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1、1,實(shí)驗(yàn)三 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的大體解剖和主要臟器腺體識(shí)別,實(shí)驗(yàn)原理:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的大體解剖學(xué)是借助刀、剪、鋸等解剖器械,采用切割的方法,通過(guò)肉眼觀察來(lái)研究動(dòng)物體的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:大鼠的大體解剖和臟器腺體識(shí)別。,2,實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅赫莆沾笫蟠篌w解剖的順序、主要臟器腺體的解剖位置與形態(tài)特征及臟器指數(shù)的計(jì)算方法。 實(shí)驗(yàn)材料:解剖刀、剪、針、鑷子,開(kāi)顱器及白瓷盤(pán),麻醉劑;動(dòng)物每組雌性、雄性大鼠各一只。 注意點(diǎn):注意器械傷害學(xué)生。,3,實(shí)驗(yàn)操作: 1.將大鼠麻醉后放入白瓷盤(pán)中觀察其外形 觀察大鼠毛色及身體的頭、頸、軀干、四肢、腳、尾、鼻、口,口中有齒及齒式,雌性和雄性生殖器。,4,2.剖開(kāi)頭骨 用剪刀小心自
2、頭骨與頸柱相接的枕骨大孔,向眼窩和前方剪開(kāi)頭骨,剪刀不要插入太深,并盡可能的保持硬腦膜。然后再在額前橫剪,小心用鑷子取下頭蓋骨,可分別觀察硬腦膜。有血管分布的蛛網(wǎng)膜和腦表面的軟腦膜。小心將腦取出,由前向后分別為嗅球、大腦、間腦(大腦腹面)、中腦、小腦、延腦及脊髓。間腦下方的腦漏斗中為腦下垂體。在大腦腹面分布有12對(duì)腦神經(jīng)。,5,3.將大鼠腹面向上 拉直四肢用大頭針固定在木板上放入白瓷盤(pán)中。用鑷子輕輕提起腹部皮膚,在生殖和排泄孔的稍前方剪開(kāi)一裂口,從此處伸入剪刀,沿身體腹中線向前剖至下頜,再在前肢與后肢向兩側(cè)作橫剖。然后用鑷子夾住剖面邊緣,用刀背輕輕分離皮膚的同時(shí),可以觀察到頸淺淋巴結(jié)。,6,4
3、.剖開(kāi)頸部 鑷子提起胸骨舌骨肌并將其剪斷除去,暴露氣管及喉頭,可觀察喉,甲狀軟骨,環(huán)狀軟骨及氣管,在前4-5節(jié)氣管環(huán)左、右 偏腹側(cè)有粉紅色、三角形或菱形的甲狀腺。分離觀察左右頸動(dòng)脈、頸靜脈,下頜腺舌下腺。,7,5.剖開(kāi)胸腔 用鑷子提起胸部左側(cè)緣肌肉,向前剪至前肢基部(注意此處有粗大靜脈血管),用同樣方法剪斷胸部右側(cè)緣肌肉然后從胸廓的下角開(kāi)始,從兩側(cè)斜向前肢基部剪開(kāi)胸壁(剪斷肋骨)當(dāng)剪至第一、二、肋骨要小心,不要剪破血管,用剪刀把三角形的基部與膈分開(kāi),提起三角形的基部,可見(jiàn)縱膈將胸腔分為左右兩部,小心剝離胸骨下面的結(jié)締組織與肉色的脂肪狀胸腺(位于心臟前方),了解心臟,肺臟的結(jié)構(gòu)和位置。,8,6.
4、剖開(kāi)腹腔 用剪刀在腹正中線稍左側(cè)剪開(kāi)一小切口向前至胸骨劍突處,再沿肋骨后緣向兩側(cè)作橫切口,以暴露腹腔。觀察腹腔內(nèi)臟器官自然位置。膈前為胸腔,膈后為腹腔。肝臟,胃腸(賁門(mén)、幽門(mén)),脾臟,十二指腸,胰臟,腎臟(腎動(dòng)脈、腎靜脈),腎上腺,膀胱,精囊腺,前列腺,睪丸、附睪、輸精管,尿道球腺、輸精管腺,卵巢,輸卵管,雙子宮。,9,7.臟器稱(chēng)重 內(nèi)臟重量和體重之比(某個(gè)臟器濕重與單位體重的比值,常以每100g體重計(jì))稱(chēng)臟器指數(shù),臟器指數(shù)常能反映實(shí)驗(yàn)動(dòng)物總的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)和內(nèi)臟的病變情況,不同齡期動(dòng)物的臟器指數(shù)有一定的規(guī)律,如接觸處由物質(zhì)使某個(gè)臟器受到損害,臟器指數(shù)將發(fā)生變化。常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物臟器包括肝、脾、腎、心、
5、肺、腦、甲狀腺、腎上腺、腦垂體、眼球、睪丸、胰、胸腺。,10,一、尿液的采集 1. 用代謝籠采集尿液 代謝籠用于收集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自然排出的尿液,是一種特別設(shè)計(jì)的為采集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各種排泄物的密封式飼養(yǎng)籠,有的代謝籠除可收集尿液外,又可收集糞便和動(dòng)物呼出的CO2。一般簡(jiǎn)單的代謝籠主要用來(lái)收集尿液。放在代謝籠內(nèi)飼養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,可通過(guò)其特殊裝置收集尿液。,附: 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體液的采集,11,2. 導(dǎo)尿法收集尿液 施行導(dǎo)尿術(shù),較適宜于犬、猴等大動(dòng)物。一般不需要麻醉,導(dǎo)尿時(shí)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物仰臥固定,用甘油潤(rùn)滑導(dǎo)尿管。對(duì)雄性動(dòng)物,操作員用一只手握住陰莖,另一只手將陰莖包皮向上,暴露龜頭,使尿道口張開(kāi),將導(dǎo)尿管緩慢插入,導(dǎo)尿
6、管推進(jìn)到尿道球部時(shí)有抵抗感,此時(shí)注意動(dòng)作輕柔,繼續(xù)向膀胱推進(jìn)導(dǎo)尿管,即有尿液流出。雌性動(dòng)物尿道外口在陰道前庭,導(dǎo)尿時(shí)于陰道前庭腹側(cè)將導(dǎo)尿管插入陰道外口,其后操作同雄性動(dòng)物導(dǎo)尿術(shù)。 用導(dǎo)尿法導(dǎo)尿可采集到?jīng)]有污染的尿液。嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作,可收集到無(wú)菌尿液。,12,3. 輸尿管插管采集尿液 一般用于要求精確計(jì)量單位時(shí)間內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物排尿量的實(shí)驗(yàn)。剖腹后,將膀胱牽拉至腹腔外,暴露膀胱底兩側(cè)的輸尿管。在兩側(cè)輸尿管近膀胱處用線分別結(jié)扎,于輸尿管結(jié)扎處上方剪一小口,向腎臟方向分別插入充滿(mǎn)生理鹽水的插管,用線結(jié)扎固定插管,即可見(jiàn)尿液從插管滴出,可以收集。采尿過(guò)程中要用38熱生理鹽水紗布遮蓋切口及膀胱。,13,4.
7、 壓迫膀胱采集尿液 實(shí)驗(yàn)人員用手在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物下腹部加壓,手法既輕柔又有力。當(dāng)增加的壓力使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物膀胱括約肌松弛時(shí),尿液會(huì)自動(dòng)流出,即行收集。 5. 穿刺膀胱采集尿液 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉固定后,剪去下腹部恥骨聯(lián)合之上,腹正中線兩側(cè)的被毛,消毒后用注射針頭接注射器穿刺。取直角進(jìn)針,針頭穿過(guò)皮膚后稍微改變角度,以避免穿刺后漏尿,然后刺向膀胱方向,邊緩慢進(jìn)針邊回抽直到抽到尿液為止。,14,6. 剖腹采集尿液 按上述穿刺膀胱采集尿液法做術(shù)前準(zhǔn)備,其皮膚準(zhǔn)備范圍應(yīng)更大。剖腹暴露膀胱,直視下穿刺膀胱抽取尿液。也可于穿刺前用無(wú)齒鑷夾住部分膀胱壁,從鑷子下方的膀胱壁進(jìn)針抽尿。 7. 提鼠采集尿液 鼠類(lèi)被人抓住尾巴提起即
8、出現(xiàn)排尿反射,以小鼠的這種反射最明顯??梢岳眠@一反射收集尿液。當(dāng)鼠類(lèi)被提起尾巴排尿后,尿滴掛在尿道外口附近的被毛上,不會(huì)馬上流走,操作人員應(yīng)迅速用吸管或玻璃管接住尿滴。,15,二、腦脊液的采集 腦脊液可能通過(guò)脊髓腔穿刺法采集,小動(dòng)物也可通過(guò)枕骨大孔直接采集。 狗、免腦脊液的采集通常采取脊髓穿刺法:穿刺部位在兩髂連線中點(diǎn)稍下方第七腰椎間隙。動(dòng)物輕度麻醉后,側(cè)臥位固定,使頭部及尾部向腰部盡量屈曲,剪去第七腰椎周?chē)谋幻?。消毒后操作者在?dòng)物背部用左手拇、食指固定穿刺部位的皮膚,右手持腰穿刺針直刺入,當(dāng)有落空感及動(dòng)物 的后肢跳動(dòng)時(shí),表明針已達(dá)椎管內(nèi)(蛛網(wǎng)膜下腔),抽去針芯,即見(jiàn)腦脊液流出。如果無(wú)腦脊
9、液流出,可能是沒(méi)有刺破蛛網(wǎng)膜。輕輕調(diào)節(jié)進(jìn)針的方向及角度,如果腦脊液流的太快,插入針芯稍加阻塞,以免導(dǎo)致顱內(nèi)壓突然下降而形成腦疝。,16,大鼠腦脊液的采集可采用忱骨大孔直接穿刺法:在大鼠麻醉后,頭部固定于定向儀上。頭頸部剪毛、消毒,用手術(shù)刀沿縱軸切一縱行切口(約2cm)用剪刀鈍性分離頸部背側(cè)肌肉。為避免出血,最深層附著在骨上的肌肉用手術(shù)刀背刮開(kāi),暴露出枕骨大孔。由枕骨大孔進(jìn)針直接抽取腦脊液。抽取完畢縫好外層肌肉、皮膚。刀口處可撒些磺胺藥粉,防止感染。采完腦脊液后,應(yīng)注入等量的消毒生理鹽水,以保持原來(lái)腦脊髓腔里的壓力。,17,三、胸水的采集 主要采用胸腔穿刺法收集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胸水,也可處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物剖
10、開(kāi)胸腔采集胸水。 1. 穿刺點(diǎn)定位 于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腋后線第1112肋間隙穿刺,穿刺針緊貼肋骨上緣,否則容易損傷肋間神經(jīng)。也可在胸壁近胸骨左側(cè)緣第45肋間隙穿刺。 2. 穿刺方法 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取立位或半臥位固定,局部皮膚去毛、消毒、麻醉,穿刺針頭與注射器之間接三通連接裝置,實(shí)驗(yàn)人員以左手拇指、食指繃緊局部皮膚,右手握穿刺針緊靠肋骨下緣處垂直進(jìn)針,穿刺肋間肌時(shí)產(chǎn)生一定阻力,當(dāng)阻力消失有落空感時(shí),說(shuō)明已刺入胸膜腔,用左手固定穿刺針,打開(kāi)三通連接裝置,緩慢抽取胸水。,18,四、腹水的采集 動(dòng)物取自然站立位固定。穿刺部位在恥骨前緣與臍之間,腹中線兩側(cè)。剪毛、消毒,局部浸潤(rùn)麻醉。操作者左手拇、食指緊繃穿刺部位的皮
11、膚,右手控制穿刺深度做垂直穿刺。注意不可刺的太深,以免刺傷內(nèi)臟。穿刺針進(jìn)入腹腔后,腹水多時(shí)可見(jiàn)腹水因腹壓高而自動(dòng)流出。腹水少可輕輕回抽,并同時(shí)稍稍轉(zhuǎn)動(dòng)一下針頭,一旦有腹水流出,立即固定好針頭及注射器的位置連續(xù)抽吸。 抽腹水時(shí)注意不可速度太快,腹水多時(shí)不要一次大量抽出,以免因腹壓突然下降導(dǎo)致動(dòng)物出現(xiàn)循環(huán)功能障礙等問(wèn)題。,19,五、唾液的采集 1. 直接抽吸法 在急性實(shí)驗(yàn)中,可用吸管直接插入動(dòng)物口腔或唾液腺導(dǎo)管抽吸唾液。此法非常簡(jiǎn)單,但從口腔抽吸唾液會(huì)有雜質(zhì)混入。 2. 制備腮腺瘺法 在慢性實(shí)驗(yàn)中,收集狗的唾液,要用外科手術(shù)方法將腮腺導(dǎo)管開(kāi)口移向體外,即以腮腺導(dǎo)管開(kāi)口為中心,切成一直徑約23cm的
12、圓形粘膜片,將此粘膜片與周?chē)M織分開(kāi),穿過(guò)皮膚切口引到頰外,將帶有導(dǎo)管開(kāi)口的粘膜片與周?chē)钠つw縫合,腮腺分泌的唾液就流出頰外。這種方法可以收集到比較純凈的唾液。,20,六、胃液的采集 1. 直接收集胃液法 急性實(shí)驗(yàn)時(shí),先將動(dòng)物麻醉,如果是狗,可以用插胃管法收集胃液;如是大鼠,需手術(shù)剖腹,從幽門(mén)端向胃內(nèi)插入一塑料管,再由口腔經(jīng)食道將一塑料管插入前胃,用pH7.0、35左右的生理鹽水,以12ml/h的流速灌胃,收集流出液,進(jìn)行分析。 2. 制備胃瘺法 在慢性實(shí)驗(yàn)中,收集胃液多用胃瘺法,如全胃瘺法、巴氏小胃瘺法、海氏小胃瘺法等。制備小胃是將動(dòng)物的胃分離出一小部分,縫合起來(lái)形成小胃,主胃與小胃互不相通
13、,主胃進(jìn)行正常消化,從小胃可收集到純凈的胃液。應(yīng)用該法,可以待動(dòng)物恢復(fù)健康后,在動(dòng)物清醒狀態(tài)下反復(fù)采集胃液。,21,七、胰液和膽汁的采集 在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,主要是通過(guò)對(duì)胰總管和膽總管的插管而獲得胰液或膽汁。狗的胰總管開(kāi)口于十二指腸降部,在緊靠腸壁處切開(kāi)胰管,結(jié)扎固定并與導(dǎo)管相連,即可見(jiàn)無(wú)色的胰液流入導(dǎo)管。大鼠的胰管與膽管匯集于一個(gè)總管,在其入腸處插管固定,并在近肝門(mén)處結(jié)扎和另行插管,可分別收集到胰液和膽汁。有時(shí)也可通過(guò)制備胰瘺和膽囊瘺來(lái)獲得胰液和膽汁。,22,八、淋巴液的采集 淋巴液的采集比較困難,一般主要采集大動(dòng)物的淋巴液。常用的大量收集淋巴液的方法是解剖出胸導(dǎo)管后插管收集淋巴液。 以大鼠為例,
14、選擇180250g的雄性大鼠,麻醉、固定、消毒,從劍突起沿其左側(cè)肋緣向下外方作一長(zhǎng)約5cm的切口,再?gòu)膭ν幌蛳伦髡星虚_(kāi),暴露橫膈與腹主動(dòng)脈,胸導(dǎo)管緊貼在腹主動(dòng)脈的左后側(cè)。在胸導(dǎo)管上剪一斜口,將塑料插管的頂端插入,即可見(jiàn)乳白色的淋巴液流出。,23,九、陰道液的采集 1. 滴管沖洗法 用消毒滴管吸取少量生理鹽水仔細(xì)、反復(fù)沖洗被檢雌性動(dòng)物陰道,將沖洗液吸出滴在載玻片上晾干后染色鏡檢。也可直接將沖洗液置于低倍顯微鏡下觀察,根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型變化鑒別實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)情周期中的不同時(shí)期。 2. 擦拭法 用生理鹽水將消毒棉拭子濕潤(rùn)后,擠干棉拭子上的生理鹽水,輕輕插入雌性動(dòng)物陰道內(nèi),沿陰道內(nèi)壁擦拭、轉(zhuǎn)動(dòng),然后取出并作陰
15、道涂片,進(jìn)行鏡檢。,24,十、精液的采集 1.人工陰道套采精液法 本法適用于犬、豬、羊等大動(dòng)物,采用特制的人工陰道套套在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物陰莖上采集精液。采精時(shí),一手捏住陰道套,套住雄性動(dòng)物的陰莖,以完全套住雄性動(dòng)物的陰莖為佳,插入陰道套后,若實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)出低叫聲,表明已經(jīng)射精。此時(shí)可取下陰道套,拆下采精瓶,取出精液,迅速做有關(guān)檢查。 2.陰道栓采精法 本法是將陰道栓涂片染色,鏡檢凝固的精液。陰道栓是雄性大、小鼠的精液和雌性陰道分泌物混合,在雌鼠陰道內(nèi)凝結(jié)而成白色稍透明、圓錐形的栓狀物,一般交配后24小時(shí)即可在雌鼠陰道口形成,并可在陰道停留1224小時(shí)。 3.其他采精液法 用電流等物理方法刺激雄性動(dòng)物的陰
16、莖或其他性敏感區(qū),使雄性動(dòng)物被刺激發(fā)情,直至射精,用采精瓶采集射出的精液。,25,十一、前列腺液的采集 對(duì)體形較大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,可用手按摩雄性動(dòng)物前列腺部,使腺體分泌來(lái)采集前列腺液。 十二、乳汁的采集 1. 人工按摩法 用按摩擠奶收集乳汁的方法適合犬、豬、羊等大動(dòng)物乳汁的采集。選用哺乳期的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,早上采集乳汁量最多,用手指輕輕按摩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物乳頭,使乳汁自然流出,如乳汁不能自然流出,可張開(kāi)手掌從乳房基底部朝乳頭方向按摩、擠壓整個(gè)乳房,即可擠出乳汁。 2.吸奶器吸奶法 采用吸奶器吸在動(dòng)物乳頭上,造成負(fù)壓而使乳汁被動(dòng)吸出。,26,十三、骨髓的采集 采集骨髓一般選擇胸骨、肋骨、脛骨和股骨等造血功能活躍的骨
17、組織。猴、犬、羊等大動(dòng)物骨髓的采集用活體穿刺取骨髓的方法;大、小鼠等小動(dòng)物骨頭小難穿刺,只能剖殺后采胸骨、股骨的骨髓。 (一)猴、犬、羊等骨髓的采集 1. 骨髓穿刺點(diǎn)定位 (1)胸骨:穿刺部位在胸骨中線,胸骨體與胸骨柄連接處,或選胸骨上1/3部。 (2)脛骨:穿刺部位在脛骨內(nèi)側(cè),脛骨上端的下方1厘米處。 (3)肋骨:穿刺部位在第57肋骨各自的中點(diǎn)上。 (4)股骨:穿刺部位在股骨內(nèi)側(cè)面,靠下端的凹面處。,27,2. 骨髓穿刺方法 (1) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按要求固定,穿刺部位去毛、消毒、麻醉,要求局部麻醉范圍直達(dá)骨膜,也可作全麻。 (2) 操作人員帶消毒手套,確定穿刺點(diǎn),估計(jì)從皮膚到骨髓的距離并依此固定骨髓穿刺針長(zhǎng)度。左手拇、食指繃緊穿刺點(diǎn)周?chē)つw,
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