分子生物學復習題(答案完善

1、答案完善版本，不要太愛我，我只是神一般的女子！第二章一、填空題1、由 DNA 和 組蛋白 組成的染色質(zhì)纖維細絲是許多核小體連成的念珠狀結(jié)構(gòu)。P302、 核小體的形成 是染色體中DNA壓縮的第一階段。P323、DNA的二級結(jié)構(gòu)分兩大類：一類是 右手螺旋，另一類是 左手螺旋。P374、如果DNA聚合酶把一個不正確的核苷酸加到3末端，一個含有3 5活性的獨立催化區(qū)會將這個錯配堿基切去。這個催化區(qū)成為 校正核酸外切酶 。5、 原核生物中有三種起始因子分別是 IF-1 、 IF2 和 IF-3 。P1376、 由于新合成的DNA分子中，都保留了原DNA的一條鏈因此叫半保留復制 p437、 復制時，雙鏈D

2、NA要解開成兩股鏈分別進行，所以，這個復制起始點呈現(xiàn)叉子的形式，被稱為復制叉.p438、 為了解釋DNA的等速復制現(xiàn)象，日本學者岡崎（okazaki）等提出了DNA的半不連續(xù)復制.p469、 兩條鏈均按5到3方向合成,一條鏈3末端的方向朝著復制叉前進的方向,可連續(xù)合成,稱前導鏈。P4610、 環(huán)狀DNA雙鏈的復制可分為型、滾環(huán)形 和 D型 幾種類型.p4711、 真核細胞的DNA聚合酶和細菌DNA聚合酶基本性質(zhì)相同，均以_dNTP_為底物，需要_Mg2+_激活，聚合時必須有 _模板鏈 和_3-OH末端_的引物鏈，鏈的延伸方向為53. (55頁) 12、 DNA聚合酶的的功能主要是 引物合成,即

3、能起始前導鏈和后導鏈的合成.（P55）13、 DNA復制的調(diào)控主要發(fā)生在 起始階段_ ,一旦開始復制,如果沒有意外的阻力,就可以一直復制下去直到完成.(P56)14、 質(zhì)粒DNA編碼兩個負調(diào)控因子_Rop蛋白_和反義RNA(RNA1),它們控制了起始DNA復制所必須的_引物合成_。(P56)15、 染色體的復制與_細胞分裂_一般是同步的，但復制與_細胞分裂_不直接偶聯(lián)。(P56)16、 轉(zhuǎn)座子分為兩大類:插入序列和復合型轉(zhuǎn)座子。（書P62）17、 轉(zhuǎn)座子存在于原核細胞和真核細胞內(nèi)。（書P63）18、 玉米細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)座子歸納為兩大類：自主性轉(zhuǎn)座子和非自主性轉(zhuǎn)座子。（書P64）19、 轉(zhuǎn)座作用可被

4、分為復制型和非復制型兩大類。（書P65）20、 插入序列是最簡單的轉(zhuǎn)座子，它不含有任何宿主基因。（書P62）21、 SOS反應(yīng)廣泛存在于原核和真核生物中，主要包括兩個方面：DNA的修復；產(chǎn)生變異。P622、 名詞解釋C值反常現(xiàn)象：指C值往往與種系進化的復雜程度不一致，某些低等生物卻有較大的C值p29端粒：是真核生物線性基因組DNA末端的一種特殊結(jié)構(gòu)，它是一段DNA序列和蛋白質(zhì)形成的復合體.p33DNA變性與復性：當DNA溶液溫度接近沸點或者pH較高時，互補的兩條鏈就可能分開，稱為DNA的變性：但DNA雙鏈的這種變性過程是可逆的，當變性DNA的溶液緩慢降溫時，DNA的互補鏈又可重新聚合，重新形成

5、規(guī)則的雙螺旋。p40增色效應(yīng)：當DNA溶液溫度升高到接近水的沸點時，260nm的吸光度明顯增加。p40復制子：一般把生物體內(nèi)能獨立進行復制的單位稱為復制子。p43復制起始點：復制子中控制復制起始的位點稱為復制起始點。p43染色體水平調(diào)控：決定不同染色體或同一染色體不同部位的復制子按一定順序在S期起始復制。P57DNA聚合酶:是一種天然產(chǎn)生的能催化DNA（包括RNA）的合成和修復的生物大分子。P53、P177AP位點：所有細胞中都帶有不同類型、能識別受損核酸位點的糖苷水解酶，它能特異性切除受損核苷酸上的N-糖苷鍵，在DNA鏈上形成去嘌呤或去嘧啶位點，統(tǒng)稱為AP位點。p59轉(zhuǎn)座子：存在于染色體DN

6、A上可自主復制和位移的基本單位（P62）復合型轉(zhuǎn)座子：是一類帶有某些抗藥性基因（或其他宿主基因）的轉(zhuǎn)座子，其兩翼往往是兩個相同或高度同源的IS，表明IS插入到某個功能基因兩端時就可能產(chǎn)生復合型轉(zhuǎn)座子。(P62)SNP：即單核苷酸多態(tài)性，指基因組DNA序列中由于單個核苷酸（A、T、C和G）的突變而引起的多態(tài)性。p66三、簡答題1. 染色體具備哪些作為遺傳物質(zhì)的特征？答：分子結(jié)構(gòu)相對穩(wěn)定能夠自我復制，使親子代之間保持連續(xù)性能夠指導蛋白質(zhì)合成，從而控制整個生命過程能夠產(chǎn)生可遺傳的變異P252. 什么是核小體？簡述其形成過程：P31-P32答：核小體是染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位，由200bpDNA和組蛋白八

7、聚體組成。形成過程：核小體是由H2A、H2B、H3、H4各兩個分子生成的八聚體和由大約200bp的DNA組成的。形成核小體時八聚體在中間，DNA分子盤繞在外組成真核細胞染色體的一種重復珠狀結(jié)構(gòu)。3. 簡述組蛋白都有哪些類型的修飾，其功能分別是什么？答：類型：甲基化、乙?；?、磷酸化、泛素化及ADP核糖基化。功能：1.甲基化：不同程度的甲基化極大地增加了組蛋白修飾和調(diào)節(jié)基因表達的復雜性，組蛋白的甲基化與基因激活和與基因沉默相關(guān)，與其他相比其修飾較為穩(wěn)定。2. 乙?；阂阴；揎椨绊懭旧|(zhì)結(jié)構(gòu)和基因活化，高乙酰化水平會使轉(zhuǎn)錄活化；低乙?；瘎t抑制轉(zhuǎn)錄，組蛋白的乙?；腿ヒ阴；揎椷€參與DNA修復、拼接

8、、復制，染色體的組裝，以及細胞的信號轉(zhuǎn)導，與疾病的形成密切相關(guān)。P284. 簡述DNA的一、二、三級結(jié)構(gòu)：答：1，DNA的一級結(jié)構(gòu)，就是指4種核苷酸的連接及排列順序，表示了該DNA分子的化學成分；2，DNA的二級結(jié)構(gòu)是指兩條多核苷酸鏈反向平行盤繞所形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)；3，DNA的高級結(jié)構(gòu)是指DNA雙螺旋進一步扭曲盤繞所形成的更復雜的特定空間結(jié)構(gòu)。p35-p415. DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型是有誰提出的？簡述其發(fā)現(xiàn)的主要實驗依據(jù)及其在分子生物學發(fā)展中的重要意義。P35P37答：由Waston和Crick提出。意義：為合理地解釋遺傳物質(zhì)的各種功能，解釋生物的遺傳和變異，解釋自然界千變?nèi)f化的生命現(xiàn)象奠定了

9、理論基礎(chǔ)。6. 解釋在DNA復制過程中，后隨鏈是怎樣合成的。P46 答：后隨鏈在合成過程中，一段親本DNA單鏈首先暴露出來，然后以與復制叉移動相反的方向按照53方向合成一系列的岡崎片段，然后再把它們連成完整的后隨鏈。7. 簡述DNA復制的調(diào)控P56答：原核細胞DNA的復制調(diào)控：細胞復制叉的多少決定了復制起始頻率的高低，DNA復制的調(diào)控主要發(fā)生在起始階段，一旦開始復制，如沒有意外阻力就可以一直復制下去直到完成。真核細胞的DNA的復制調(diào)控：分為3個水平：1.細胞生活周期水平調(diào)控，即限制點調(diào)控，決定細胞停留在G1期還是進入S期。2.染色體水平調(diào)控：決定不同染色體或同一染色體不同部位的復制子按一定順序

10、在S期起始復制。3.復制子水平調(diào)控：決定復制的起始與否。8. 真核生物DNA的特點P54答：1.基因組龐大；2.存在大量重復序列；3.大部分為非編碼序列；4.轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子；5.基因是斷裂基因，有內(nèi)含子結(jié)構(gòu)；6.存在大量的順式作用元件；7.存在大量的DNA多態(tài)性；8.具有端粒結(jié)構(gòu)。9.原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA的特征？P50-p54答：1。結(jié)構(gòu)簡練：原核DNA分子的絕大部分是用來編碼蛋白質(zhì)，只有非常小的一部分不轉(zhuǎn)錄，這與真核DNA的冗余現(xiàn)象不同。2,存在轉(zhuǎn)錄單元：原核生物DNA序列中功能相關(guān)的RNA和蛋白質(zhì)基因，往往叢集在基因組的一個或幾個特定部位，形成功能單元或轉(zhuǎn)錄單元，

11、它們可被一起轉(zhuǎn)錄為含多個mRNA的分子，稱為多順反子mRNA。3,有重疊基因：重疊基因，即同一段DNA能攜帶兩種不同蛋白質(zhì)信息。主要有以下幾種情況一個基因完全在另一個基因里面；部分重疊；兩個基因只有一個堿基對是重疊的。10.大腸桿菌中的DNA修復系統(tǒng)及其功能？p57答：1.錯配修復：恢復錯配；2.切除修復：切除突變的堿基和核苷酸片段；3.重組修復：復制后的修復，重新啟動停滯的復制叉；4.DNA直接修復：修復嘧啶二體或甲基化DNA；5.SOS系統(tǒng)：DNA的修復，導致變異。11.轉(zhuǎn)座子的類型：(P65)答：1）插入序列（IS）：最簡單的轉(zhuǎn)座子，不含任何宿主基因。2） 復合型轉(zhuǎn)座子：是一類帶有某些抗

12、藥性基因（或其他宿主基因）的轉(zhuǎn)座子，其兩翼往往是兩個相同或高度同源的IS，表明IS插入到某個功能基因兩端時就可能產(chǎn)生復合型轉(zhuǎn)座子。12.轉(zhuǎn)座子的遺傳效應(yīng)：(P65)答：1）轉(zhuǎn)座引起插入突變，導致結(jié)構(gòu)基因失活。 2）出現(xiàn)新的基因 ；3）染色體畸變；4）引起生物進化四、論述題1.談?wù)勗趶椭菩娃D(zhuǎn)座過程中，轉(zhuǎn)座和切離的關(guān)系。P65答：在復制轉(zhuǎn)座過程中，轉(zhuǎn)座和切離是兩個獨立事件。先是由轉(zhuǎn)座酶分別切割轉(zhuǎn)座子的供體和受體DNA分子。轉(zhuǎn)座子的末端與受體DNA分子連接，并將轉(zhuǎn)座子復制一份拷貝，由此生成的中間體即共整合體（cointegrat，）有轉(zhuǎn)座子的兩份拷貝。然后在轉(zhuǎn)座子的兩份拷貝間發(fā)生類似同源重組的反應(yīng)，

13、在解離酶的作用下，供體分子同受體分子分開，并且各帶一份轉(zhuǎn)座子拷貝。同時受體分子的靶位點序列也重復了一份拷貝。2.為什么說DNA的復制是半保留半不連續(xù)復制？P46答：半不連續(xù)復制是由于DNA雙螺旋的兩股單鏈是反向平行，一條鏈的走向為5-3,另一條鏈為3-5,DNA的兩條鏈都能作為模板以邊解鏈邊復制方式，同時合成兩條新的互補鏈。但是，所有已知DNA聚合酶的合成方向都是5-3，所以在復制是，一條鏈的合成方向和復制叉前進方向相同，可以連續(xù)復制，稱為前導鏈；另一條鏈的合成方向與復制叉前進方向相反，按5-3方向生成一系列岡崎片段，然后它們連接完整的鏈，這條鏈稱隨后鏈。因此就把前導鏈連續(xù)復制，后隨鏈不連續(xù)復

14、制的復制方式稱為半不連續(xù)復制。3. 原核生物和真核生物DNA復制的異同點(50-51)答：同：均遵從互補配對原則。異：真核生物每條染色質(zhì)上可以有多處復制起點，而原核生物只有一個起始點；真核生物的染色體在全部完成復制之前，各個起始點上DNA的復制不能再開始，而在快速生長的原核生物中，復制起始點上連續(xù)開始新的DNA復制，表現(xiàn)為雖只有一個復制單元，但可有多個復制叉。第三章一、填空題1、 轉(zhuǎn)錄的基本過程包括：模板的識別、轉(zhuǎn)錄起始、通過啟動子、轉(zhuǎn)錄的延伸和終止 p742、 大腸桿菌RNA聚合酶與啟動子的相互作用主要包括啟動子區(qū)的識別、酶與啟動子的結(jié)合以及因子的結(jié)合與解離。P853、 核酶分可分為剪切型核

15、酶和剪接型核酶兩大類。P1124、 RNA編輯具有重要的生物學意義，其中包括校正作用、調(diào)控翻譯和擴充遺傳信息。P1095、 基因轉(zhuǎn)錄實際上是RNA聚合酶、轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子和 啟動子區(qū) 各種調(diào)控元件相互作用的結(jié)果。6、.基因表達包括_ 轉(zhuǎn)錄_和_翻譯_兩個階段。P727、.大腸桿菌RNA聚合酶與啟動子的相互作用主要包括_啟動子區(qū)的識別_，_酶與啟動子的結(jié)合_和_因子的結(jié)合與解離_p858、RNA剪接主要有_pre-mRNA剪接_,_類自剪接內(nèi)含子_和_類自剪接內(nèi)含子 p1009、tRNA的3個加工過程 內(nèi)含子的剪接，3端添加CCA 和 核苷酸的修飾 p10010、.RNA編輯的生物學意義 校正作用，

16、調(diào)控翻譯和擴充遺傳信息 p10911、tRNA的種類有 起始tRNA、 延伸tRNA、 同工tRNA、 校正tRNA P12712、一般把生物體內(nèi)能獨立進行復制的單位稱為 復制子。P4313、核糖體 是指導蛋白質(zhì)合成的大分子機器。P12814、RNA既可作為 信息 分子又能作為 功能 分子發(fā)揮作用。P7415、PCR的基本反應(yīng)過程包括：變性、退火、鏈的延伸 三個階段。P17816. RNA含有核糖和嘧啶，通常是_單鏈線性_分子(P73)17.RNA既可作為信息分子又能作為 _功能_分子發(fā)揮作用。（P74)18.RNA轉(zhuǎn)錄的基本過程包括模板識別，轉(zhuǎn)錄起始、_通過啟動子_和_轉(zhuǎn)錄的延伸和終止_（P

17、74-P78）19.啟動子是基因轉(zhuǎn)錄起始所必需的一段DNA序列，是基因表達調(diào)控的 上游順式作用元件_之一(P74)20.大腸桿菌RNA聚合酶與啟動子的相互作用主要包括啟動子區(qū)的識別_酶與啟動子的結(jié)合_和因子的結(jié)合與解離_p8521：RNA既可作為信息分子又能作為（功能分子）發(fā)揮作用。P7422：（RNA聚合酶）是轉(zhuǎn)錄過程中最關(guān)鍵的酶。P8123：RNA轉(zhuǎn)錄的抑制劑根據(jù)其作用性質(zhì)的主要可分為兩大類，（DNA模板功能抑制劑）和（RNA聚合酶的抑制物）。P9224：根據(jù)（中心法則），DNA、RNA和蛋白質(zhì)之間存在著直接的線性關(guān)系。P10825：生物體內(nèi)主要有3種RNA：（mRNA、tRNA、rRNA

18、）。P7426、真核細胞都有明顯的核結(jié)構(gòu)，除了（ 性細胞 ）以外，真核細胞的染色體都是二倍體，而性細胞即生殖細胞的染色體數(shù)目是體細胞的一半，故稱為（單倍體）27、啟動子是基因轉(zhuǎn)錄起始所必需的一段（ DNA序列 ）p7428、細菌釋放因子有哪三種：（RF1、RF2、RF3）二、名詞解釋1、 核酶：是類具有催化功能RNA分子，通過催化靶位點RNA鏈中磷酸二酯鍵的斷裂，特異性地剪切底物RNA分子，從而阻斷基因的表達。P1102、 增強子：遠離轉(zhuǎn)錄起始點（130Kb）、決定基因的時間、空間特異性表達、增強啟動子轉(zhuǎn)錄活性的DNA序列，其發(fā)揮作用的方式通常與方向、距離無關(guān)。增強子也是有若干功能組件增強體組

19、成，是特異轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合DNA的核心序列。P893、編碼鏈：指DNA雙鏈中與mRNA序列相同的那條DNA鏈。4、模板識別：指RNA聚合酶與啟動子DNA雙鏈相互作用并與之結(jié)合的過程。P745、錯意突變：由于結(jié)構(gòu)基因中某個核苷酸的變化使一種氨基酸的密碼變成另一種氨基酸的密碼。P1276、信號肽：在起始密碼子后，有一段編碼疏水性氨基酸序列的RNA區(qū)域，這個氨基酸序列就被稱為信號肽。 P1517. 轉(zhuǎn)錄延伸：當RNA聚合酶催化新生的RNA鏈的長度達到910個核苷酸時，因子從轉(zhuǎn)錄復合物的RNA聚合酶全酶上脫落下來，RNA聚合酶離開啟動子，核心酶沿模板DNA鏈移動并使新生RNA鏈不斷伸長的過程。（P77）8

20、 轉(zhuǎn)錄終止：當RNA鏈延伸到轉(zhuǎn)錄終止位點時，RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯鍵，RNA-DNA雜合物分離，轉(zhuǎn)錄泡瓦解，DNA恢復成雙鏈狀態(tài)，而RNA聚合酶和RNA鏈都被從模板上釋放出來。(p78)9：轉(zhuǎn)錄：拷貝出一條與DNA鏈序列完全相同的RNA單鏈的過程，是基因表達的核心步驟。P7210：翻譯：以新生的mRNA為模板，把核苷酸三聯(lián)遺傳密碼子翻譯成氨基酸序列、合成多肽鏈的過程。P7211、DNA聚合酶：是一種天然產(chǎn)生的能催化DNA（包括RNA）的合成和修復的生物大分子。p5312、錯配修復：DNA在復制的過程中發(fā)生錯配，能識別新合成鏈中錯配并加以校正的系統(tǒng)。p58三、簡答題1、 試比較原核和真

21、核細胞的mRNA的異同。P93（1）真核生物mRNA的5端存在帽子結(jié)構(gòu)，絕大多數(shù)真核細胞生物mRNA還具有多（A）尾巴，原核一般沒有；（2）原核的mRNA可以編碼幾個多肽，真核只能編碼一個；（3）原核生物以AUG作為起始密碼，有時以GUG、UUG作為起始密碼，真核幾乎永遠以AUG作為起始密碼。（4）原核生物mRNA半衰期短，真核長。（5）原核生物以多順反子的形式存在，真核以單順反子的形式存在。2、簡述增強子的特點p89（1）遠距離效應(yīng)，一般位于上游-200bp處，但可增強遠處啟動子的轉(zhuǎn)錄，即使相距十多個千堿基對也能發(fā)揮作用。（2）無方向性，無論位于靶基因的上游、下游或內(nèi)部都可發(fā)揮增強轉(zhuǎn)錄的作用

22、。（3）順式調(diào)節(jié)，只調(diào)節(jié)位于同一染色體上的靶基因，而對其他染色體上的基因沒有作用。（4）無物種和基因的特異性，可以連接到異源基因上發(fā)揮作用。（5）具有組織特異性，SV40的增強子在3T3細胞中比多瘤病毒的增強子要弱，但在HeLa細胞中SV40的增強子比多瘤病毒的要強5倍。增強子的效應(yīng)需特定的蛋白質(zhì)因子參與。（6）有相位性，其作用和DNA的構(gòu)象有關(guān)。（7）有點增強子可以對外部信號產(chǎn)生反應(yīng)，如熱休克基因在高溫下才表達，某些增強子可以被固醇類激素所激活。3、簡述RNA的功能。如題64、簡述原核生物和真核生物mRNA的區(qū)別。 答：書本P93如題15、真核生物基因組的結(jié)構(gòu)特點主要有哪些？P33（1）真核

23、基因組龐大，一般都遠大于原核生物的基因組；（2）真核基因組存在大量的重復序列；（3）真核基因組的大部分為非編碼序列，占整個基因組序列的90%以上，該特點是真核生物與細菌和病毒之間最主要的區(qū)別；（4）真核基因組的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子；（5）真核基因是斷裂基因，有內(nèi)含子結(jié)構(gòu)；（6）真核基因組存在大量的順式作用元件，包括啟動子、增強子、沉默子等；（7）真核基因組中存在大量的DNA多態(tài)性；（8）真核基因組具有端粒結(jié)構(gòu)。6、RNA作為功能分子有哪些重要作用？ P74（1）作為細胞內(nèi)蛋白質(zhì)生物合成的主要參與者；（2）部分RNA可以作為核酶在細胞中催化一些重要的反應(yīng)，主要作用于初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的剪接加工；（3）參

24、與基因表達的調(diào)控，與生物的生長發(fā)育密切相關(guān)；（4）在某些病毒中，RNA是遺傳物質(zhì)。7、.RNA的結(jié)構(gòu)有哪些特點。P73 1.RNA含有核糖和嘧啶，通常是單鏈線性分子； 2.RNA鏈自身折疊形成局部雙螺旋； 3.RNA可折疊形成復雜的三級結(jié)構(gòu)。8、.簡述因子的作用。P82 答：因子的作用是負責模板鏈的選擇和轉(zhuǎn)錄的起始，它是酶的別構(gòu)效應(yīng)物，使酶專一性識別模板鏈上的啟動子。因子極大地提高RNA聚合酶對啟動子區(qū)DNA序列的親和力，還降低它對非專一位點的親和力。9：原核生物mRNA的特征。 p931，原核生物mRNA的半衰期短。2，許多原核生物的mRNA可能以多順反子的形式存在。3，原核生物mRNA的5

25、端無帽子結(jié)構(gòu)，3端沒有或只有較短的多(A)結(jié)構(gòu)。10：真核生物mRNA的特征。 p96 1,真核生物mRNA的5端存在帽子結(jié)構(gòu)。 2，絕大多數(shù)真核生物mRNA具有多(A)尾巴。11、 什么是編碼鏈？什么是模板鏈？ 答：與mRNA序列相同的那條DNA鏈稱為編碼鏈；另一條根據(jù)堿基互補配對元則指導mRNA合成的DNA鏈稱為模板鏈。12、試述PCR擴增的原理和步驟p177 答：原理：首先將雙鏈DNA分子在臨近沸點的溫度下加熱分離成兩條單鏈DNA為模板并利用反應(yīng)混合物中的四種脫氧核苷三磷酸合成新生的DNA互補鏈。 步驟：變性：雙鏈模板DNA分子在高溫下解開成長單鏈；退火：引物與模板DNA相結(jié)合；鏈的延伸

26、：新生鏈從引物退火結(jié)合位點開始并朝相反方向延伸。四、論述題1、大腸桿菌的終止子有哪兩大類？請分別介紹一下它們的結(jié)構(gòu)特點。P78（1）不依賴因子的終止子：終止位點上游一般存在一個富含GC堿基的二重對稱區(qū)， 由其轉(zhuǎn)錄的RNA容易形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)，導致RNA聚合酶的暫停，破壞DNA-RNA雜合 鏈的結(jié)構(gòu)。在終止位點前還有一段48個A組成的序列，對應(yīng)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的3端為寡聚U（poly U），該結(jié)構(gòu)特征導致了轉(zhuǎn)錄的終止。轉(zhuǎn)錄終止不依賴因子。 （2） 依賴因子的終止子：轉(zhuǎn)錄的RNA也有發(fā)卡結(jié)構(gòu)，但其后無poly（U）。形成 的發(fā)卡結(jié)構(gòu)較疏松，結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。轉(zhuǎn)錄終止需要因子的參與。與不依賴因 子的終止相同的是，終止

27、信號存在于新生RNA鏈，而非DNA鏈。2、大腸桿菌的終止子有哪兩類？請分別介紹它們的結(jié)構(gòu)特點？ 答：書本P78-79 如題13、試論述原核生物與真核生物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的比較。P93答：（1）只有一種RNA聚合酶參與所有類型的原核生物基因轉(zhuǎn)錄，而真核生物有3種以上的RNA聚合酶來負責不同類型的基因轉(zhuǎn)錄，合成不同類型的、在細胞核內(nèi)有不同定位的RNA。（2）轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物有差別。原核生物的初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物大多數(shù)是編碼序列，與蛋白質(zhì)的氨基酸序列呈線性關(guān)系；而真核生物的初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物很大，含有內(nèi)含子序列，成熟的mRNA只占初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的一小部分。（3）原核生物的初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物幾乎不需要剪接加工，就可直接作為成熟的mRNA進

28、一步行使翻譯模板的功能；真核生物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物需要經(jīng)過剪接、修飾等轉(zhuǎn)錄后加工成熟過程才能成為成熟的mRNA。（4）在原核生物細胞中，轉(zhuǎn)錄和翻譯不僅發(fā)生在同一個細胞空間里，而且這兩個過程幾乎是同步進行的，蛋白質(zhì)合成往往在mRNA剛開始轉(zhuǎn)錄時就被引發(fā)了。真核生物mRNA的合成和蛋白質(zhì)的合成則發(fā)生在不同的空間和時間范疇內(nèi)。4、.真核與原核生物基因轉(zhuǎn)錄有哪些差異？（p93-p100） 答：如簡答題9、10。5、RNA的種類和其生物學作用？p74 種類：mRNA、tRNA、rRNA 生物學作用作為信息分子：RNA擔負著貯藏及轉(zhuǎn)移遺傳信息的功能，起著遺傳信息由DNA到蛋白質(zhì)的中間傳遞體的核心作用。作為功能分子：

29、1、作為細胞內(nèi)蛋白質(zhì)生物合成的主要參與者2、部分RNA可以作為核酶在細胞中催化一些重要的反應(yīng)，主要作用于初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的剪接加工3、參與基因表達的調(diào)控，與生物的生長發(fā)育密切相關(guān)4、在某些病毒中，RNA是遺傳物質(zhì)6、核酶具有哪些結(jié)構(gòu)特點？根據(jù)其催化功能不同可分為那兩大類？其生物學意義是什么？p110 答：結(jié)構(gòu)特點：具有自我剪接能力的RNA大多數(shù)都能形成錘頭結(jié)構(gòu)，該二級結(jié)構(gòu)由3個莖構(gòu)成，莖區(qū)是由互補堿基構(gòu)成的局部雙鏈結(jié)構(gòu)，包圍著一個由1113個保守核苷酸構(gòu)成的催化中心。根據(jù)其催化功能不同可分為 剪切型核酶、剪接型核酶。生物學意義：核酶的發(fā)現(xiàn)是我們對RNA的重要功能又有了新的認識，為基因治療提供了新的

30、策略，為生命起源的研究提供新的思路。 第四章一、填空題1.翻譯從（起始密碼AUG）開始，沿著mRNA(5-3)的方向連續(xù)閱讀密碼子，直至（終止密碼）為止。P1162.一個密碼子由（ 3 ）個核苷酸組成，（ 4 ）核苷酸可組成（ 64 ）個密碼子。P1203.終止密碼子為（UAA）、（UAG）、（UGA）。 P1204.作為基因產(chǎn)物的蛋白質(zhì)是受（ 基因 ）控制的。 P1165.mRNA中有（ 4 ）種核苷酸，而蛋白質(zhì)中有（ 20 ）種氨基酸。 P1176tRNA為相應(yīng)氨基酸轉(zhuǎn)運到核糖體提供了 運送載體 ，所以它又被稱為第二遺傳密碼。P1237tRNA的種類有起始tRNA， 延伸tRNA ，同工t

31、RNA和校正tRNA；P127 8核糖體小亞基負責 對模板mRNA進行序列特異性識別 ，大亞基負責 攜帶氨基酸及tRNA的功能 P1349翻譯過程的肽鏈延長，也稱為核糖體循環(huán)。每次核糖體循環(huán)又分為三個步驟：進位、成肽 和 轉(zhuǎn)位 。（P139142）10、核糖體是由幾十種蛋白質(zhì)和幾種核糖體RNA組成的的 亞細胞顆粒P12811、蛋白質(zhì)的生物合成是以（ 氨基酸 ）作為原料，在（ 核糖體 ）中進行的生物過程。 （P135 第一段 氨基酸的活化）12、蛋白質(zhì)的生物合成包括（ 氨基酸活化 ）、肽鏈的起始，伸長，終止、以及（ 新合成多肽鏈的折疊與加工 ）。P134 第五段 蛋白質(zhì)合成的生物學機制13、（

32、tRNA ）與（ 相應(yīng)氨基酸 ）的結(jié)合是蛋白質(zhì)合成中的關(guān)鍵步驟。（P136 第一段）14、（ 抗生素 ）是蛋白質(zhì)生物合成的主要抑制劑。（P148 第三段 蛋白質(zhì)合成的抑制劑）15、肽鏈的終止密碼有（ UAA ）、（ UAG ）、（UGA ）（P143 第三段 肽鏈的終止）16若某個蛋白質(zhì)的合成和運轉(zhuǎn)是同時發(fā)生的，則屬于翻譯運轉(zhuǎn)同步機制。（P150 4.5）17若蛋白自從和糖體上釋放后才發(fā)生運轉(zhuǎn)，則屬于翻譯后運轉(zhuǎn)機制。（P150 4.5）18、?？康鞍准碊P是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的受體蛋白，它能夠與結(jié)合有信號序列的SRP牢牢地結(jié)合，使它在合成蛋白質(zhì)的核糖體?？康絻?nèi)質(zhì)網(wǎng)上來。（P153 4.5.1）19、

33、擁有前導肽的線粒體蛋白質(zhì)前體能夠跨膜運轉(zhuǎn)進入線粒體，在這一過程中前導肽被水解，前體轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓鞍祝ダ^續(xù)跨膜能力。（P155 4.5.2）20、葉綠體定位信號肽一般有兩個部分，第一部分決定該蛋白質(zhì)能否進入葉綠體基質(zhì)，第二部分決定該蛋白能否進入類囊體。（P155 4.5.2）21.泛素化修飾涉及（泛素激活酶E1）、（泛素結(jié)合酶E2）、（泛素連接酶E3）等3個酶的級聯(lián)反應(yīng)。（P159 4.6.1）22.蛋白質(zhì)的（SUMO化修飾）能夠阻止泛素化引起的蛋白質(zhì)降解。（P161 4.6.2圖4-41解釋）23.NEDDylation可能參與（細胞增殖分化）、（細胞發(fā)育）、（細胞周期）、（信號轉(zhuǎn)導）等重要

34、生命過程的調(diào)控。（P162 4.6.3）24.NEDD8參與NEDDylantion過程的關(guān)鍵位點是（賴氨酸殘基）。（P163 4.6.3）25.在真核生物中，蛋白質(zhì)的降解主要依賴與（泛素）。（P159 4.6.1）二、名詞解釋1、密碼子：mRNA上毎3個核苷酸翻譯成蛋白質(zhì)多肽鏈上的一個氨基酸，這3個核苷酸就稱為密碼，也叫三聯(lián)子密碼即密碼子。 P1162、簡并：由一種以上密碼子編碼同一個氨基酸的現(xiàn)象稱為簡并。P1213、同工tRNA：由于一種氨基酸可能有多個密碼子，因此有多個tRNA來識別這些密碼子，即多個tRNA代表一種氨基酸，我們將幾個代表相同氨基酸的tRNA稱為同工tRNA。P1274、

35、無義突變：在蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因中，一個核苷酸的改變可能使代表某個氨基酸的密碼子變成終止密碼子，使蛋白質(zhì)合成提前終止，合成無功能的或無意義的多肽，這種突變成為無義突變。P127 4.2.4.35、糖基化：是真核細胞蛋白質(zhì)的特征之一，大多數(shù)糖基化是由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的糖基化酶催化進行的。所有的分泌蛋白和膜蛋白幾乎都是糖基化蛋白質(zhì)。 P145 第四段 糖基化6、熱休克蛋白：一類應(yīng)激反應(yīng)性蛋白，包括HSP70、HSP40、GrpE三個家族，廣泛存在于原核細胞以及真核細胞中。三者協(xié)同作用，促使某些能自發(fā)折疊的蛋白質(zhì)正確折疊形成天然空間構(gòu)象。 P147 最后一段 熱休克蛋白7信號肽：絕大多數(shù)越膜蛋白的N端都具有長度

36、大約在13-36個殘基之間的以疏水氨基酸為主的N端信號序列稱為信號肽。（P151 4.5.1）8、信號識別顆粒（SRP）：是一種核糖核酸蛋白復合體，它的作用是識別信號序列，并將核糖體引導到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上。（P153 4.5.1）9、泛素化：泛素分子在泛素激活酶、結(jié)合酶、連接酶等的作用下，對靶蛋白就進行特異性修飾的過程。（P159 4.6.1）10、SUMO化修飾：把SUMO轉(zhuǎn)移到底物的賴氨酸殘基上，穩(wěn)定靶蛋白使其免受降解的過程。（P161 4.6.2）3、 簡答題1、遺傳密碼具有哪些性質(zhì)？ P119-P123答：連續(xù)性、簡并性、通用性、特殊性、密碼子與反密碼子相互作用。2、蛋白質(zhì)如何產(chǎn)生？P111

37、蛋白質(zhì)生物合成的主要過程？ P116答：1.蛋白質(zhì)由基因控制合成。 2.主要合成過程;翻譯起始：核糖體與mRNA結(jié)合并與氨基酰-tRNA生成起始復合物；肽鏈延伸：由于核糖體沿mRNA 5端向 3端移動，開始了從N端向C端的多肽合成，這就是蛋白質(zhì)合成過程中速度最快的階段；肽鏈的終止及釋放：核糖體從mRNA上解離，準備新一輪合成反應(yīng)。3、簡述真核細胞中翻譯終止的過程。參考P143 肽鏈的終止答：由于氨酰 tRNA 上沒有反密碼子能夠與三個終止密碼子互補配對，因此翻譯終止。終止并需要tRNA 的協(xié)助，此時沒有氨基酸能夠連接到位于 P 位點的肽酰 tRNA 上。釋放因子（eRF）有助于終止的發(fā)生，可能

38、使 tRNA 上的氨基酸 C 端不需要轉(zhuǎn)肽基和脫酰基而發(fā)生轉(zhuǎn)位。新生肽直接從 P 位點離開核糖體并進入細胞質(zhì)（細胞質(zhì)核糖體）或進入轉(zhuǎn)位酶通道（內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核糖體）。4、 區(qū)別 tRNA 和 mRNA 在翻譯中的作用。P116答：mRNA 是氨基酸裝配成多肽的模板。tRNA 一方面是識別特異氨基酸的接頭分子，另一方面又可以識別特異的 mRNA 密碼子。5、蛋白質(zhì)前體的加工主要內(nèi)容 P144 蛋白質(zhì)前體的加工N端fMet或Met的切除：N端的甲硫氨酸往往在多肽合成完畢之前被切除二硫鍵的形成：蛋白質(zhì)的二硫鍵是蛋白質(zhì)合成后，通過兩個半胱氨酸的氧化作用生成的，密碼子中沒有胱氨酸的密碼子。特定氨基酸的修飾：氨基

39、酸側(cè)鏈的修飾包括磷酸化、糖基化、甲基化、已基化、羥基化和羧基化等。切除新生肽鏈中的非功能片段：不少肽類激素和酶的前體都要經(jīng)過加工才能變成活性分子6、蛋白質(zhì)合成的過程P134-P135氨基酸的活化翻譯的起始肽鏈的延伸肽鏈的終止 肽鏈的折疊和加工7、信號肽的結(jié)構(gòu)特點是什么？（P151 4.5.1）1.一般帶有10-15個疏水氨基酸。2.常常在靠近該序列N-端疏水氨基酸區(qū)上游帶有1個或數(shù)個帶正電荷的氨基酸。3.在其C-末端靠近蛋白酶切割位點處常常帶有數(shù)個極性氨基酸，離切割位點最近的那個氨基酸往往帶有很短的側(cè)鏈(Ala或Gly)。8.前導肽一般具有什么特性？（P155 4.5.2）1.帶正電荷的堿性氨

40、基酸（特別是精氨酸）含量較為豐富，它們分散于不帶電荷的氨基酸序列之間；2.缺少帶負電荷的酸性氨基酸；3.羥基氨基酸（特別是絲氨酸）含量較高；4.有形成兩親（既有親水又有疏水部分）-螺旋結(jié)構(gòu)的能力。9、.泛素化修飾的作用？（P160 4.6.1）1.降解蛋白質(zhì)，2.參與多種生物功能的調(diào)控，在蛋白質(zhì)的定位、代謝、和降解中都起著重要作用，3.能參與細胞周期、增殖、凋亡、分化、轉(zhuǎn)移、基因表達、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號傳遞、損傷修復、炎癥免疫等幾乎一切生命活動調(diào)控。10、.SUMO化修飾的作用？P161-P162 4.6.2） 答：影響蛋白質(zhì)亞細胞定位，廣泛參與細胞內(nèi)蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用、DNA結(jié)合、信號轉(zhuǎn)導、

41、核質(zhì)轉(zhuǎn)運、轉(zhuǎn)錄因子激活等重要過程。四、論述題1、遺傳密碼有哪些特性？并回答各特點對生物具有哪些意義。 P119-P123答：連續(xù)性、簡并性、通用性、特殊性、密碼子與反密碼子相互作用。意義：連續(xù)性：密碼子間無間斷也無重復，即起始密碼子決定了所有隨后密碼子的位置；簡并性：減少變異對生物的影響；通用性：有助于我們研究生物的進化；特殊性：表明物種之間的特異性；密碼子與反密碼子的相互作用：搖擺假說，解釋了反密碼子中某些稀有成分的配對以及許多氨基酸有2個以上密碼子的問題。2、真核與原核核糖體的主要區(qū)別是什么？參考P128-P134答：真核細胞的大小亞基（即 40S 和 60S）均比原核細胞的（原核細胞為

42、30S 和50S）大。在兩種細胞的核糖體中，原核生物核糖體約由2/3的RNA及1/3的蛋白質(zhì)組成，真核生物核糖體中RNA占3/5，蛋白質(zhì)占2/5，rRNA 占了絕大部分體積，原核細胞的 RNA 含量則比真核細胞高。原核細胞核糖體有 E 位點便于脫酰 tRNA 的離開。3、試述蛋白質(zhì)是如何合成、加工并運輸?shù)侥康牡匦惺咕唧w功能的？P134-P164答：蛋白質(zhì)合成的過程：1.DNA轉(zhuǎn)錄形成信使RNA(mRNA),mRNA單鏈同時與多個核糖體結(jié)合，合成許多條肽鏈，肽鏈盤曲折疊形成復雜空間結(jié)構(gòu)，初步合成了蛋白質(zhì)。2. 接下來，進入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔后，還要經(jīng)過一些加工，如折疊、組裝、加上一些糖基團等，才能成為比較

43、成熟的蛋白質(zhì)，3. 然后，由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔膨大、出芽形成具膜的小泡，包裹著蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到高爾基體，把蛋白質(zhì)輸送到高爾基體腔內(nèi)，做進一步的加工。4. 接著，高爾基體邊緣突起形成小泡，把蛋白質(zhì)包裹在小泡里，運輸?shù)郊毎?，小泡與細胞膜融合，把蛋白質(zhì)釋放到細胞外。4、線粒體蛋白質(zhì)的跨膜運轉(zhuǎn)過程有什么特征？（P154 4.5.2）答：通過線粒體膜的蛋白質(zhì)是在合成以后再運轉(zhuǎn)的。這個過程有如下特征：通過線粒體膜的蛋白質(zhì)在運轉(zhuǎn)之前大多數(shù)以前體形式存在，它由成熟蛋白質(zhì)和N端延伸出的一段前導肽共同組成。蛋白質(zhì)通過線粒體內(nèi)膜的運轉(zhuǎn)是一種需能過程；蛋白質(zhì)通過線粒體膜運轉(zhuǎn)時，首先由外膜上的Tom受體復合蛋白識別與Hsp70或M

44、SF等分子伴侶相結(jié)合的待運轉(zhuǎn)多肽，通過Tom和Tim組成的膜通道進入線粒體內(nèi)腔。5、 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)對蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的影響？（P163 4.6.4）答：成熟蛋白N端的第一個氨基酸在蛋白質(zhì)的降解中有著舉足輕重的作用。當某個蛋白質(zhì)N端是甲硫氨酸、甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸和纈氨酸時，表現(xiàn)穩(wěn)定。N段是賴氨酸、精氨酸時，表現(xiàn)不穩(wěn)定，平均2-3min被降解。泛素調(diào)控的蛋白質(zhì)降解有重要的生理意義，不僅能夠清除錯誤蛋白質(zhì)，對細胞生長周期、DNA復制以及染色體結(jié)構(gòu)有重要調(diào)控作用。第五章一、填空題：1. 細菌轉(zhuǎn)化常用的方法有CaCl2法 和 電擊法 。P1752. 在一定的 電場強度 下，DNA分子的電泳的遷

45、移率取決于 核酸分子本身的大小 和 構(gòu)型 P1733. 電泳的速率與 電場強度 和 電泳分子本身所攜帶的凈電荷數(shù) 成正比。P1734. 凝膠濃度的高低影響凝膠介質(zhì)孔隙的大小，濃度 越高 ，孔隙 越小 ，其分辨能力就 越強 。P1735. CoLE1質(zhì)粒載體是松弛型復制控制的 多拷貝質(zhì)粒 。P1686. PCR反應(yīng)的原始材料是（模板DNA）出處：課本177頁7. DNA聚合酶是一種天然產(chǎn)生的能催化DNA的_合成_和_修復_的生物大分子。177頁8. 基因組中的某些區(qū)域中，CpG序列密度可達均值的5倍以上，成為鳥嘌呤和胞嘧啶的富集區(qū)，形成所謂的(CpG島）出處：課本181頁9. DNA甲基化的主要

46、形式有_5-甲基胞嘧啶_、_6-甲基腺嘌呤_和_7-甲基鳥嘌呤_181頁10. 由于PCR技術(shù)具有極高的敏感性，擴增產(chǎn)物總量的變異系數(shù)常常達到（10%-30%）178頁11. 細胞中總RNA包括（mRNA）（rRNA）（tRNA）（sRNA）P18512. 基因文庫必須具有一定的（代表性）和（隨機性）P18313. 目前實驗室常用的總RNA的抽屜方法是（異硫氰酸胍-苯酚抽提法）P18514. 構(gòu)建基因組文庫最常用的的方法是（噬菌體載體）和（限制性內(nèi)切核酸酶）部分消化法。P18415. RNA的濃度和純度可以通過測定其（OD260）和（OD280）來判斷。P18516. 基因文庫篩選的主要篩選方

47、法包括（核酸雜交法）、（PCR篩選法）和（免疫篩選法）。(p189)17. 可以用核酸雜交篩選法進行（重組噬菌斑）的篩選。（P189）18. 基因文庫的篩選是指通過某種特殊方法從（基因文庫）中鑒定出含有所需重組DNA分子的特定克隆的過程。（P189）19. 含有cDNA插入片段的重組噬菌粒只有經(jīng)過體外蛋白外殼包裝反應(yīng)，才能成為有（侵染）和（復制）能力的成熟噬菌體。（P188）20. 在cDNA合成的過程中，應(yīng)選用活性較高的（反轉(zhuǎn)錄酶）及（甲基化dCTP），cDNA兩端應(yīng)加上不同內(nèi)切酶所識別的接頭序列，保證所獲得雙鏈cDNA的方向性。（P187）21. RACE是一項在 已知 cDNA序列 的基

48、礎(chǔ)上克隆 5 端或 3 端缺失序列的技術(shù)。P19122. cDNA序列可來自序列 表達標簽 、 減法cDNA文庫 、差式顯示 和 基因文庫的篩選 。 P19123. Gateway 克隆技術(shù)主要包括 TOPO反應(yīng) 和 LR反應(yīng) 兩步。 P19324. 基因的圖位克隆法是分離 未知性狀目的基因 的一種好方法。 P19325. Gateway基因大規(guī)?？寺》ɡ?噬菌體 進行位點特異性DNA片段重組。P19326. 蛋白質(zhì)組學是_蛋白質(zhì)_和_基因組_研究在形式和內(nèi)容兩方面的組合。 P19627. 分離大量混合蛋白質(zhì)組分的最有效方法是_雙向電泳技術(shù)_，該方法依賴于蛋白質(zhì)的兩個重要特性，即_等電點_和

49、_相對分子質(zhì)量_。P19728. 現(xiàn)行的質(zhì)譜儀可分為三個連續(xù)的組成部分，即是_離子源_、_離子分離區(qū)_和_檢測器。P19829. 在DIGE技術(shù)中，_內(nèi)標_是所以實驗樣本的混合物。P198 30. 雙向凝膠的最大分辨率已經(jīng)達到每塊膠_10000_個蛋白點。 P197名詞解釋：1. 細菌轉(zhuǎn)化：指一種細菌菌株由于捕獲了來自供體菌株的DNA而導致性狀特征發(fā)生遺傳改變的過程。P1752. 感受態(tài)細胞：指經(jīng)過適當處理后容易接受外來DNA進入的細胞。P1753. DNA甲基化：指生物體在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸為甲基供體將甲基轉(zhuǎn)移到特定的堿基上的過程。出自課本181頁4. 同源測序：指

50、實驗中所挑取的克隆來源于同一個原始DNA模板分子，形成了完全相同的沒有代表性的甲基化模式。課本182頁5. 基因組文庫：基因組中所有DNA序列克隆的總匯被稱為基因組文庫。P1836. mRNA的純化：指將mRNA從總的RNA中分離，得到高純度的mRNA。P1867. 核酸雜交法：核酸雜交法以其廣泛的適用性和快速性成為基因文庫篩選中最常用的的方法之一，是用放射性標記的特異DNA探針進行高密度的菌落雜交篩選。（P189）8. 基因文庫：是指某一生物類型的全部基因的集合。P1899. 克?。涸诩毎缴希寺∈侵赣赏粋€祖細胞分裂而來的一群帶有完全相同遺傳物質(zhì)的子細胞；在分子生物學上，人們把外源DN

51、A插入具有復制能力的載體DNA中，使之得以永久保存和復制的這種過稱為克隆。P19010. RACE技術(shù)：是一項在 已知 cDNA序列 的基礎(chǔ)上克隆 5端或 3端缺失序列的技術(shù)P19111. 內(nèi)標 ：在DIGE技術(shù)中所有實驗樣本的混合物。P19812. 雙向電泳 ：是分離大量混合蛋白組分的最有效方法，該方法依賴于蛋白質(zhì)的兩個重要特性，等電點和相對分子質(zhì)量。P197簡答題：1. pUC質(zhì)粒載體由哪幾部分組成？P168答：由四部分組成：來自pBR322質(zhì)粒的復制起點（ori）、氨芐青霉素抗性基因（ampr）、大腸桿菌-半乳糖酶基因（lacZ）啟動子、編碼-肽的DNA序列（lacZ基因）。2. 在凝膠

52、電泳中使用溴化乙錠的原因。P174答：將DNA分子凝膠浸泡在含溴化乙錠的溶液中，此種燃料會在一切可能的部位與DNA分子結(jié)合，然而卻不能與瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠相結(jié)合，因此只有DNA分子能吸收溴化乙錠并發(fā)出熒光，可靈敏而快捷地檢測出凝膠介質(zhì)中DNA的譜帶部位。3. 簡述重亞硫酸鹽測序的主要過程。（課本182頁）答：將待測DNA樣品用限制性內(nèi)切核酸酶處理，重亞硫酸鹽處理使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶發(fā)生脫氨基作用轉(zhuǎn)變成尿嘧啶，而被甲基化的胞嘧啶由于甲基的保護而不受影響，PCR擴增后該尿嘧啶被測序儀讀取為胸腺嘧啶。4. 在動物細胞中，DNA的甲基化狀態(tài)有三種，分別是？（出自課本181頁）答：1.

53、持續(xù)低甲基化狀態(tài)；2.去甲基化狀態(tài)；3.高度甲基化狀。5. 簡述在基因組文庫中通常提高文庫代表性的兩種策略。P183答：1.用機械切割法或限制性內(nèi)切核酸酶切割法隨機斷裂DNA，以保證克隆的隨機性；2.增加文庫重組克隆的數(shù)目，以提高覆蓋基因組的倍數(shù)。6. 簡述RNA基本操作技術(shù)。P185答：1.總RNA的提取；2.mRNA的純化；3.cDNA的合成；4.cDNA文庫的構(gòu)建；5.基因文庫的篩選。7. 在cDNA合成過程中加入的甲基化dCTP的作用是什么？（P187）答：反應(yīng)體系中一般加入甲基化dCTP，保證新合成的cDNA鏈被甲基化修飾，以防止構(gòu)建克隆時被限制性內(nèi)切核酸酶切割。8.如何提高用雜交篩

54、選法進行重組噬菌斑的篩選的結(jié)果的可靠性？（P189）答：將硝酸纖維素膜覆蓋在瓊脂平板表面，使之與噬菌斑直接接觸，噬菌斑中大量沒有被包裝的游離DNA及噬菌體顆粒便一起轉(zhuǎn)移到膜上?？蓮耐皇删咂桨迳线B續(xù)印幾張同樣的硝酸纖維素膜，進行重復實驗，而且可以使用兩種或數(shù)種不同的探針篩選同一套重組子，提高結(jié)果的可靠性。9.說說cDNA差異分析法的原理？P192答：發(fā)揮了PCR以指數(shù)形式擴增雙鏈DNA模板，而僅以線性形式擴增單鏈模板的特性，通過降低cDNA群體負責性和更換cDNA兩端接頭等方式，特異性擴增目的基因片段。10. cDNA末端快速擴增法的主要操作步驟？P191答：1.獲得高質(zhì)量總RNA：含有大量

55、完整mRNA、tRNA、rRNA和部分不完整mRNA；2. 去磷酸化作用：帶帽子結(jié)構(gòu)的mRNA不受影響；3. 去掉mRNA的5帽子結(jié)構(gòu)，加特異性RNA寡聚接頭并用RNA連接酶連接；4. 以特異性寡dT為引物，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，反轉(zhuǎn)錄合成第一條cDNA鏈，包含了寡接頭的互補序列；5. 分別以第一鏈cDNA為模板進行RACE反應(yīng)；6. 將純化的PCR產(chǎn)物克隆到載體DNA中，進行序列分析。11.簡述雙向電泳技術(shù)的原理。 P197答：該方法依賴于蛋白質(zhì)的兩個重要特性：等電點和相對分子質(zhì)量，蛋白質(zhì)在SDS凝膠電場中的運動速率和距離完全取決于其相對分子質(zhì)量而不受其所帶電荷的影響，不同相對分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)

56、將位于凝膠的不同區(qū)段而得到分離。12.簡述蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析技術(shù)的步驟和原理。 P198答：原理：是通過電離源將蛋白質(zhì)分子轉(zhuǎn)化為離子，然后利用質(zhì)譜分析儀的電場、磁場將具有特定質(zhì)量與電荷比值（M/Z）的蛋白質(zhì)離子分離開來，經(jīng)過離子檢測器收集分離的離子，確定離子的M/Z值，分析鑒定未知蛋白。通常結(jié)合相應(yīng)的處理及其他技術(shù)，能夠比較準確、快速地鑒定蛋白質(zhì)。步驟：將感興趣的蛋白點回收后，進行胰蛋白酶膠內(nèi)酶解，收集酶解肽段。一級質(zhì)譜將蛋白酶降解后的肽段按照質(zhì)荷比以及強度進行分析，形成肽指紋圖譜（PMF）；二級質(zhì)譜是挑選一級質(zhì)譜中有代表性的母離子峰以誘導碰撞解離方式打碎，形成肽段碎片指紋圖譜（PFF）；然后一級PMF和二級PFF數(shù)據(jù)，進行數(shù)