)基中，培養(yǎng)1824小時(shí)。必要時(shí)可延長(zhǎng)至48小時(shí)。取上述培養(yǎng)物，劃線接種于

18、卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基或甘露醇氯化鈉培瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)2472小時(shí)。若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落不同于表6所列特征，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。表6 金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)特征培養(yǎng)基菌落形態(tài)甘露醇氯化鈉培瓊脂金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有黃色環(huán)，菌落直徑0.71mm卵黃氯化鈉瓊脂金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有卵磷脂分解的乳濁圈，菌落直徑12mm若平板上生長(zhǎng)的菌落與表7 所列的菌落特征相符或疑似，應(yīng)挑選2 3 個(gè)菌落，分別接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)1824 小時(shí)。取營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭氏染色并接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)1824 小時(shí)，做血漿凝固酶試驗(yàn)。血漿凝固

19、酶試驗(yàn) 取滅菌小試管3 支，各加入血漿和無(wú)菌水混合液（1 : 1 ) 0.5ml ，再分別加入可疑菌株的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物（或由營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)物制備的濃菌懸液）0.5ml 、金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物（或由營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)物制備的濃菌懸液）0.5ml 、營(yíng)養(yǎng)肉湯或0.9無(wú)菌氯化鈉溶液0.5ml , 即為試驗(yàn)管、陽(yáng)性對(duì)照管和陰性對(duì)照管。將3 管同時(shí)培養(yǎng)，3 小時(shí)后開(kāi)始觀察直至24 小時(shí)。陰性對(duì)照管的血漿應(yīng)流動(dòng)自如，陽(yáng)性對(duì)照管血漿應(yīng)凝固，若試驗(yàn)管血漿凝固為血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性，否則為陰性。如陽(yáng)性對(duì)照管或陰性對(duì)照管不符合規(guī)定時(shí)，應(yīng)另制備血漿，重新試驗(yàn)。若上述疑似菌為非革蘭氏陽(yáng)性球菌、血漿凝

20、固酶試驗(yàn)陰性，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。( 6 )梭菌（Clostridium ） 取供試液10ml （相當(dāng)于供試品1g 、lml 、10cm2 ) 2 份，其中l(wèi) 份置80 保溫10 分鐘后迅速冷卻。上述2 份供試液直接或處理后分別接種至100ml 的梭菌增菌培養(yǎng)基中。置厭氧條件下培養(yǎng)48 小時(shí)。取上述每一培養(yǎng)物0.2ml ，分別涂抹接種于含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上，置厭氧條件下培養(yǎng)4872 小時(shí)。若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)，判供試品未檢出梭菌；若平板上有菌落生長(zhǎng)，應(yīng)挑選2 3 個(gè)菌落分別進(jìn)行革蘭氏染色和過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)。過(guò)氧化氫酶試驗(yàn) 取七述平板上的菌落，置潔凈玻片上，滴加3 過(guò)氧化氫

21、試液，若菌落表面有氣泡產(chǎn)生，為過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)陽(yáng)性，否則為陰性。若上述可疑菌落為革蘭氏陽(yáng)性梭菌，有或無(wú)卵圓形或球形的芽孢，過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)陰性，判供試品檢出梭菌，否則判供試品未檢出梭菌。（7）白色念珠菌（Candida albicans） 取供試液10ml （相當(dāng)于供試品1g 、lml 、l0cm2）直接或處理后接種至適量（不少于10Oml）的沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48 72 小時(shí)。取上述培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24 48 小時(shí)（必要時(shí)延長(zhǎng)至72 小時(shí)）。白色念珠菌在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落呈乳白色，偶見(jiàn)淡黃色，表面光滑有濃酵母氣味，培養(yǎng)時(shí)間稍久則菌落增大，顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺褶。若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征不符，判供試品未