實驗二.藥物中特殊雜質的檢查.ppt

1、實驗二：實驗二： 藥物中特殊雜質的檢查藥物中特殊雜質的檢查 一般雜質：一般雜質： 自然界中分布較廣，在多種藥物的生成和貯存過程中容自然界中分布較廣，在多種藥物的生成和貯存過程中容 易引人的雜質，如氯化物，硫酸鹽，鐵鹽，重金屬，砷鹽等。易引人的雜質，如氯化物，硫酸鹽，鐵鹽，重金屬，砷鹽等。 特殊雜質：特殊雜質： 指某一個或某一類藥物的生產或貯藏過程中引入的雜質，指某一個或某一類藥物的生產或貯藏過程中引入的雜質， 如阿司匹林中的游離水楊酸、異煙肼中的游離肼、甾體激素如阿司匹林中的游離水楊酸、異煙肼中的游離肼、甾體激素 中的其他甾體。特殊雜質檢查方法收載在中國藥典正文各藥中的其他甾體。特殊雜質檢查方

2、法收載在中國藥典正文各藥 品的質量標準中。品的質量標準中。 藥品中的雜質藥品中的雜質 本次實驗內容本次實驗內容 阿司匹林腸溶片中游離水楊酸的檢查阿司匹林腸溶片中游離水楊酸的檢查 1 氫化可的松中有關物質的檢查氫化可的松中有關物質的檢查 2 鹽酸普魯卡因中對氨基苯甲酸的檢查鹽酸普魯卡因中對氨基苯甲酸的檢查 3 一、阿司匹林腸溶片中游離水楊酸的檢查一、阿司匹林腸溶片中游離水楊酸的檢查 ona co2 加壓， ona coona oh cooh h+ 生產工藝：生產工藝： cooh oc o ch3 (ch3co)2o h2so4,7075 c 。 (ch3co)2o ococh3 貯藏水解：貯藏水

3、解： cooh oc o ch3 (ch3co)2o h2so4,7075 c 。 ococh3ona co2 加壓， ona coona oh cooh h+ ona co2 加壓， ona coona oh cooh h+ o o cooh oh h2ooo 1、雜質來源、雜質來源 阿司匹林無游離酚羥基，不與阿司匹林無游離酚羥基，不與fe3+ 作用，而水楊酸則可與之反應生成紫堇作用，而水楊酸則可與之反應生成紫堇 色，可檢出色，可檢出1g的游離水楊酸。的游離水楊酸。 水楊酸對照液水楊酸對照液阿司匹林阿司匹林 硫酸鐵銨硫酸鐵銨 對照液顏色對照液顏色 供試液顏色供試液顏色 實驗原理實驗原理 比色

4、法：比色法： 合格合格 +fe3+h2o fe oh 紫堇色紫堇色 2010版用版用hplc法法 實驗步驟實驗步驟 1、樣品前處理、樣品前處理 取本品取本品30片（片（0.025g/片），研細，用乙醇片），研細，用乙醇15ml分次研磨，并分次研磨，并 移入移入50ml量瓶中，充分振搖，用水稀釋至刻度，搖勻，立即濾量瓶中，充分振搖，用水稀釋至刻度，搖勻，立即濾 過，取續(xù)濾液。過，取續(xù)濾液。 2.00ml續(xù)濾液續(xù)濾液 水稀釋至水稀釋至50ml 3ml硫酸鐵銨硫酸鐵銨 4.50ml0.01%水楊酸標液水楊酸標液 3ml 乙醇乙醇 1.00ml酒石酸酒石酸溶液溶液 水稀釋至水稀釋至50ml 3ml硫酸

5、鐵銨硫酸鐵銨 50ml 納氏納氏 比色比色 管管 比較顏色，不得更深（比較顏色，不得更深（1.5%） 樣品管樣品管對照管對照管 1. 在阿司匹林中游離水楊酸的檢查中，制備供試品溶液在阿司匹林中游離水楊酸的檢查中，制備供試品溶液 所用的比色管須經干燥后使用，且供試品須用乙醇溶解所用的比色管須經干燥后使用，且供試品須用乙醇溶解 后才可加水稀釋至刻度，否則供試品難以溶解。后才可加水稀釋至刻度，否則供試品難以溶解。 2. 游離水楊酸檢查時，供試品溶液要臨用現(xiàn)配，避免阿游離水楊酸檢查時，供試品溶液要臨用現(xiàn)配，避免阿 司匹林水解造成的誤差。司匹林水解造成的誤差。 3. 進行水楊酸檢查時，應在中性或弱酸性溶

6、液（進行水楊酸檢查時，應在中性或弱酸性溶液（ph46） 中進行。若在強酸性溶液中，生成的紫蘭色配合物會分中進行。若在強酸性溶液中，生成的紫蘭色配合物會分 解褪色。解褪色。 注意事項：注意事項： 二、氫化可的松中有關物質的檢查二、氫化可的松中有關物質的檢查 o ho oh och2oh h hh 氫化可的松氫化可的松 天然皮質激素天然皮質激素 甾體激素中的甾體激素中的有關物質有關物質： 1、雜質來源、雜質來源 原料、中間體、異構體、降解產物原料、中間體、異構體、降解產物 2、特點、特點 （1）可能存在多個甾體雜質）可能存在多個甾體雜質 （2）結構類似）結構類似 本實驗中，氫化可的松中本實驗中，氫

7、化可的松中“其他其他 甾體甾體” 的檢查采用的檢查采用tlc法（法（自身稀釋自身稀釋 對照法對照法）。）。 2010版用版用hplc法法 實驗原理實驗原理 s 溶劑溶解 一定比例稀釋 供試品溶液 一定量供試品溶液對照溶液 供試品溶液所顯供試品溶液所顯雜質斑點雜質斑點顏色不顏色不 得深于對照溶液的得深于對照溶液的主斑點主斑點 方法：方法： 供供 試試 品品 溶溶 液液 對對 照照 溶溶 液液 雜質雜質 主藥主藥 不合格不合格 雜質雜質 四氮唑比色法：四氮唑比色法： 腎上腺腎上腺 皮質激皮質激 素藥物素藥物 四氮唑鹽四氮唑鹽 oh 紫色斑點紫色斑點 實驗步驟實驗步驟 1. 供試品溶液和對照品溶液的

8、制備供試品溶液和對照品溶液的制備 取本品，加氯仿取本品，加氯仿-甲醇（甲醇（9:1）制成每）制成每1ml中含中含3.0mg的溶液，的溶液， 作為供試品溶液。精密量取適量，加氯仿作為供試品溶液。精密量取適量，加氯仿-甲醇（甲醇（9:1）制成每）制成每 1ml中含中含60mg的溶液，作為對照品溶液。的溶液，作為對照品溶液。 2. 檢查檢查 吸取上述兩種溶液各吸取上述兩種溶液各5l （毛細管高度約（毛細管高度約1.5cm），）， 分別分別 點于同一點于同一硅膠硅膠g薄層板上，以二氯甲烷薄層板上，以二氯甲烷-乙醚乙醚-甲醇甲醇-水（水（385： 60：30：2）為展開劑，展開后，晾干，在）為展開劑，展

9、開后，晾干，在105干燥干燥10min， 放冷，噴以堿性四氮唑藍試液，立即檢視。供試品溶液如顯放冷，噴以堿性四氮唑藍試液，立即檢視。供試品溶液如顯 雜質斑點，不得多于雜質斑點，不得多于3個，其顏色與對照溶液的主斑點比較，個，其顏色與對照溶液的主斑點比較， 不得更深。不得更深。 三、鹽酸普魯卡因中對氨基苯甲酸的檢查三、鹽酸普魯卡因中對氨基苯甲酸的檢查 1、雜質來源：、雜質來源： 水解產生對氨基苯甲酸，進一步脫羧、氧化成有色雜質，水解產生對氨基苯甲酸，進一步脫羧、氧化成有色雜質， 使注射劑顏色變黃、療效下降、毒性增加。使注射劑顏色變黃、療效下降、毒性增加。 nh2 cooh nh2 nh2 coo

10、ch2ch2n(c2h5)2 h2o - co2 o o o 檢查方法檢查方法 ： tlc法法（雜質對照法）（雜質對照法） 1、雜質對照法、雜質對照法： 對照品：對氨基苯甲酸對照品：對氨基苯甲酸 供試品：供試品：鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因 薄層板：硅膠薄層板：硅膠h板板 展開劑：苯展開劑：苯-冰醋酸冰醋酸-丙酮丙酮-甲醇（甲醇（14：1：1：4） 顯色劑：對二甲氨基苯甲醛顯色劑：對二甲氨基苯甲醛 雜質斑點與對照品主斑點比較，不得更深。雜質斑點與對照品主斑點比較，不得更深。 供供 試試 品品 雜雜 質質 對對 照照 品品 雜質雜質 主藥主藥 合格合格 實驗原理實驗原理 2010版用版用hplc法法

11、 雜質已知且有雜質對照品雜質已知且有雜質對照品 實驗步驟實驗步驟 吸取鹽酸普魯卡因供試液和對氨基苯甲酸對照液各吸取鹽酸普魯卡因供試液和對氨基苯甲酸對照液各10l （毛細管高度約（毛細管高度約2.0cm），分別點于同一含有羧甲基纖維素），分別點于同一含有羧甲基纖維素 鈉為粘合劑的鈉為粘合劑的硅膠硅膠h薄層板上。以苯薄層板上。以苯-冰醋酸冰醋酸-丙酮丙酮-甲醇（甲醇（14： 1：1：4）為展開劑，展開后，晾干，用對二甲氨基苯甲醛）為展開劑，展開后，晾干，用對二甲氨基苯甲醛 溶液（溶液（2%對二甲氨基苯甲醛乙醇溶液對二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸，加入冰醋酸 5ml制成）噴霧顯色，供試

12、品溶液如顯與對照品相應的雜質制成）噴霧顯色，供試品溶液如顯與對照品相應的雜質 斑點，其顏色與對照溶液的主斑點比較，不得更深。斑點，其顏色與對照溶液的主斑點比較，不得更深。 薄層色譜操作要點薄層色譜操作要點 薄層板的制備薄層板的制備點樣點樣展開展開斑點確定斑點確定 g板和板和h板的制備板的制備 玻璃板洗凈，吹干，待用。玻璃板洗凈，吹干，待用。 g板板：玻璃背面先貼上標簽（：玻璃背面先貼上標簽（g板），取硅膠板），取硅膠g粉粉5g，加，加18毫毫 升水，向同一個方向研磨混合，去除表面氣泡，從中心倒入潔升水，向同一個方向研磨混合，去除表面氣泡，從中心倒入潔 凈玻璃板，研缽棒助涂布均勻凈玻璃板，研缽棒

13、助涂布均勻(快速快速)，拍板，轉向，再拍板，拍板，轉向，再拍板， 平推，勿動！，晾干，用前烘干活化。平推，勿動！，晾干，用前烘干活化。 h板板：玻璃背面先貼上標簽（：玻璃背面先貼上標簽（h板），取硅膠板），取硅膠h粉粉5g，加，加18毫毫 升升cmc-na，同上法制板，平推，勿動！，同上法制板，平推，勿動！ 制板完讓老師看板，認可后方能離開。每人一個制板完讓老師看板，認可后方能離開。每人一個g板一個板一個h板板 薄層板的制備薄層板的制備點樣點樣展開展開斑點確定斑點確定 1、點樣工具為、點樣工具為點樣毛細管點樣毛細管 2、點樣時，宜分次點加，每次、點樣時，宜分次點加，每次 點加后，待其自然干燥。

14、點加后，待其自然干燥。 3、點樣基線距底邊、點樣基線距底邊2.0cm，樣點，樣點 一般為圓點，直徑一般為圓點，直徑2mm4mm， 點間距離可視斑點擴散情況以不點間距離可視斑點擴散情況以不 影響檢出為宜，一般約為影響檢出為宜，一般約為 1.5cm2.0cm。 薄層色譜操作要薄層色譜操作要 點點 2cm 不要劃線，不要劃線， 以免破壞硅以免破壞硅 膠表面，毛膠表面，毛 細管輕觸表細管輕觸表 面，不要捅面，不要捅 破硅膠。破硅膠。 薄層板的制備薄層板的制備點樣點樣展開展開斑點確定斑點確定 預飽和預飽和展開中展開中 1、先放入板，再加展開劑、先放入板，再加展開劑15ml，浸沒，浸沒0.5-1cm，樣品點不得浸，樣品點不得浸 入展開劑。入展開劑。 2、薄層板先置于盛有展