國(guó)標(biāo)酶標(biāo)分析儀檢定規(guī)程

1、可可a中華人民共和國(guó)國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程jjg 861-2007酶標(biāo)分析儀elisa analytical instruments2007一”一21發(fā)布20080521實(shí)施國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布jjg 861-2007酶標(biāo)分析儀檢定規(guī)程，一一 。一 一。、8 2ljjg 861-2007lverification regulation ofl代替jjg 861-1994 lelisa analytical instrumentsl、。、j本規(guī)程經(jīng)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局于2007年11月21日批準(zhǔn)，并自2008年5月21日起施行。歸口單位：全國(guó)物理化學(xué)計(jì)量技術(shù)委員會(huì) 起草單位：中國(guó)計(jì)量科學(xué)研

2、究院 參加起草單位：吉林省計(jì)量科學(xué)研究院本規(guī)程委托全國(guó)物理化學(xué)計(jì)量技術(shù)委員會(huì)負(fù)責(zé)解釋本規(guī)程主要起草人：謝寶民(中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院)參加起草人：屈嬡玉(吉林省計(jì)量科學(xué)研究院)jjg 8612007目錄1范圍12概述 13計(jì)量性能要求14通用技術(shù)要求141外觀與初步檢查142絕緣電阻25計(jì)量器具控制251檢定條件252檢定項(xiàng)目353檢定方法354檢定結(jié)果的處理555檢定周期5附錄a酶標(biāo)儀靈敏度溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備方法6附錄c檢定證書(shū)內(nèi)頁(yè)格式ll；9 ；附錄b檢定記錄格式7jjg 8612007酶標(biāo)分析儀檢定規(guī)程1范圍 本規(guī)程適用于酶標(biāo)分析儀的首次檢定、后續(xù)檢定和使用中檢驗(yàn)。酶標(biāo)分析儀型式評(píng)價(jià)和樣機(jī)試驗(yàn)

3、中有關(guān)計(jì)量性能試驗(yàn)可參照?qǐng)?zhí)行。2概述酶標(biāo)分析儀(以下簡(jiǎn)稱儀器)是依據(jù)酶標(biāo)記的免疫復(fù)合物與酶的相應(yīng)底物能夠產(chǎn)生 顯色反應(yīng)，顯色程度與被檢測(cè)樣品中待測(cè)抗體(或抗原)的含量相關(guān)，根據(jù)顯色物吸光 度值確定待測(cè)物質(zhì)含量，不同待測(cè)顯色物質(zhì)有其各自的特征吸收譜線，并遵守郎伯一比 爾(lambertbeer)定律，對(duì)待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定量分析的儀器。lambertbeer定律的表達(dá) 式如下：a一一lgtabc式中：a物質(zhì)的吸光度；t物質(zhì)的透射比；n物質(zhì)的吸光系數(shù)；6光路長(zhǎng)度；c物質(zhì)的濃度。 儀器主要由光源系統(tǒng)、單色器系統(tǒng)、樣品室、檢測(cè)器等組成。 儀器類別：i單波長(zhǎng)雙波長(zhǎng)、多通道， 單波長(zhǎng)、單通道； 波長(zhǎng)連續(xù)可調(diào)式、

4、單通道多通道。3計(jì)量性能要求儀器的計(jì)量性能要求如表1所示。裹l儀器計(jì)性能要求示值穩(wěn) 波長(zhǎng)示值 波長(zhǎng)重復(fù) 吸光度示值吸光度重 靈敏度儀器類別 通道差異 定性 誤差nm 性nm 誤差 復(fù)性(lmg)i土0005 士3 士15士003 10 1001o030005 士3士15 土003 1，o 001士0005 士315 土003 1o 001o034通用技術(shù)要求41外觀與初步檢查jjg 861-2007411儀器應(yīng)有下列標(biāo)志：名稱、型號(hào)、編號(hào)、制造廠名、出廠日期。412儀器應(yīng)平穩(wěn)置于水平無(wú)震動(dòng)的工作臺(tái)上。各調(diào)節(jié)旋鈕、按鍵和開(kāi)關(guān)均能正常工 作。電纜線的接插件應(yīng)接觸良好。413樣品室應(yīng)密封良好，無(wú)漏光

5、現(xiàn)象。414指示器應(yīng)正常工作，數(shù)字顯示清晰、完整。415運(yùn)動(dòng)部分應(yīng)平穩(wěn)，不應(yīng)有卡滯、突跳及顯著的空回。42絕緣電阻儀器在不接地的狀態(tài)下，試驗(yàn)電壓500 v時(shí)，電源進(jìn)線與殼體之間的絕緣電阻不小于20 mq。5計(jì)量器具控制 計(jì)量器具控制包括首次檢定、后續(xù)檢定和使用中檢驗(yàn)。51檢定條件511環(huán)境條件 儀器檢定時(shí)環(huán)境條件要求如表2所示。襲2環(huán)境條件要求溫度 (1535)濕度 1 585rh 電壓 (22022)v頻率 (50士1)hz 光線 無(wú)強(qiáng)光直射振動(dòng) 無(wú)振動(dòng)干擾 噪聲 無(wú)噪聲干擾磁場(chǎng) 無(wú)磁場(chǎng)干擾 電場(chǎng) 無(wú)電場(chǎng)干擾檢定時(shí)不得有強(qiáng)氣流影響，周圍不應(yīng)有易燃、易爆和腐蝕性氣體。512檢定設(shè)備 儀器檢定用

6、設(shè)備如表3所示。衰3儀器檢定用設(shè)備序號(hào)名稱規(guī)格和技術(shù)指標(biāo)1交流電壓表萬(wàn)用表(4位半數(shù)字)2頻率表 (4565)hz，05級(jí)3兆歐表 試驗(yàn)電壓500 v，10級(jí)4 微孔酶標(biāo)板96孔5分光光度計(jì)波長(zhǎng)示值誤差優(yōu)于士05 nm513標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)5131標(biāo)準(zhǔn)干涉濾光片2jjg 861-2007有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)中峰值波長(zhǎng)標(biāo)稱值為(405，450，492(或490)，620(或630) 士2)nltl的標(biāo)準(zhǔn)干涉濾光片o，或在儀器使用波長(zhǎng)范圍內(nèi)均勻選取的4塊標(biāo)準(zhǔn)濾光片。5132光譜中性濾光片吸光度標(biāo)稱值分別為02，05，10，15(不確定度o01)o。5133酶標(biāo)分析儀用靈敏度溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(不確定度5)o。52檢

7、定項(xiàng)目衰4檢定項(xiàng)目檢定項(xiàng)目 首次檢定 后續(xù)檢定使用中檢驗(yàn) 外觀檢查+一示值穩(wěn)定性+波長(zhǎng)示值誤差 +波長(zhǎng)重復(fù)性 上吸光度示值誤差 +吸光度重復(fù)性+靈敏度 +通道差異 +絕緣電阻+注：1 “+”為需檢項(xiàng)目，“一”為不需檢項(xiàng)目。2經(jīng)過(guò)維修后可能對(duì)儀器有較大影響時(shí)，其后續(xù)檢定按首次檢定進(jìn)行。53檢定方法531外觀與初步檢查按41的要求進(jìn)行。檢定前儀器應(yīng)預(yù)熱20 min。532示值穩(wěn)定性的檢定選用492 nm波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng)，將吸光度標(biāo)稱值10的光譜中性濾光片， 平放在微孔酶標(biāo)板的空板架上，以空氣為參比，測(cè)量并記錄儀器的初始示值，5 min后 記錄儀器示值一次，10 min后再次記錄儀器示值。求

8、出后兩次吸光度示值的最大值， 各類儀器按公式(1)計(jì)算示值穩(wěn)定性r：r=a最大一a韌蛄 (1)式中：a韌始和a最大儀器吸光度初始值和最大值。533 波長(zhǎng)示值誤差和波長(zhǎng)重復(fù)性的檢定5331對(duì)類儀器，用峰值波長(zhǎng)為405，450，492，620 nm的4片標(biāo)準(zhǔn)干涉濾光片 或在儀器使用波長(zhǎng)范圍內(nèi)均勻選取的4塊標(biāo)準(zhǔn)濾光片，分別置于儀器出光孔前或平放在 微孔酶標(biāo)板的某一位置(標(biāo)準(zhǔn)干涉濾光片平面需與入射光束垂直)，自短波向長(zhǎng)波逐點(diǎn) 測(cè)出濾光片的波長(zhǎng)吸光度示值(例如：測(cè)量峰值波長(zhǎng)405 nm標(biāo)準(zhǔn)干涉濾光片時(shí)， 將波長(zhǎng)調(diào)到低于標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)20 nm即385 nm，然后，以1 nm的改變幅度測(cè)量至高于標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)干涉濾光

9、片需在波長(zhǎng)示值誤差優(yōu)于5=0511111的分光光度計(jì)上定值。應(yīng)使用經(jīng)國(guó)家計(jì)量行政部門(mén)批準(zhǔn)頒布的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。jjg 8612007吉漩圖1 波長(zhǎng)一透射比特性曲線534吸光度示值誤差的檢定5341依次選用405，450，492，620 nm波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng)，將吸光度標(biāo) 稱值分別為o2，o5，10，15的四塊光譜中性濾光片同時(shí)平放在微孔酶標(biāo)板的空板 架上，以空氣為參比，連續(xù)測(cè)量3次，依次記錄儀器示值，并計(jì)算平均值。5342對(duì)于吸收池固定的儀器，先用空吸收池調(diào)整儀器零點(diǎn)，再將光譜中性濾光片放入樣品室中，連續(xù)測(cè)量3次，記錄儀器示值，并計(jì)算平均值。5343吸光度示值誤差a按公式(5)計(jì)算：3a一告a

10、，一a。(5)3 j式中：a第i次測(cè)量的吸光度值； a。吸光度標(biāo)準(zhǔn)值。4jjg 861-2007儀器吸光度示值誤差結(jié)果的報(bào)告，以每個(gè)波長(zhǎng)(405，450，492，620 nm)或儀器 特有的專一波長(zhǎng)下，通過(guò)測(cè)量、計(jì)算得到的吸光度示值誤差最大值給出。535吸光度重復(fù)性的檢定選用450 nm波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng)，將吸光度標(biāo)稱值為05或10的光譜中 性濾光片平放在微孔酶標(biāo)板的空板架上，以空氣為參比，于固定的某-：fl位重復(fù)測(cè)量6 次，記錄儀器示值，并計(jì)算平均值，按公式(6)計(jì)算rsd值，以實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn) 偏差值(rsd值)表示儀器的吸光度重復(fù)性：rsd一肇三100x一型百可廠圭(6)式中：z

11、，第i次測(cè)量的結(jié)果；牙一n次測(cè)量結(jié)果的吸光度平均值；”測(cè)量次數(shù)。536靈敏度的檢定選用450 nm波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng)，使用量程適合并經(jīng)檢定合格的a級(jí)加樣 器，在未包被抗原或抗體的微孔酶標(biāo)板的某一孔中加入350“i。濃度值為5 mgl的酶 標(biāo)分析儀用靈敏度溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，測(cè)量吸光度值。537通道差異的檢定對(duì)i、類儀器，選用450 tim波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng)，將吸光度標(biāo)稱值為10的光譜中性濾光片平放在微孑l酶標(biāo)板的空板架上，先后置于多個(gè)通道的相應(yīng)位置 (例如：對(duì)于8通道儀器可從a1hl或a2h2作為起始位置)，以空氣為參比，測(cè) 量并記錄每一通道的至少6次吸光度值(例如a通道可測(cè)量a1a6或

12、a2a7)，多 個(gè)通道的差異結(jié)果報(bào)告用全部測(cè)量數(shù)據(jù)的極差值表示，按公式(7)計(jì)算通道差異亂：舭一a 一a。 (7)式中：a。多個(gè)通道中測(cè)量結(jié)果的吸光度最大值； a多個(gè)通道中測(cè)量結(jié)果的吸光度最小值；以一通道差異。538絕緣電阻的檢定用500 v兆歐表，測(cè)量?jī)x器電源進(jìn)線端與機(jī)殼(或接地端子)間的絕緣電阻。54檢定結(jié)果的處理541 以上檢定的各項(xiàng)數(shù)據(jù)均需記錄在檢定記錄紙上，其中有關(guān)項(xiàng)目的結(jié)果應(yīng)填寫(xiě)完 整或注明在檢定證書(shū)或檢定結(jié)果通知書(shū)上。542按本規(guī)程檢定合格的儀器，發(fā)給檢定證書(shū)；不合格的儀器，發(fā)給檢定結(jié)果通知 書(shū)，并注明不合格項(xiàng)目的數(shù)據(jù)。55檢定周期檢定周期一般不超過(guò)1年，在此期間儀器經(jīng)修理或?qū)y(cè)

13、量結(jié)果有疑問(wèn)時(shí)，應(yīng)及時(shí)檢定。jjg 861-2007附錄a酶標(biāo)儀靈敏度溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備方法酶標(biāo)儀靈敏度溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用重鉻酸鉀純物質(zhì)配制成質(zhì)量濃度為5 mgi。的溶液 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以005 moll硫酸為基體。a1 005 moll硫酸溶液的配制在500 ml燒杯中加入400 ml蒸餾水，用移液管吸取27 ml，濃硫酸加入燒杯中， 攪拌均勻后放入1000 ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度線，搖勻備用。a2含鉻量5 mgl重鉻酸鉀溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的配制 a21在分析天平上準(zhǔn)確稱取0282 9 g重鉻酸鉀，置于100 mi。燒杯中，用005 moli。 硫酸溶液溶解后，移入500 ml容量瓶中，用少量0

14、05 moli。硫酸溶液洗燒杯若干次， 洗液放入容量瓶中，用005 moll硫酸溶液稀釋至刻度線，搖勻備用，此溶液濃度為200 mgl。一 a22用移液管吸取質(zhì)量濃度為200 mgl的重鉻酸鉀溶液25 ml放人100 mi，容量 瓶中，用005 moll硫酸溶液稀釋至刻度線，搖勻，此溶液質(zhì)量濃度為5 mgi。，即檢 定酶標(biāo)儀靈敏度的溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。jjg 861-2007附錄b檢定記錄格式送檢單位標(biāo)準(zhǔn)器名稱 地址標(biāo)準(zhǔn)器證書(shū)號(hào)電話不確定度(或準(zhǔn)確度) 儀器名稱 標(biāo)準(zhǔn)器有效期至 儀器型號(hào) 溫度制造廠 相對(duì)濕度rh 出廠編號(hào) 大氣壓kpa 檢定員 核驗(yàn)員 檢定日期 證書(shū)編號(hào)一、外觀： 二、示值穩(wěn)定性：a*a。 alomin三、波長(zhǎng)示值誤差和波長(zhǎng)重復(fù)性。nm a。nm i1璺，nm氌xn