楓香樹葉抗菌活性分析論文_優(yōu)秀論文

1、 楓香樹葉抗菌活性分析論文【摘要】目的探討楓香樹葉的體外抗菌活性。方法采用瓊脂擴(kuò)散法和試管連續(xù)稀釋法測定楓香樹葉對(duì)常見致病菌和條件致病菌的體外抗菌活性及最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果楓香樹葉對(duì)大腸埃希菌、白假絲酵母菌無抗菌作用；楓香樹葉對(duì)金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌皆有抗菌作用, 抑菌圈直徑在1325mm之間。不同方法提取的藥液的抗菌作用有明顯差別, 其中楓香樹葉水煎液抗菌作用最好, 對(duì)金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌的最低抑菌濃度分別為0.5, 1, 0.5, 0.5, 0.25g/ml。結(jié)論楓香樹葉對(duì)金黃色葡萄球

2、菌、白色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌有較好的抗菌作用?！娟P(guān)鍵詞】楓香樹葉；抗菌活性；最低抑菌濃度Abstract：ObjectiveToresearchantimicrobialactivityofLiquidambarformosanaHancesleaf.MethodsBymethodsofagarplatediffusionsandtubecontinuousdilution,tomeasureantimicrobialactivityandminimalinhibitoryconcentration(MIC)ofLiquidambarformosanaHances

3、leafagainstpathogenandconditionedpathogen.Results(1)LiquidambarformosanaHancesleafhadnotantimicrobialactivityonE.coli,S.albicans.(2)LiquidambarformosanaHancesleafhadantimicrobialactivityagainstS.aureus,S.epidermidis,S.flexneri,SalmonellaTyphi,P.aeruginosa,thediameterofbacteriostaticcirclewasbetween1

4、3and25millimetre.Theantimicrobialactivitywassignificantdifferentindifferentextracteddrugliquid,amongwhichtheantimicrobialactivityofwaterextractionofLiquidambarformosanaHancesleafwasthebest,theminimalinhibitoryconcentrationagainstS.aureusS.epidermidis,S.flexneri,SalmonellaTyphi,P.aeruginosa,is0.5, 1,

5、 0.5, 0.5, 0.25g/ml,respectively.ConclusionLiquidambarformosanaHancesleafhasgoodantimicrobialactivityagainstS.aureus,S.epidermidis,S.flexneri,SalmonellaTyphiandP.aeruginosa.Keywords：LiquidambarformosanaHancesleaf；Antimicrobialactivity；Minimalinhibitoryconcentration隨著抗生素的廣泛應(yīng)用, 耐藥菌株逐年增多, 目前金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素

6、G的耐藥菌株高達(dá)90%以上1, 尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistantStaphylococcusaureus,MRSA）已經(jīng)成為醫(yī)院內(nèi)感染最常見的致病菌2。有些細(xì)菌甚至產(chǎn)生多重耐藥, 如致病性大腸埃希菌約40%的菌株對(duì)鏈霉素、氯霉素、四環(huán)素、青霉素等多種抗生素產(chǎn)生耐藥性3；銅綠假單胞菌對(duì)許多抗生素具有天然或獲得耐藥性4, 這給臨床治療帶來極大的困難, 如何有效防治細(xì)菌感染及控制細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生與散播是一項(xiàng)長期、復(fù)雜、艱巨的任務(wù), 因而尋找和研制有效的抗菌藥物非常必要。本文采用瓊脂擴(kuò)散法和試管連續(xù)稀釋法進(jìn)行體外抗菌實(shí)驗(yàn)及最低抑菌濃度（MIC）的測定, 以探討

7、楓香樹葉對(duì)常見致病菌和條件致病菌的體外抗菌活性。現(xiàn)報(bào)道如下。1材枓與方法1.1菌株來源金黃色葡萄球菌（ATCC25923）, 白色葡萄球菌（ATCC12228）, 大腸埃希菌（ATCC25922）, 福氏志賀氏菌（ATCC27891）, 傷寒沙門氏菌（ATCC14028）, 銅綠假單胞菌（ATCC27853）, 購于北京生物制品鑒定所。白假絲酵母菌（ATCC14053）, 北大醫(yī)院真菌菌種保藏中心（北京）提供。1.2楓香樹葉采自江西贛南山區(qū), 采藥時(shí)間在56月之間。1.3藥液的制備1.3.150%乙醇煎液取楓香樹葉（生藥）40g, 洗凈, 加適量50%乙醇溶液浸泡30min, 加熱至10030

8、min, 過濾。藥渣再加適量50%乙醇溶液, 加熱10030min, 過濾。將兩次濾液合并, 用文火濃縮至10ml（即每毫升藥液含4g生藥）。1.3.2水煎液用蒸餾水代替50%乙醇溶液按上述方法制備藥液。1.3.350%乙醇浸液取楓香樹葉（生藥）40g, 洗凈搗碎, 與蒸餾水10ml混勻浸泡2h, 過濾, 再經(jīng)濾菌器濾過除菌, 制成4g/ml的生藥。1.3.4水浸液用蒸餾水代替50%乙醇溶液按上述方法制備藥液。1.4方法1.4.1菌液的制備將金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀氏菌、傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌接種于普通瓊脂平板上, 置37溫箱中培養(yǎng)18h, 用無菌生理鹽水配成每毫

9、升相當(dāng)于3億的菌濃度（金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌配成每毫升相當(dāng)于9億的菌濃度）。將白假絲酵母菌接種于沙氏瓊脂平板上, 置37溫箱中培養(yǎng)48h, 用無菌生理鹽水配成1108CFU/ml。1.4.2瓊脂擴(kuò)散法用無菌棉簽沾取菌液在普通瓊脂平板上（白假絲酵母菌用沙氏瓊脂平板）作均勻密集劃線, 待菌液干燥后, 用外徑5mm的打孔器打孔, 每孔加藥液200l, 平放在37溫箱中培養(yǎng)24h（白假絲酵母菌培養(yǎng)48h）觀察結(jié)果, 測量抑菌圈直徑。抑菌圈直徑取兩次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值。1.4.3試管連續(xù)稀釋法5根據(jù)抑菌實(shí)驗(yàn)的結(jié)果, 選取敏感菌測定楓香樹葉水煎液對(duì)其的最低抑菌濃度。取小號(hào)試管7支, 編號(hào)。第1步每支管

10、各加1ml肉湯培養(yǎng)基。然后在第1管加1ml藥液, 用吸管在第1管吹吸數(shù)次, 使藥液與肉湯培養(yǎng)基混勻, 取出1ml加于第2管, 混均取出1ml加于第3管, 如此稀釋至第6管棄去1ml, 第7管不加藥液作為對(duì)照。第3步每管加菌液50l, 混勻, 置37溫箱中培養(yǎng)24h。然后從每管中取出一接種環(huán)接種于普通瓊脂平板上, 再繼續(xù)培養(yǎng)24h, 觀察結(jié)果。以無細(xì)菌生長的最高稀釋濃度為該藥液的最低抑菌濃度。2結(jié)果2.1楓香樹葉的各種提取液對(duì)大腸埃希菌、白假絲酵母菌無抗菌作用。2.2楓香樹葉的各種提取液對(duì)金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌皆有抗菌作用, 抑菌圈直徑在1325m

11、m之間。結(jié)果見表1。不同方法提取的藥液的抗菌作用有明顯差別, 其中楓香樹葉水煎液抗菌作用最好, 50%乙醇煎液次之, 50%乙醇浸液較差。2.3楓香樹葉水煎液對(duì)金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌的最低抑菌濃度（MIC）分別為0.5, 1, 0.5, 0.5, 0.25g/ml。結(jié)果見表2。表1楓香樹葉幾種藥液的抑菌圈直徑（略）表2各試管楓香樹葉水煎液的最低抑菌濃度（略）表示無細(xì)菌生長；表示有少量細(xì)菌生長；表示有較多細(xì)菌生長；表示有大量細(xì)菌生長3討論楓香樹葉為金縷梅科植物楓香樹LiquidambarformosanaHance的樹葉6, 7。中藥大辭典記載楓香

12、樹葉有止血、治疔瘡、治痢疾、治產(chǎn)后風(fēng)和小兒臍風(fēng)之功效7。民間有用楓香樹葉治風(fēng)濕, 治中暑, 治痢疾；文獻(xiàn)8報(bào)道楓香樹葉中含有人體必需10種無機(jī)元素并有治療糖尿病和降血壓的作用；但楓香樹葉在抗菌作用方面國內(nèi)外未見文獻(xiàn)報(bào)道。本研究為楓香樹葉作為抗菌新藥的開發(fā)提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 楓香樹葉對(duì)金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌均有明顯的抗菌作用。不同方法提取的藥液的抗菌作用有明顯差異, 其中楓香樹葉水煎液抗菌作用最好, 50%乙醇煎液次之, 50%乙醇浸液較差, 這可能與不同方法提取的藥液的有效成分不同有關(guān)。由于中藥粗提物中含有多種化學(xué)成分, 成分與

13、藥理作用復(fù)雜, 并且受多種因素的影響。本文只做了楓香樹葉的粗提液, 有關(guān)楓香樹葉有效成分的提取與分析有待進(jìn)一步研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1陸德源醫(yī)學(xué)微生物學(xué), 第5版M.北京：人民衛(wèi)生出版社, 2000：64.2AppelbaumPCTheemergenceofvancomycin-intermediateandVancomycin-resistantStaphylococcusattreuslJClinMicrobiolInfect,2006,3(12)Suppl1：16.3聞?dòng)衩?現(xiàn)代醫(yī)學(xué)微生物學(xué)M.上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社, 1999：205.4李紅霞, 李從榮, 施金玲, 等.醫(yī)院銅綠假單胞菌感染體外耐藥