時(shí)間分辨培訓(xùn)ppt課件

1、時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)培 訓(xùn),1,問 題,時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)（TRF）定義。 TRF的標(biāo)記物及特點(diǎn)。 為什么叫“時(shí)間分辨”? TRF在免疫分析方法學(xué)中的地位。 各種免疫方法學(xué)的比較。,2,標(biāo)記免疫學(xué)發(fā)展歷程,放射免疫（精度：10-12mol/L ） 酶聯(lián)免疫（精度：10-9 mol/L ） 化學(xué)發(fā)光（精度：10-15mol/L ） 電化學(xué)發(fā)光（精度：10-17mol/L ） 時(shí)間分辨熒光（精度：10-18mol/L ） 生物芯片 （未知）,3,待測物質(zhì)濃度與檢測手段,臨床化學(xué)分析,pg/mL,ng/mL,mg/mL,mg/mL,g/L,免疫分析,Therapeutic Drugs (藥物濃

2、度),Thyroid Hormone (甲狀腺激素),Fertility Hormone (孕激素),Cancer Markers (腫瘤標(biāo)記物),Infectious Disease (傳染病),Vitamins (維生素),Serum Proteins (血清蛋白),10-12,10-9,10-6,10-3,10-0,4,各種免疫方法學(xué)的比較,5,放射性免疫分析法（RIA）,應(yīng)用 放免自60年代問世以來對(duì)臨床診斷起了革命性的貢獻(xiàn)，是一項(xiàng)較為成熟的診斷技術(shù)。 夾心法、競爭法的標(biāo)記原理為以后的檢測技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。,缺點(diǎn) 放射性（125I），對(duì)環(huán)境的污染及對(duì)身體的危害，已經(jīng)為重視環(huán)保的國家

3、逐步取消。（如整個(gè)歐洲僅尚存幾個(gè)放免試驗(yàn)室） 125I的半衰期短而導(dǎo)致其試劑有效期短。 標(biāo)記物125I的穩(wěn)定性差，導(dǎo)致試劑盒批間、批內(nèi)的變異較大；標(biāo)準(zhǔn)曲線有效期短，必須每次定標(biāo)，造成浪費(fèi)。 操作繁瑣，出報(bào)告時(shí)間長。 無法保存?zhèn)溆谩?6,酶免疫分析法（ELISA ）,應(yīng)用 酶免的最大優(yōu)勢在于避免了對(duì)環(huán)境和人體危害。 試劑有效期較長。 衍生技術(shù)： 熒光酶免疫分析 增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù) 曾經(jīng)一度被認(rèn)為是取代放免的檢測手段。,缺點(diǎn) 靈敏度、重復(fù)性不及放免，易造成漏檢和假陽性。 因酶的純度和反應(yīng)過程容易受環(huán)境因素影響，導(dǎo)致穩(wěn)定性不好。,7,化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）,應(yīng) 用 單個(gè)樣本檢測速度快，適

4、合做急診。 靈敏度較高。 自動(dòng)化程度高。 儀器種類： 拜耳 ACS180 系列 雅培 AXSYM 貝克曼 ACCESS 德普 IMMULITE,缺 點(diǎn) 樣品不能重復(fù)檢測；出現(xiàn)故障則整批試劑及血樣報(bào)廢。 本底較高，易受環(huán)境物質(zhì)干擾。 儀器故障率較高。 標(biāo)準(zhǔn)曲線穩(wěn)定性較差，需多次定標(biāo)。 檢測精度不高，在超微量分析及早期診斷方面能力不足。 非開放性試劑；試劑價(jià)格高。,8,電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECL）,應(yīng)用 80年代末期問世的新型化學(xué)發(fā)光免疫分析方法。 基本原理：根據(jù)三聯(lián)吡啶釕Ru(bpy)3和三丙胺在電場觸發(fā)下產(chǎn)生發(fā)光的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。 本底較小、靈敏度較高、線性范圍較寬。,缺點(diǎn) 儀器檢測速度慢 （羅

5、氏公司） ECL1010 60 測試/小時(shí) ECL2010 90 測試/小時(shí) 非開放性試劑系統(tǒng)、不能做科研。 試劑價(jià)格過高。,9,時(shí)間分辨熒光免疫 （TRFIA）（Time-Resoled Fluoroimmunoassay）,10,時(shí)間分辨熒光免疫的基本原理,用三價(jià)稀土離子及其螯合物作為示蹤物，代替熒光物質(zhì)、同位素、酶和化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，標(biāo)記抗原、抗體、核酸探針等物質(zhì)； 當(dāng)免疫過程結(jié)束后，根據(jù)稀土離子螯合物的熒光光譜的物理特點(diǎn) （特異性強(qiáng)、 Stokes位移大、 壽命長），并采用解離-增強(qiáng)技術(shù)（ DELFIA）放大有效熒光；最后用時(shí)間分辨熒光分析儀，測定免疫反應(yīng)最后產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度。 根據(jù)已知濃度

6、所確定的標(biāo)準(zhǔn)曲線，來判斷未知樣品的濃度值，以達(dá)到定量分析的目的。,11,時(shí)間分辨熒光免疫原理圖（Time-resolved Fluorescence Immunoassay）,12,標(biāo)記物為具有獨(dú)特?zé)晒馓匦缘南⊥两饘?鑭系元素,鑭系元素共有15種，應(yīng)用在時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)中有四種： 銪(Eu)、釤（Sm)、鏑(Dy)、锝(Te) 鑭系元素?zé)晒馓攸c(diǎn)： 熒光壽命極長 鑭系元素螯合物（60900 us) 普通熒光免疫中熒光團(tuán)：1100ns 樣本中蛋白質(zhì)熒光：110ns，易猝滅。 Stokes位移大（大約290nm） 銪：發(fā)射光613nm、激發(fā)光340nm， 熒光素的Stokes位移為28nm 熒光

7、特異性強(qiáng)。（發(fā)射光譜帶很窄：615 5nm） 解離-增強(qiáng)技術(shù)可使其熒光性提高100萬倍,13,通過時(shí)間延遲，將特異性熒光與非特異性熒光 分辨開來，使本底達(dá)到0,利用鑭系元素?zé)晒馕锢硖匦裕瑹晒饧ぐl(fā)后在固定時(shí)間段檢測特異性熒光。而在此時(shí)間之前，非特異性熒光已完全衰減為0,14,利用鑭系元素光譜特點(diǎn)，將發(fā)射熒光與激發(fā)熒光分辨開來，零本底的又一保障,發(fā)射光譜與激發(fā)光譜間存在的巨大Stokes位移?？梢酝ㄟ^干涉濾光片將發(fā)射光譜與激發(fā)光譜完全分離。,15,光 路 圖 簡 介,氙燈,紫外濾光透鏡,分束器,樣品杯,濾光片,PMT,負(fù)反饋,16,DELFIA技術(shù)為臨床檢測帶來的先進(jìn)性,17,不 同 標(biāo) 記 物

8、的 波 長,18,0.5 1 2 5 10 20 50 100 200 500 U/L,5,100,2000,Cps.10 3,時(shí)間分辨熒光免疫檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線相當(dāng)穩(wěn)定， 同一批次的試劑盒可用兩點(diǎn)法加批次的參考曲線定標(biāo),DELFIA hFSH,標(biāo)準(zhǔn)曲線穩(wěn)定，試劑保質(zhì)期長,N=6,19,時(shí)間分辨熒光免疫的試劑種類,甲狀腺功能檢測 TSH，Ultra TSH，T3，T4，F(xiàn)T3，F(xiàn)T4，TBG，TG 性激素類檢測 FSH，LH，HCG，ProlactinE2，E3，Testo，Prog，SHBG 腫瘤標(biāo)記檢測 AFP，CEA，PSA，hTG，-2 Micro，NSE，PAP，PSA（Free/Tot

9、al），PSA EQM，CA-50，CA-125，CA-199 遺傳科檢查 產(chǎn)前篩查： hAFP/ HCG ，PAPPA 新生兒篩查：Neo-TSH，Neo-T4，Neo-IRT，Neo-17a-OH Prog，PKU 傳染病檢測 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 血液科檢測 貧血檢查：Ferritin，Vit B12，F(xiàn)olic acid 科研工具 單標(biāo)記檢測，雙標(biāo)記檢測，三標(biāo)記檢測，四標(biāo)記檢測,20,時(shí)間分辨熒光免疫-突出優(yōu)點(diǎn),零本底、靈敏度高 線性范圍寬 試劑有效期長 標(biāo)準(zhǔn)曲線穩(wěn)定性好 易于自動(dòng)化,TRFIA作為一項(xiàng)具有廣闊發(fā)展?jié)摿Φ男屡d生物學(xué)技術(shù)，將會(huì)給標(biāo)記免

10、疫學(xué)帶來一場革命。,21,新波生物徽標(biāo),六邊形模塊 - 象征生物科技 細(xì)胞形內(nèi)核 - 象征企業(yè)內(nèi)涵 多元化組織 - 象征新波個(gè)體,共同發(fā)展 有機(jī)合作 多元個(gè)體相互促進(jìn),子公司： 上海美生生物技術(shù)有限公司 蘇州新波生物技術(shù)有限公司 廣州新波生物技術(shù)有限公司 陜西新波生物技術(shù)有限公司 青島新波生物技術(shù)有限公司 經(jīng)銷商： ,22,公司簡介,上海新波生物技術(shù)有限公司是一家新近成立于上海浦東張江高科技開發(fā)區(qū)的高新技術(shù)企業(yè)，是國際上少數(shù)幾家掌握“時(shí)間分辨熒光免疫”檢測技術(shù)的廠家之一。 新波生物致力于這一新技術(shù)的研究，現(xiàn)已在方法學(xué)研究、試劑合成、標(biāo)記物的制備、抗原抗體純化、檢測儀器的生產(chǎn)等方面均取得了很大成

11、果。 2000年在國內(nèi)首家推出了ANYTEST2000型時(shí)間分辨熒光免疫檢測系統(tǒng)，并列為上海市高新技術(shù)項(xiàng)目；與此儀器配套的試劑種類多達(dá)82種，其中58項(xiàng)用于臨床檢驗(yàn)、24項(xiàng)用于科研。,23,儀器種類（DELFIA）,全自動(dòng) AutoDELFIA 1235 （WALLAC） 半自動(dòng) VICTOR2 1420 （WALLAC） 半自動(dòng) ANYTEST2000 （上海新波） 半自動(dòng) DELFIA 1234/1232 （WALLAC 停產(chǎn)）,24,全自動(dòng) AutoDELFIA 1235,25,26,自動(dòng)的操作界面,27,簡潔的參數(shù)設(shè)置,28,清晰的試劑圖示,29,快速的檢測過程,6個(gè)項(xiàng)目、480個(gè)測試

12、,30,半自動(dòng) VICTOR2 1420,31,VICTOR2 1420 操作界面,32,半自動(dòng) ANYTEST2000,33,Anytest2000 時(shí)間分辨檢測儀,34,ANYTEST2000 主要特點(diǎn),試劑的多樣性 種類多達(dá)82種，其中臨床58項(xiàng)、科研24項(xiàng) 每年推出新診斷試劑盒（根據(jù)客戶不同需求而開發(fā)） 儀器的先進(jìn)性 高靈敏度： 10 -18 mol/L（Eu 3+） 線性范圍寬： 10 -13 mol/L 10 -18 mol/L 高穩(wěn)定性： 1 % 快速測試： 1秒樣 標(biāo)本量靈活： 適合每天1400份標(biāo)本量 適用范圍： 各類大小型的醫(yī)院、生化實(shí)驗(yàn)室 應(yīng)用于臨床檢測和科學(xué)試驗(yàn) 標(biāo)準(zhǔn)曲

13、線、測試數(shù)據(jù)長期保存、共享 智能化操作軟件 價(jià)格的可比性 進(jìn)口試劑國內(nèi)分裝價(jià)格與進(jìn)口酶標(biāo)試劑可比性 專為中國設(shè)計(jì)的儀器價(jià)格與進(jìn)口計(jì)數(shù)儀的可比性,35,ANYTEST2000智能化操作界面,友好的主界面 簡潔的操作過程 強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理,36,振蕩器及洗板機(jī),Egate2310全自動(dòng)洗扳機(jī) 2510變頻振蕩器,37,Egate2310 全自動(dòng)洗滌機(jī)功能特點(diǎn),操作界面簡潔明了 內(nèi)置16種洗滌程序（用戶可編輯） 洗滌程序可長期保存 兩種自動(dòng)清洗模式（WASH、RINSE） 消毒功能（DISINFECTION） 300uL洗液標(biāo)準(zhǔn)量的校準(zhǔn) 機(jī)械位置隨意調(diào)整，適合各種規(guī)格微孔板、條的洗滌,38,2510

14、變頻振蕩器的功能特點(diǎn),均勻旋轉(zhuǎn)式振動(dòng)，使得微孔內(nèi)的免疫反應(yīng)可以在孔內(nèi)壁上均勻進(jìn)行。 采用變頻設(shè)計(jì)，使得振蕩頻率不受負(fù)載變化影響；避免了因負(fù)載發(fā)生改變導(dǎo)致頻率漂移的狀態(tài)發(fā)生。,39,乙肝表面抗原免疫反應(yīng)圖 （時(shí)間分辨熒光法）,40,乙肝表面抗體免疫反應(yīng)圖 （時(shí)間分辨熒光法）,41,乙肝抗原免疫反應(yīng)圖 （時(shí)間分辨熒光法）,42,乙肝抗體免疫反應(yīng)圖 （時(shí)間分辨熒光法）,43,乙肝核心抗體免疫反應(yīng)圖 （時(shí)間分辨熒光法）,44,新技術(shù)的挑戰(zhàn),放免其必然受到一代新的更靈敏、穩(wěn)定、快速，而且全自動(dòng)化的測量技術(shù)的挑戰(zhàn)。但取代它的決不是發(fā)色酶標(biāo)，因其技術(shù)指數(shù)尚不及放免。 從90年代開始放免分析在國際上每年以 1

15、015% 的速度下降，這是事實(shí)。一些大型的實(shí)驗(yàn)室，標(biāo)本量大的項(xiàng)目都已逐步應(yīng)用各種非放免標(biāo)記的自動(dòng)化設(shè)備來進(jìn)行分析，這是技術(shù)發(fā)展的必然規(guī)律。 我們必須清醒地分析趨勢，迎接新技術(shù)的挑戰(zhàn)和帶來新的曙光。,45,時(shí)間分辨法檢測“乙肝五項(xiàng)”的意義,原子標(biāo)記、靈敏度高，有效區(qū)分弱陽性與陰性血樣。 二步法的采用，最大限度避免HOKE現(xiàn)象出現(xiàn)。（強(qiáng)陽性血樣檢測為陰性） 定量檢測可以動(dòng)態(tài)觀察治療效果。 量化評(píng)估乙肝疫苗接種效果。 結(jié)果準(zhǔn)確、價(jià)格適中。,46,NCU/ml單位來源,National Center for Clinical Laboratory,(NCCL) 國家衛(wèi)生部臨檢中心,NC UNIT NCU/ml,47,我們的目標(biāo),為使我國的臨床檢驗(yàn)工作達(dá)到國際先進(jìn)水平，我們將不懈努力，積極普及先進(jìn)的時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)，不斷推出新產(chǎn)品，以取代放免、酶標(biāo)。