金利油軟膠囊微生物限度檢查法的驗(yàn)證

1、金利油軟膠囊微生物限度檢查法的驗(yàn)證straitpharmaceuticaljournalvol19no.6200740);檢測(cè)波長(zhǎng):28onto;流速:1.oml?min;柱溫:30c;進(jìn)樣量:lop.l;理論板數(shù)按延胡索乙素計(jì)不低于4000.2.2對(duì)照品溶液的配制精密稱取延胡索乙素對(duì)照品4.68mg,放人100ml的量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,制成46.8p.g?ml的溶液即得.2.3供試品溶液的制備2.3.1將延胡索與川楝子藥材進(jìn)行粉碎至顆粒,分別精密稱取延胡索30g與川楝子15g置于大燒杯中加入10倍量的水(即單味延胡索加300ml水,配伍后的加入450ml的水)重復(fù)煎煮2次,每次1

2、h,用紗布過(guò)濾后合并濾液,分別濃縮至1:1的液體(即單味藥濃縮至30ml,配伍藥45ml)用已標(biāo)化的量筒盛取.2.3.2精密量取上述兩種溶液各5ml,分置25ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻.濾過(guò),棄去初濾液,取續(xù)濾液,即得.2.4線性關(guān)系的考察精密稱取延胡索乙素對(duì)照品6.28mg,置25ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度.分別精密吸取上述溶液1ml置于25ml的量瓶中,再精取lml,2ml,3ml,4ml,5ml,置于10ml量瓶中,均用甲醇稀釋至刻度.取上述6種溶液各10進(jìn)樣,依照上述色譜條件,以峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量(g?ml)為橫坐標(biāo),得到標(biāo)準(zhǔn)曲線,其線性范圍為10.05125.6g?m

3、l,回歸方程:y=9416x一6996,r=0.9999.2.5精密度試驗(yàn)取2.2項(xiàng)下的溶液,按2.1色譜條件分析,連續(xù)進(jìn)樣5次,測(cè)得峰面積值的rsd=1.4%.2.6樣品測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液和樣品溶液各10,注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積,計(jì)算含量.延胡素水煎液含延胡素乙素0.3713mg?g,金鈴子散水煎液含延胡素乙素0.4369mg?g一.結(jié)果表明延胡索與川楝子配伍后的水煎液中的延胡索乙素較單味延胡索水煎液高0.0656mg?g.色譜圖(見(jiàn)圖ilb(圖1a.延胡索乙素對(duì)照品b.延胡索水煎液c.金鈴子散水煎液3討論3.1采用高效液相色譜法測(cè)定水煎液的含量,操作簡(jiǎn)單,結(jié)果更靈敏準(zhǔn)確.流動(dòng)相

4、開(kāi)始選用甲醇_o.1%的磷酸溶液(三乙胺調(diào)ph至6.0)(55:45),延胡索乙素在35min出峰,保留時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng),后調(diào)流動(dòng)相的比例為(60:40),保留時(shí)間提前到約22min,樣品的分離效果也很好,最后用現(xiàn)在的流動(dòng)相比例.3.2對(duì)于水煎液中延胡索乙素的提取,采用加甲醇溶解至刻度與加適量甲醇進(jìn)行超聲處理10min,20min,30min的試驗(yàn),結(jié)果顯示,不進(jìn)行超聲提取的測(cè)定結(jié)果與超聲10min,20min,30min沒(méi)有明顯差異.故樣品不進(jìn)行超聲處理,直接加甲醇溶解測(cè)定.3.3延胡索與川楝子配伍在中醫(yī)臨床上稱為金鈴子散.金鈴子散在臨床上應(yīng)用較多.通過(guò)用高效液相色譜法,對(duì)單昧延胡索及其與川楝子

5、配伍的水煎液中延胡索乙素含量的測(cè)定,得出結(jié)論:配伍后延胡索乙素含量較單味延胡索有明顯提高,可能是因?yàn)檠雍髋c川楝子配伍后能夠提高延胡索中延胡索乙素的溶出率.這也進(jìn)一步印證了古人在中醫(yī)方劑配伍上的科學(xué)性和合理性.參考文獻(xiàn)1劉生西,劉喜平,董鈺明.延胡索與川楝子配伍中總生物堿含量變化的研究j.中醫(yī)兒科雜志,2006,2(5).2國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典s.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005,一部:94.金利油軟膠囊微生物限度檢查法的驗(yàn)證嚴(yán)素芬(福建省漳州水仙藥業(yè)有限公司漳州363000)摘要:目的確認(rèn)金利油軟膠囊的檢驗(yàn)條件,保證微生物限度檢查方法的科學(xué)性和檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性.方法采用中國(guó)藥典2

6、005年版一部附錄微生物限度檢查法項(xiàng)下方法的驗(yàn)證.結(jié)果確認(rèn)了金利油軟膠囊微生物限度檢查的操作方法.結(jié)論用常規(guī)法檢查金利油軟膠囊中的細(xì)菌,霉菌及酵母茵;用常規(guī)法檢查金利油軟膠囊中的大腸埃希茵,結(jié)果可靠.關(guān)鍵詞:金利油軟膠囊;微生物限度檢查法中圖分類號(hào):r927.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:a文章編號(hào):1006-3765(2007)06-0057-02金利油軟膠囊為一中藥品種,其處方組成較復(fù)雜,因此應(yīng)作者簡(jiǎn)介:嚴(yán)素芬,女(1979.1一),畢業(yè)于福建衛(wèi)生學(xué)校藥劑學(xué)專業(yè),藥師,從事藥品檢驗(yàn)工作.聯(lián)系電話:05962301797采用適宜的方法進(jìn)行微生物限度檢查.我們采用常規(guī)法檢查金利油軟膠囊中的細(xì)菌,霉菌及酵母菌;

7、常規(guī)法檢查金利油軟膠囊中的大腸埃希菌,結(jié)果可靠.1驗(yàn)證材料?57?海峽藥學(xué)2007年第l9卷第6期1.1藥品金利油軟膠囊由漳州無(wú)極藥業(yè)有限公司提供.1.2驗(yàn)證用菌株金黃色葡萄球菌cmcc(b)26003,枯草芽孢桿菌cmcc(b)63501,大腸埃希菌cmcc(b)44102,白色念珠菌cmcc(f)98001,黑曲霉cmcc(f)98003均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供.1.3稀釋劑ph7.0無(wú)菌氯化鈉?蛋白胨緩沖液.1.4實(shí)驗(yàn)儀器pzb003凈化工作臺(tái),zdx.35b自控式壓力蒸氣滅菌器,pyx.dhs型隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱,mj?160型霉菌培養(yǎng)箱.1.5培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,玫瑰紅鈉瓊

8、脂培養(yǎng)基,營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,膽鹽乳糖培養(yǎng)基,改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基,改良馬丁培養(yǎng)基,mug培養(yǎng)基.2驗(yàn)證方法2.1菌液制備取經(jīng)3035c培養(yǎng)1824h的金黃色葡萄球菌,枯草芽孢桿菌,大腸埃希菌的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物1ml,用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液10倍稀釋成每lml含菌數(shù)為50100efu的菌懸液,備用;取經(jīng)2328c培養(yǎng)2448h的白色念珠菌的改良馬丁培養(yǎng)物1ml,用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液10倍稀釋成每1ml含菌數(shù)為50100cfu的菌懸液,備用;取經(jīng)2328c培養(yǎng)57d的黑曲霉斜面培養(yǎng)物,加4mlo.9%無(wú)菌氯化鈉溶液洗下黑曲霉孢子,吸出孢子懸液lml,用0.9%無(wú)菌表l細(xì)菌,霉菌及酵母茵計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)

9、證試驗(yàn)結(jié)果氯化鈉溶液10倍稀釋成每1ml含孢子數(shù)為50100cfu的孢子懸液,備用.2.2供試液制備取供試品10g,加2g無(wú)菌聚山梨酯80,加ph7.0無(wú)菌氯化鈉.蛋白胨緩沖液至100ml(內(nèi)加少許玻璃珠),并置45c水浴中振搖,直至完全溶解,作為1:10的供試液.2.3細(xì)菌,霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證2.3.1采用常規(guī)法進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn).2.3.2試驗(yàn)組:取1:10供試液1ml,50100cfu試驗(yàn)菌分別注入平皿中,立即傾注瓊脂培養(yǎng)基,待凝固后,置規(guī)定溫度培養(yǎng)2472h逐日觀察結(jié)果.2.3.3菌液組:測(cè)定所加的試驗(yàn)菌數(shù).2.3.4供試品對(duì)照組:取1:10供試液1ml注入平皿中,立即傾注

10、瓊脂培養(yǎng)基,待凝固后,置規(guī)定溫度培養(yǎng)2472h逐日觀察結(jié)果,測(cè)定供試品本底菌數(shù).2.3.5稀釋劑對(duì)照組:取ph7.0無(wú)菌氯化鈉.蛋白胨緩沖液代替供試品,依供試品制備方法制備,按試驗(yàn)組的方法操作,立即注入瓊脂培養(yǎng)基,待凝固后,置規(guī)定溫度培養(yǎng)2472h逐日觀察結(jié)果.2.3.6試驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)表1).從表1結(jié)果可以看出:該供試品通過(guò)接種5種陽(yáng)性試驗(yàn)菌株,采用常規(guī)法,結(jié)果試驗(yàn)組的菌回收率均>70%,稀釋劑對(duì)照組的菌回收率均>70%.因此該供試品細(xì)菌,霉菌及酵母菌數(shù)均采用常規(guī)法進(jìn)行測(cè)定.2.4控制菌檢查方法的驗(yàn)證2.4.1試驗(yàn)組:取上述1:10供試液10ml加至10oral膽鹽乳糖培養(yǎng)基中,加10100cfu大腸埃希菌,依相應(yīng)控制菌檢查法進(jìn)行檢查.2.4.2陰性菌對(duì)照組:方法同試驗(yàn)組,驗(yàn)證大腸埃希菌時(shí),陰性對(duì)照菌采用金黃色葡萄球菌.后依相應(yīng)控制菌檢查法進(jìn)行檢查.2.4.3試驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)表2).表2大腸埃希茵驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果?58?注:表中+代表反應(yīng)呈陽(yáng)性,一代表該反應(yīng)呈陰性.從表2結(jié)果可以看出:大腸埃希菌的陽(yáng)性對(duì)照生長(zhǎng)良好,陰性菌無(wú)生長(zhǎng),證明了藥品在此條件下無(wú)抑菌作用,因此大腸埃希菌可以采用常規(guī)法進(jìn)行檢查.3討論3.1稀釋劑對(duì)照組的菌回收率均大于70%,說(shuō)明采用ph7.0無(wú)菌氯化鈉.蛋白胨緩沖液作為稀釋液對(duì)試驗(yàn)不產(chǎn)生干擾.3.2金利油軟膠囊含油性成份,