幾種藥物對(duì)大腸桿菌的治療效果

1、幾種藥物對(duì)大腸桿菌的敏感性測(cè)定結(jié)果報(bào)告 幾種藥物對(duì)大腸桿菌的敏感性測(cè)定 摘要：大腸桿菌的抗原性復(fù)雜，毒力因子多種多樣，不同血清型、不同毒力因子菌株的宿主范圍和致病性大不相同，可在不同的動(dòng)物或在同種不同年齡的動(dòng)物中引起多種多樣的疾病。通過(guò)采用不同的抗菌藥物對(duì)雞大腸桿菌病進(jìn)行治療，結(jié)果表明，該菌對(duì)頭孢噻肟、慶大霉素、阿米卡星、氧氟沙星和卡那霉素敏感。【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹客ㄟ^(guò)檢測(cè)抑菌圈大小測(cè)定大腸桿菌對(duì)氟苯尼考、頭孢噻呋吶、硫酸新霉素可溶粉、氧氟沙星和卡那霉素幾種藥物的敏感程度?！緦?shí)驗(yàn)原理】紙片法藥敏試驗(yàn)是將抗菌藥物吸收到特定的紙片中，然后置于已接種待測(cè)定菌的固體培養(yǎng)基上，抗菌藥物通過(guò)向培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散，抑制

2、敏感細(xì)菌的生長(zhǎng)，從而出現(xiàn)抑菌環(huán)（帶）。由于藥物擴(kuò)散的距離越遠(yuǎn)，達(dá)到該距離的藥物濃度越低，故可以根據(jù)抑菌環(huán)的大小，判斷細(xì)菌對(duì)藥物的敏感度。通過(guò)藥物敏感試驗(yàn)，我們可以找出針對(duì)于某些致病菌的敏感藥物，從而對(duì)臨床中的細(xì)菌性疾病的治療提供指導(dǎo)。【實(shí)驗(yàn)材料】1、藥品及細(xì)菌氟苯尼考、頭孢噻呋吶、硫酸新霉素（桿菌凈）、氧氟沙星和卡那霉素等抗菌藥物，生理鹽水，磷酸鹽緩沖溶液，MH營(yíng)養(yǎng)肉湯，MH培養(yǎng)基，麥康凱培養(yǎng)基，蒸餾水，大腸桿菌2、器材紙片，試管，移液器，酒精燈，高壓蒸汽鍋，無(wú)菌操作臺(tái)，鑷子，剪刀，錐形瓶，烘箱，培養(yǎng)箱，天平，玻璃棒，干凈毛巾（報(bào)紙），炭筆，接種環(huán)，小廣口瓶【實(shí)驗(yàn)方法及內(nèi)容】1藥敏紙片的制作1

3、.1制備方法：取新華1號(hào)定性濾紙，用打孔機(jī)打成6毫米直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔干燥的小廣口瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎。經(jīng)15-20分鐘高壓消毒后，放在37溫箱或烘箱中數(shù)天，使完全干燥。1.2抗菌藥紙片制作：在上述含有50片紙片的小廣口瓶?jī)?nèi)加入藥液0.25毫升（因不好取材，故擴(kuò)大十倍配藥。），并翻動(dòng)紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動(dòng)紙片時(shí)不能將紙片搗爛。同時(shí)在瓶口上記錄藥物名稱，放37溫箱內(nèi)過(guò)夜，干燥后即密蓋，如有條件可真空干燥。切勿受潮，置陰暗干燥處存放，有效期3-6個(gè)月。 2藥液的制備（用于商品藥的試驗(yàn)）：按商品藥的使用治療量的比例配制藥液；如商品藥百病消按其說(shuō)明量治療量0.01

4、%飲水，可按這個(gè)比例配制藥液，可取10毫克加入10毫升的水中混勻。此稀釋液即為用于做藥敏試驗(yàn)的藥液。3.培養(yǎng)基的制備3.1普通肉湯的制備 蛋白胨 2g 杭州微生物試劑有限公司 牛肉膏 0.6g 成都長(zhǎng)壽生物利劑有限公司 Nacl 1g 成都市科龍化工試劑廠 水 200ml PH 7.4按上述要求稱取各種成分于三角瓶中，混合均勻，用NaOH調(diào)PH至7.4，調(diào)好PH后其瓶口用報(bào)紙封好，至于高壓蒸汽滅菌中滅菌30min。待冷卻后，倒于無(wú)菌平板中。冷凝后放置在無(wú)菌操作臺(tái)上備用。3.2普通瓊脂平板的制備 水解酪蛋白瓊脂（M-H瓊脂） 杭州微生物試劑有限公司 用法 稱取本品36g于1000ml蒸餾水中，加

5、熱溶解，經(jīng)12115min高壓滅菌，待冷至50左右，傾注無(wú)菌平板。 此次實(shí)驗(yàn)只需要配置200ml,稱取水解酪蛋白瓊脂7.2g于三角瓶中，往三角瓶中加入200ml蒸餾水即可。放入高壓蒸汽滅菌鍋里滅菌30min。待冷卻50左右，傾注無(wú)菌平板。4細(xì)菌的轉(zhuǎn)種、純化、活化培養(yǎng)（1） 在麥康凱培養(yǎng)基上用無(wú)菌接種環(huán)接種大腸桿菌（2） 用無(wú)菌接種環(huán)將細(xì)菌接種到MH培養(yǎng)基中（6個(gè)），保證細(xì)菌均勻的涂布在培養(yǎng)基中。注意無(wú)菌操作。（3） 將培養(yǎng)基置于37的恒溫箱中培養(yǎng)24h。4.藥敏片法操作方法4.1在“超凈臺(tái)”中，用經(jīng)（酒精燈）火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細(xì)菌培養(yǎng)物，以劃線方式將細(xì)菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式；用滅

6、菌接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在平皿邊緣相對(duì)四點(diǎn)涂菌，以每點(diǎn)開(kāi)始劃線涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點(diǎn)劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細(xì)菌均勻密布于平皿。（另：可挑取待試細(xì)菌于少量生理鹽水中制成細(xì)菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細(xì)菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密） 4.2將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。為了使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準(zhǔn)確的觀察結(jié)果，要求藥敏片能有規(guī)律的分布于平皿培養(yǎng)基上；一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若干片（外周一般可貼四片），每種藥敏片的名稱要記住。 4.3將平皿培養(yǎng)基置于37溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，觀察效

7、果。 附：1.結(jié)果判斷依據(jù)2. 所用藥品：A 桿菌凈泰 硫酸新霉素可溶粉 主要成分：硫酸新霉素 生產(chǎn)商：四川萊邦藥業(yè)有限公司 用法及用量：200g兌水600kgB 頭孢噻呋鈉 批號(hào)061202 生產(chǎn)商：浙江海正藥業(yè) 濃度：89.6%C 卡那霉素 用法及用量：禽類10g可混飲水500-1500kgD 氧氟沙星可溶粉 生產(chǎn)商：廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品有限公司動(dòng)物保健廠 用法及用量：禽類每1L水混飲2.5g，每日2次，連用3-5日E 氟苯尼考可溶粉 生產(chǎn)商：廣東養(yǎng)寶生物制藥有限公司 用法及用量：雞每1L水混飲100mg3.【注意事項(xiàng)】3.1培養(yǎng)基：應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)菌的營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行配制。傾注平板時(shí)，厚度合適（約

8、5-6mm），不可太薄，一般90mm直徑的培養(yǎng)皿，傾注培養(yǎng)基18-20ml為宜。培養(yǎng)基內(nèi)應(yīng)盡量避免有抗菌藥物的拮抗物質(zhì)，如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和對(duì)氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺藥和TMP的活性。 3.2細(xì)菌接種量：細(xì)菌接種量應(yīng)恒定，如太多，抑菌圈變小，能產(chǎn)酶的菌株更可破壞藥物的抗菌活性。 3.3藥物濃度：藥物的濃度和總量直接影響抑菌試驗(yàn)的結(jié)果，需精確配制。商品藥應(yīng)嚴(yán)格按照其推薦治療量配制。 3.4培養(yǎng)時(shí)間：一般培養(yǎng)溫度和時(shí)間為37 8-18小時(shí)，有些抗菌藥擴(kuò)散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的平板培養(yǎng)基，先置4冰箱內(nèi)24小時(shí)，使抗菌藥預(yù)擴(kuò)散，然后再放37溫箱中培養(yǎng)，可以推遲細(xì)菌的生長(zhǎng)?！緦?shí)驗(yàn)進(jìn)度】6.23 上午：稱量和制備藥液，藥敏片打孔、裝瓶、滅菌、干燥，稱量制備肉湯、普通、麥康凱、MH培養(yǎng)基并滅菌，實(shí)驗(yàn)用品和器具的滅菌處理。 下午：將藥液加入已干燥的藥敏小瓶，制備藥敏片。倒平板、接種細(xì)菌進(jìn)行復(fù)活擴(kuò)大培養(yǎng)。 6.24 倒MH平板、準(zhǔn)備大腸桿菌的純化培養(yǎng)。6.25 上午：大腸桿菌接種到MH培養(yǎng)基中，貼藥敏片。晚上：觀察藥敏片抑菌情況，測(cè)量并記錄抑菌圈大小?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】 抑菌環(huán)大?。╩m）藥名硫酸鋅霉素頭孢噻呋吶卡那霉素氧氟沙星氟苯尼考116.3824.0022.403