分解纖維素的細菌(使用).ppt

1、培養(yǎng)基配方,溫故而知新,在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基,選擇培養(yǎng)基,1直接計數法： 最常用顯微鏡直接計數法,測定微生物數量的方法,2間接計數法： 最常用稀釋平板計數法,閱讀27頁基礎知識部分第一、二段，回答下列問題,1. 纖維素在生物圈的分布狀況,纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質。植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。其中棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產物,一、纖維素和纖維素酶,2.纖維素酶的組成及作用,纖維素酶是一種復合酶，一般認為它至少包括三種組分，即C1酶、 CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維

2、二糖分解成葡萄糖,3、纖維素的分解,能分解纖維素的微生物有各種細菌、真菌和少數放線菌,方法：濾紙崩潰法,4、纖維素酶活性的測定實驗,下列生物能分解纖維素的是（ ） 人 兔 牛 蘑菇 纖維桿菌,A、 B,C、 D,C,二、纖維素分解菌的篩選,1.纖維素分解菌的篩選方法,剛果紅染色法：這種方法能夠通過顏色反應直接對微生物進行篩選,閱讀課本第28頁的相關部分，回答下列問題,2.纖維素分解菌的篩選方法的原理,剛果紅是一種染料，它可以與纖維素形成紅色復合物，但并不和纖維二糖、葡萄糖發(fā)生這種反應。當纖維素被纖維素酶分解后剛果紅纖維素的復合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出 現以纖維素分解為中心的 透明圈。這樣我們

3、可以通 過是否產生透明圈來篩選 纖維素分解菌,練一練,1.下列關于纖維素酶的說法，錯誤的是,A. 纖維素酶是一種復合酶，至少包括三種 B. 纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖 C. 纖維素酶可用于去掉植物的細胞壁 D. 葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖,練一練,1.下列關于纖維素酶的說法，錯誤的是,A. 纖維素酶是一種復合酶，至少包括三種 B. 纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖 C. 纖維素酶可用于去掉植物的細胞壁 D. 葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖,2.利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解菌，下列說法錯誤的是,A. 剛果紅能與纖維素形成紅色復合物 B. 剛果紅能與纖維二糖形成紅色復合物 C. 剛果

4、紅不能與葡萄糖形成紅色復合物 D. 若培養(yǎng)基上產生了透明圈，則說明已篩選出了纖維素分解菌,三、實驗操作,土壤取樣,選擇培養(yǎng),梯度稀釋,將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上,挑選產生透明圈的菌落,土壤取樣,取樣環(huán)境,富含纖維素的環(huán)境中,由于生物與環(huán)境的相互依存關系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境,原因,土壤取樣,實例：樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等,討論:如果找不到合適的環(huán)境，可將濾紙埋在土壤中，將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認為濾紙應埋進土壤中多深,將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對集中，實際上是人工設

5、置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應將濾紙埋于深約10cm左右的土壤中,1.選擇培養(yǎng)的目的,增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物,選擇培養(yǎng),參照課本29頁旁欄中的比例配置，回答下列問題,a.旁欄中的配方是液體培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基？為什么,b.這個培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用？如果具有，是如何進行選擇的,是液體培養(yǎng)基，原因是配方中無凝固劑,有選擇作用，本配方中的碳源是纖維素，所以能分解纖維素的微生物可以大量繁殖,2.制備選擇培養(yǎng)基,3.操作方法,將土樣加入裝有30ml選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下振蕩培養(yǎng)12天，直至培養(yǎng)液變渾濁。也可重復選擇

6、培養(yǎng),思考：為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物,在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用,梯度稀釋,按照課題1的稀釋操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進行等比稀釋，稀釋最大倍數到106,將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上,1. 制備培養(yǎng)基:參照旁欄中的比例 2. 涂布平板：將稀釋度為104106的菌懸液各取0.1ml涂布在培養(yǎng)基上，30倒置培養(yǎng),挑選產生透明圈的菌落,挑取產生明顯的透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。 接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在300C 370C培養(yǎng)，可獲得

7、純培養(yǎng),剛果紅染色法,方法一： 先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進行顏色反應,方法二： 在倒平板時就加入剛果紅,思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足,方法一缺點是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；優(yōu)點是這樣顯示出的顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用 方法二優(yōu)點是操作簡便，不存在菌落混雜問題 缺點一是由于培養(yǎng)基中還含有淀粉類物質，可以使能產生淀粉酶的微生物出現假陽性反應；缺點二有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅，形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分,實驗錄像,1.在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌，符合下列哪一生物學觀點？ A.生物結構與功能相適應的觀點B

8、.生物結構與功能整體性觀點 C.生物與環(huán)境相適應的觀點 D.生物發(fā)展進化的觀點,練一練,2.從土壤中分離獲得某種微生物的步驟是 土壤取樣梯度稀釋選擇培養(yǎng) 菌懸液涂布平板挑選出單個菌落 A. B. C. D,3. 有關選擇培養(yǎng)正確的敘述是,A. 可以增加纖維素分解菌的濃度 B. 可以減少纖維素分解菌的濃度 C. 所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基 D. 所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基,四、課題延伸,本課題對分解纖維素的微生物進行了初步的篩選，但是這只是分離純化的第一步。為確定得到的是纖維素分解菌，還需要進行發(fā)酵產纖維素酶的實驗，纖維素酶的測定方法一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產生的葡萄糖進行定量的測定,4鑒別

9、纖維素分解菌的培養(yǎng)基中碳源為（ ）A、CMC-Na B、木聚糖 C、纖維素 D、裂解酶,A,5剛果紅染色時，加入剛果紅應在（ ）（1）制備培養(yǎng)基時（2）梯度稀釋時 （3）倒平板時（4）涂布時 （5）長出菌落時A、（1）（3） B、（2）（5） C、（3）（5） D、（4）（5,C,6為以纖維素為唯一碳源篩選出真菌和細菌，試分析此類微生物在生態(tài)系統(tǒng)中的作用與下列哪種生物類似？（ ）A 硝化細菌 B、 藍藻 C、蚯蚓 D、兔子,C,7.有關平板劃線操作正確的是（ ）A.使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，操作過程中不再滅菌B.打開含菌種的試管需要通過火焰滅菌，取出菌種后需要馬上塞上棉塞C.將沾有菌種的接種

10、環(huán)迅速伸入平板內，劃三至五條平行線即可D.最后將平板倒置，放入恒溫箱中培養(yǎng),D,練一練,1、下列關于纖維素酶的說法，錯誤的是,A、纖維素酶是一種復合酶，至少包括三種 B、纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖 C、纖維素酶可用于去掉植物的細胞壁 D、葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖,2、利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解菌，下列說法錯誤的是,A、剛果紅能與纖維素形成紅色復合物 B、剛果紅能與纖維二糖形成紅色復合物 C、剛果紅不能與葡萄糖形成紅色復合物 D、若培養(yǎng)基上產生了透明圈，則說明已篩選出了纖維素分解菌,1、在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌，符合下列哪一生物學觀點？（ ） A、生物結構與功能相適應的觀點 B、生物結構與功能整體性觀點 C、生物與環(huán)境相適應的觀點 D、生物發(fā)展進化的觀點,C,A、可以增