中醫(yī)實(shí)驗(yàn)研究的思路

1、 3小鼠四診檢測指標(biāo)及方法 標(biāo)準(zhǔn)采集： （1）體重 （2）腋溫（） （3）爪和尾顯微數(shù)碼拍照（計(jì)算機(jī)圖像處理 ，提取反映紅色程度的r值） （4）晚間35s曠場自主活動(dòng)計(jì)數(shù)（跨格數(shù)的水 平移動(dòng)、前肢離地?cái)?shù)的垂直移動(dòng)） （5）瘤體積（cm，計(jì)算公式：abb/2，a代表 腫瘤的長徑，b代表腫瘤的短徑） （6）估算瘤重（g，瘤重=瘤體積） （7）生存時(shí)間 結(jié)果 1不同組別荷瘤小鼠生存情況 圖2 所有荷瘤小鼠生存情況 2荷瘤小鼠不同階段四診的演變 （1）總體上，荷瘤小鼠腫瘤體積呈持續(xù)增長； 去瘤體重呈拋物線狀，中晚期增長平緩）。 圖3 所有荷瘤小鼠估算瘤重（g）增長情況 圖4 所有荷瘤小鼠體重（g）增長

2、情況 以上分別反映什么證候？ （2）荷瘤小鼠好奇和自主活動(dòng)持續(xù)下降。曠場檢 測小鼠水平和垂直運(yùn)動(dòng)減少。 （3）荷瘤小鼠腋溫持續(xù)下降，下降幅度大，嚴(yán)重 時(shí)降幅達(dá)9%！ 圖5 所有荷瘤小鼠曠場活動(dòng)情況 圖6 所有荷瘤小鼠腋溫（）改變情況 以上分別反映什么證候？ （4）荷瘤小鼠爪、尾顏色變淡，反映紅色程度的r值 下降。其中，爪r的變化顯著，嚴(yán)重時(shí)降幅達(dá)9.2%！ 圖7 所有荷瘤小鼠爪、尾r值演變情況 以上反映什么證候？ 3荷瘤小鼠不同階段證候的演變 方法各證型權(quán)重、辨證閾值及稱謂 痰瘀邪盛=各小鼠瘤重/所有小鼠瘤重均數(shù)。 大于1.5為邪毒甚，大于2為邪毒壅盛；小于0.75為 邪較弱；0.5為邪弱。

3、陰虛程度=各小鼠正?；蛉チ鲶w重/正常組體 重均值。小于0.9為陰偏虛，小于0.8為陰虛。 氣虛程度=各小鼠水平移動(dòng)數(shù)/正常均數(shù)0.6+各 小鼠垂直移動(dòng)數(shù)/正常均數(shù)0.4。大于1.5為氣盛，小 于0.5為氣虛。 陽熱程度=各小鼠校正腋溫/正常均數(shù)0.3+各小 鼠爪校正r/正常爪r均數(shù)0.5+各小鼠尾校正r/正常尾 r均數(shù)0.2。大于1.02為陽偏盛，小于0.98陽偏虛， 小于0.95陽虛。 陽氣程度=氣虛程度0.2+陽虛程度0.8。大于 1.1為陽氣盛，小于0.85為陽氣虛。 結(jié)果如下： （1）邪毒證候盛衰的演變 腫瘤增長的快慢標(biāo)志著邪毒的盛衰。荷瘤小鼠腫 瘤增長迅速者早期偏多，以后逐漸減少；腫

4、瘤增長緩 慢者所占比例逐漸增加，可能與存活時(shí)間較長的小鼠 腫瘤細(xì)胞增生不活躍和體質(zhì)較好有關(guān)。 圖8 所有荷瘤小鼠腫瘤大小分布與演變 （2）不同虛證的發(fā)生及演變 與人類類似，隨著病情的發(fā)展，荷瘤小鼠虛證出現(xiàn) 的頻率增加（為簡捷明了，合并陰虛含陰偏虛、陽虛含 陽偏虛、陽氣虛含陽氣偏虛）： 從不同虛證的程度看，氣虛的程度最嚴(yán)重，其次是 陽氣虛。陽熱下降恒定，但幅度小，陰虛則不一致，推 測與實(shí)驗(yàn)后期所存活動(dòng)物體質(zhì)相對(duì)較好有關(guān)： 圖9 所有荷瘤小鼠合并虛證的分布與演變 圖10 所有荷瘤小鼠陰、陽、氣虛演變情況 研究發(fā)現(xiàn)： 1）接種后的第7天，證候以邪毒為主，虛證無證可 辨接近半數(shù)，虛證以單證居多。 2）

5、接種后的第14天。總體進(jìn)入中期，邪毒已不是 重點(diǎn)，腫瘤體積居中的增加，并保持下去。陰虛和偏陰 虛占16，明顯增加；氣虛比例也顯著上升；陽偏虛、 陽虛的比例大幅上升，并均保持下去。對(duì)于陽虛如此高 發(fā)，以往未見報(bào)道，可能是小鼠的特點(diǎn)。該階段死亡以 陽氣虛為主要原因，因此，扶持陽氣十分必要。此時(shí)陰 虛多為氣陰兩虛、陰陽兩虛，僅1例為單純陰虛。 3）第18天，邪毒大多不甚；陽虛比例下降，可能 與剩余動(dòng)物體質(zhì)較好有關(guān)；該階段，單純陰虛出現(xiàn)3例 ，有所增加。 4）第21天，該階段小鼠出現(xiàn)大量死亡，集中在陽 氣虛、陰陽兩虛。由于陽虛普遍發(fā)生，已無單純的陰虛 。 5）第25天，已進(jìn)入晚期，該階段小鼠出現(xiàn)大量死

6、 亡，集中在陽氣虛、陰陽兩虛。 6）第28天，該階段小鼠出現(xiàn)大量死亡，集中在陽 氣虛。提示，晚期保護(hù)陽氣的重要性。 7）第32天，陽虛減少，而陽氣虛增加，提示氣虛 程度的嚴(yán)重。 （3）兼證及其演變 與人類類似，隨著病情的發(fā)展，荷瘤小鼠虛證 兼證的比例增加。趨勢是無證可辨的數(shù)量和比例下 降，單證的數(shù)量和比例下降；兩證組合變化不大； 而三個(gè)兼證組合者顯著增加，四診組合從無到有， 有增加趨勢： 圖11 不同時(shí)期荷瘤小鼠證候比例的演變 4荷瘤小鼠的預(yù)后 是否能在荷瘤小鼠出瘤的早期，依據(jù)其證候或體質(zhì) ，判斷其預(yù)后？ 方法：求出同一日死亡小鼠不同證候的權(quán)重平均值 ，與生存天數(shù)比較。采用SPSS 11.5統(tǒng)

7、計(jì)軟件進(jìn)行相關(guān) 分析。 結(jié)果： （1）痰瘀邪盛程度與預(yù)后的相關(guān)系數(shù)為-0.539， P=0.01，具有統(tǒng)計(jì)意義，提示荷瘤小鼠早期腫瘤增長迅 速者，預(yù)后差。 生存天數(shù) 3020100 邪毒程度 2.5 2.0 1.5 1.0 .5 0.0 圖12 痰瘀邪盛證候程度與預(yù)后的關(guān)系 生存天數(shù) 3020100 陰虛程度 1.2 1.1 1.0 .9 .8 生存天數(shù) 3020100 氣虛程度 2.5 2.0 1.5 1.0 .5 0.0 （2）陰虛程度與預(yù)后的相關(guān)系數(shù)為-0.316， P=0.15，提示早期陰盛（體重較重者）預(yù)后不佳。 （3）氣虛程度與預(yù)后的相關(guān)系數(shù)為0.275， P=0.21，提示早期氣

8、虛程度嚴(yán)重者，預(yù)后較差。 圖13 陰虛證候程度與預(yù)后的關(guān)系 圖14 氣虛證候程度與預(yù)后的關(guān)系 生存天數(shù) 3020100 陽熱程度 1.02 1.01 1.00 .99 .98 生存天數(shù) 3020100 陽氣程度 1.3 1.2 1.1 1.0 .9 .8 .7 （4）陽熱程度與預(yù)后的相關(guān)系數(shù)為0.236， P=0.29，提示早期陽熱虛程度嚴(yán)重者，預(yù)后較差。 （5）陽氣虛程度與預(yù)后的相關(guān)系數(shù)為0.287， P=0.19，提示早期陽氣虛程度嚴(yán)重者，預(yù)后較差。 圖15 陽熱證候程度與預(yù)后的關(guān)系 圖16 陽氣虛證候程度與預(yù)后的關(guān)系 從以上結(jié)果可見： 1）早期腫瘤增長迅速，體積大，邪毒壅盛者，預(yù) 后不良

9、。這是決定預(yù)后的主要原因。 2）早期氣盛略優(yōu)于氣虛，陽氣盛略優(yōu)于陽氣虛。 此外，我們還觀察到： 3）實(shí)驗(yàn)中，腋溫下降、體重持平和下降是預(yù)后差 的重要標(biāo)志。一旦腋溫或體重下降，多瀕臨死亡。與陽 氣衰竭、陰虛液脫類似。 總之，痰瘀邪盛證候與預(yù)后的關(guān)系最為密切，痰瘀 邪盛證候越重，其生存期越短。其次與預(yù)后有關(guān)的證候 依照密切程度為陽氣虛、氣虛、陽熱。 5不同處方療效的比較 依據(jù)荷瘤小鼠虛證復(fù)雜和嚴(yán)重程度，以及生存天數(shù) ，總體上癸、己、庚、辛等4張?zhí)幏蒋熜л^好，而丙、 丁、戊、壬4張?zhí)幏蒋熜л^差。那么以上療效的取得， 單純?nèi)Q于處方，還是由于分組偏倚，尤其是那些早期 邪毒壅盛證候的小鼠分配到那些療效不

10、好的組別中所造 成的？我們把療效較差的丙、丁、戊、壬4張?zhí)幏浇M別 合并，把療效較好的癸、己、庚、辛等4張?zhí)幏浇M別合 并，與模型和正常對(duì)照。結(jié)果如下： （1）邪毒壅盛程度 療效較差的4個(gè)組別，早期腫瘤邪毒壅盛，因而其 療效差異的主要原因可能是分組偏倚所造成的。鑒于第 一次檢查是在用藥后第2天，所以其差異可能還與不同 處方療效有一定的聯(lián)系。 圖17 療效優(yōu)劣組別腫瘤邪毒盛衰的演變 （2）陰虛、氣虛、陽熱、陽氣程度 早期不同組別的陰虛、氣虛、陽熱、陽氣程度類似 ，以后逐漸有了差別。這種差別可能是腫瘤自然發(fā)生的 ，也可能受到了藥物影響。 圖18 療效優(yōu)劣組別陰虛程度的演變 圖19 療效優(yōu)劣組別氣虛程度

11、的演變 圖20 療效優(yōu)劣組別陽熱程度的演變 圖21 療效優(yōu)劣組別陽氣盛衰程度的演變 （3）兼證及其演變 與人類類似，隨著病情的發(fā)展，荷瘤小鼠虛證 兼證的比例增加。趨勢是無證可辨的數(shù)量和比例下 降，單證的數(shù)量和比例下降；兩證組合變化不大； 而三個(gè)兼證組合者顯著增加，四診組合從無到有， 有增加趨勢： 圖11 不同時(shí)期荷瘤小鼠證候比例的演變 從以上結(jié)果可見： 1）早期腫瘤增長迅速，體積大，邪毒壅盛者，預(yù) 后不良。這是決定預(yù)后的主要原因。 2）早期氣盛略優(yōu)于氣虛，陽氣盛略優(yōu)于陽氣虛。 此外，我們還觀察到： 3）實(shí)驗(yàn)中，腋溫下降、體重持平和下降是預(yù)后差 的重要標(biāo)志。一旦腋溫或體重下降，多瀕臨死亡。與陽 氣衰竭、陰虛液脫類似。 總之，痰瘀邪