皮質(zhì)醇(cortisol)作業(yè)指導(dǎo)書

1、皮質(zhì)醇(cortisol)1. 分析原理 采用競(jìng)爭(zhēng)法原理，整個(gè)過程18分鐘完成。 第1步：20l標(biāo)本與生物素化的抗皮質(zhì)醇抗體和釕（ru）標(biāo)記的皮質(zhì)醇衍生物混勻，分別形成復(fù)合物，數(shù)量取決于標(biāo)本中待測(cè)物的濃度。生物素化的抗皮質(zhì)醇抗體一部分與標(biāo)本中待測(cè)物結(jié)合，另一部分與ru標(biāo)記的皮質(zhì)醇衍生物結(jié)合。 第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒。形成的復(fù)合物通過生物素、鏈酶親和素之間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。 第3步：反應(yīng)混和液吸到測(cè)量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光電倍增管進(jìn)行測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果由機(jī)器自動(dòng)從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出。此曲線由儀器通過2點(diǎn)定標(biāo)校正，由從試劑條形

2、碼掃描入儀器的原版標(biāo)準(zhǔn)曲線而得。2. 標(biāo)本要求血清：按標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)方法采集。血漿：肝素、edta或枸櫞酸鈉抗凝均可。其中用枸櫞酸鈉抗凝的血漿，測(cè)定結(jié)果需+10%。標(biāo)本在28度可穩(wěn)定5天，20度可穩(wěn)定3個(gè)月。只能凍融一次。含沉淀的標(biāo)本使用前需離心。不要加熱滅活標(biāo)本。標(biāo)本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。注意：由于皮質(zhì)醇在血中的含量呈現(xiàn)晝夜的周期性變化，應(yīng)注明采血時(shí)間。3. 試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑：m：鏈霉親和素包被的微粒（透明瓶蓋），1瓶，6.5ml。粒子濃度0.72mg/ml，生物素結(jié)合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐劑。r1：生物素化的羊抗皮質(zhì)醇抗體（灰蓋）

3、，1瓶，9ml。濃度90ng/ml，mes緩沖液0.1mol/l，ph6.0。含防腐劑。r2：ru(bpy) 3 2標(biāo)記的皮質(zhì)醇-多肽（黑蓋），1瓶，9ml。濃度25ng/ml，達(dá)那唑（danazol）20mg/ml，mes緩沖液0.1mol/l，ph6.0。含防腐劑。校準(zhǔn)品：elecsys 皮質(zhì)醇定標(biāo)液（cortisol calset）貨號(hào)11875124質(zhì)控品：elecsys 通用質(zhì)控品（precicontrol universal）1和2貨號(hào)11731416其他所需材料： elecsys2010、cobas e411分析儀需要 elecsys系統(tǒng)緩沖液（procell）貨號(hào)1166298

4、8 elecsys 測(cè)量池清洗液（cleancell）貨號(hào)11662970 elecsys 添加劑液（syswash）貨號(hào)11930346 elecsys 系統(tǒng)清洗液支架（adapter for sysclean) ）貨號(hào)11933159 elecsys 2010反應(yīng)杯（assay cup) 貨號(hào)11706802 elecsys 2010吸樣頭（assay tip) 貨號(hào)11706799 modular analytics e170分析儀需要 elecsys系統(tǒng)緩沖液（procell m）貨號(hào)04880340 elecsys測(cè)量池清洗液（cleancell m）貨號(hào)04880293 elecs

5、ys系統(tǒng)緩沖液/測(cè)量池清洗液預(yù)熱杯（pc/cc-cup）貨號(hào)03023141 elecsys反應(yīng)杯/吸樣頭盒(assaycups/assaytips combimagazine m)貨號(hào)12102137 elecsys廢物盒(wasteliner)貨號(hào)03023150 elecsys系統(tǒng)清洗液支架(sysclean adapter m) )貨號(hào)03027651 各種分析儀均適用的材料 elecsys標(biāo)本通用稀釋液 貨號(hào)11732277 elecsys 系統(tǒng)清洗液（sysclean） 貨號(hào)112985004. 儀器和校準(zhǔn)使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn)elecsys 2010/e 170/e 41

6、1全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫自動(dòng)分析儀儀器校準(zhǔn)：每批皮質(zhì)醇試劑有一條形碼標(biāo)簽，含有該批試劑定標(biāo)所需的特殊信息。應(yīng)用elecsys cortisol calset定標(biāo)液定標(biāo)。 定標(biāo)頻率：每批試劑必須用新鮮試劑（試劑經(jīng)儀器注冊(cè)24小時(shí)以內(nèi)）標(biāo)定一次，如再次標(biāo)定即根據(jù)下列要求： elecsys2010、e170和cobas e 分析儀： 一個(gè)月（同一批號(hào)試劑） 7天（放置儀器上的同一試劑盒） 各種分析儀均適用的情況：根據(jù)要求進(jìn)行標(biāo)定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)。5. 操作步驟（以e 170為例）5.1 校準(zhǔn)操作步驟：在編緝各項(xiàng)目的參數(shù)時(shí)，已經(jīng)在applicationcalib菜單中定義好了定標(biāo)類型和幾點(diǎn)定標(biāo)。因

7、此在對(duì)各項(xiàng)目進(jìn)行定標(biāo)時(shí)，只需在定標(biāo)菜單calibration中進(jìn)行即可。3.2進(jìn)入calibrationstatus菜單，用鼠標(biāo)選擇需定標(biāo)的項(xiàng)目，再根據(jù)需要點(diǎn)單點(diǎn)定標(biāo)（blank鍵）或兩點(diǎn)定標(biāo)（two point鍵）、跨距定標(biāo)（span鍵）、多點(diǎn)定標(biāo)（full鍵），再選擇其它項(xiàng)目進(jìn)行相應(yīng)選擇，最后點(diǎn)save，將定標(biāo)物放入在calibrationcalibrator中定義好的位置，點(diǎn)start，再點(diǎn)start，儀器開始定標(biāo)。 在calibrationstatus菜單中看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)calibration result鍵看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)reaction monitor鍵看每個(gè)定標(biāo)物的反應(yīng)曲線。5.2

8、 樣本檢測(cè)程序： 單個(gè)樣本輸入，在主菜單下選擇workplace- testslection，在sequence no欄輸入標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)save鍵，樣本號(hào)自動(dòng)累加。批量常規(guī)標(biāo)本的輸入，在主菜單下選擇workplace- testslection，在sequence no欄輸入起始標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)repeat，輸入該批標(biāo)本的最后一個(gè)標(biāo)本號(hào)，點(diǎn)ok即可。進(jìn)樣分析，將標(biāo)本按在workplace菜單中輸入的標(biāo)本號(hào)順序在樣本架上排好，放入進(jìn)樣盤內(nèi),按start鍵，輸入該批上機(jī)標(biāo)本的起始標(biāo)本號(hào)，再點(diǎn)start鍵，儀器自動(dòng)開始推架檢

9、測(cè)標(biāo)本。6. 質(zhì)量控制elecsys 通用質(zhì)控品（precicontrol universal）1和2以及其它合適的質(zhì)控品。各濃度區(qū)域的質(zhì)控至少每24小時(shí)或每一次定標(biāo)后測(cè)定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求。檢測(cè)值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。7. 計(jì)算方法對(duì)每一個(gè)標(biāo)本，儀器會(huì)自動(dòng)計(jì)算皮質(zhì)醇含量，單位是nmol/l，g/dl或g/l。換算方法nmol/l x 0.03625 = g/dl (x 0.3625 = g/l) g/dl x 27.586 = nmol/l (g/l x 2.7586)8. 參考范圍 血清和血漿： 上午時(shí)間 7-10 a.m.

10、: 171-536 nmol/l (6.2-19.4g/dl) (n=144) 下午時(shí)間 4-8 p.m. : 64-340 nmol/l (2.3-12.3g/dl) (n=137) 尿中游離皮質(zhì)醇：100-379 nmol/24 h (36-137 g/24 h) 唾液： 上午 8-10 a.m.: 19.1 nmol/l ( 0.69 g/dl) 下午 2:30-3:30 p.m.: 11.9 nmol/l ( 0.43 g/dl) 如有必要，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)自己測(cè)定一個(gè)正常值范圍9. 分析性能 1.001750 nmol/l或0.03663g/dl 高于檢測(cè)范圍的標(biāo)本可用通用稀釋液稀釋。建議

11、1:10稀釋。稀釋后的標(biāo)本皮質(zhì)醇含量必須高于50nmol/l或1.8g/dl。如用手工稀釋，結(jié)果應(yīng)乘上稀釋倍數(shù)。如果是機(jī)器自動(dòng)稀釋，機(jī)器會(huì)自動(dòng)計(jì)算結(jié)果。10. 干擾因素 該方法不受黃疸（膽紅素60mg/dl）、溶血（血紅蛋白1.9g/dl）、脂血（脂質(zhì)2700mg/dl）和生物素5mg/天）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8小時(shí)后才能采血。 不受類風(fēng)濕因子干擾（1100u/ml）。 17種常用藥物經(jīng)試驗(yàn)對(duì)本測(cè)定無干擾。偶爾會(huì)遇到抗鏈酶親和素抗體以及其它免疫反應(yīng)的干擾。 懷孕、使用避孕藥和雌激素治療會(huì)導(dǎo)致皮質(zhì)醇測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。在使用潑尼松龍、甲基潑尼松龍或潑尼松治療的患者會(huì)出現(xiàn)假性皮質(zhì)醇升

12、高。美替拉酮試驗(yàn)可導(dǎo)致11脫氧皮質(zhì)醇升高，由于交叉反應(yīng)也可出現(xiàn)假性皮質(zhì)醇升高。患21羥基酶缺損的病人,體內(nèi)21脫氧皮質(zhì)醇升高,因而可出現(xiàn)皮質(zhì)醇升高。在分析結(jié)果時(shí)，應(yīng)考慮采血時(shí)間,另外嚴(yán)重的應(yīng)激反應(yīng)也導(dǎo)致皮質(zhì)醇升高。 elecsys皮質(zhì)醇測(cè)定結(jié)果應(yīng)結(jié)合病人病史、臨床其他檢查結(jié)果綜合起來進(jìn)行診斷。11. 臨床意義 皮質(zhì)醇（氫可的松）是最主要的糖皮質(zhì)類固醇，對(duì)維持人體的多項(xiàng)機(jī)能有重要作用。與其它糖皮質(zhì)類固醇激素一樣，皮質(zhì)醇由共同前體膽固醇在腎上腺皮質(zhì)區(qū)合成而來。在外周血中，90%的皮質(zhì)醇與皮質(zhì)類固醇結(jié)合球蛋白（cbg）以及白蛋白結(jié)合后進(jìn)行運(yùn)輸。 皮質(zhì)醇最重要的的生理機(jī)能是升高血糖，抗炎和免疫抑制作用。 皮質(zhì)醇的合成和分泌受下丘腦垂體腎上腺皮質(zhì)軸的負(fù)反饋機(jī)制的調(diào)節(jié)。當(dāng)皮質(zhì)醇水平下降時(shí)，下丘腦分泌促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（crh），使垂體分泌促腎上腺皮質(zhì)激素（acth），并由acth刺激腎上腺合成并分泌皮質(zhì)醇。皮質(zhì)醇本身對(duì)垂體和下丘腦起負(fù)反饋?zhàn)饔谩Ａ硗?，機(jī)體在應(yīng)急狀態(tài)下，皮質(zhì)醇分泌增加。皮質(zhì)醇在血中的含量呈現(xiàn)晝夜的周期性變化。在清晨含量達(dá)到最高峰（700nm