細胞生物學：3.細胞器觀察

1、實實 驗驗 三三 v1 1、細胞器的觀察細胞器的觀察 v2 2、細胞內(nèi)過氧化酶的顯示細胞內(nèi)過氧化酶的顯示 詹納斯綠詹納斯綠可專一性地對可專一性地對線粒體線粒體進行活染，線進行活染，線 粒體內(nèi)的粒體內(nèi)的細胞色素氧化酶細胞色素氧化酶可使染料始終保持可使染料始終保持氧氧 化狀態(tài)化狀態(tài)而呈而呈藍色藍色。而線粒體周圍的細胞質(zhì)中的而線粒體周圍的細胞質(zhì)中的 染料被還原呈染料被還原呈無色無色 人口腔粘膜上皮細胞活體染色人口腔粘膜上皮細胞活體染色 大白鼠肝細胞活體染色大白鼠肝細胞活體染色 一、細胞器的觀察一、細胞器的觀察 1 1、人口腔粘膜上皮細胞染色、人口腔粘膜上皮細胞染色顯示線粒體顯示線粒體 滴滴3-43-

2、4滴中性紅滴中性紅- -詹納斯綠染液詹納斯綠染液 取材（要用力），否則無活細胞取材（要用力），否則無活細胞 混勻，加蓋玻片，染色混勻，加蓋玻片，染色2-32-3分鐘，分鐘，油鏡觀察油鏡觀察 胞質(zhì)中胞質(zhì)中一些被染成一些被染成藍色、藍色、 顆粒狀或短桿狀的線粒體顆粒狀或短桿狀的線粒體 油鏡的使用油鏡的使用 油鏡在使用時油鏡在使用時需用香柏油或石蠟油需用香柏油或石蠟油作為介質(zhì)，作為介質(zhì)， 因為油鏡的透鏡和鏡孔較小，光線要通過載玻片因為油鏡的透鏡和鏡孔較小，光線要通過載玻片 和空氣才能進入物鏡中，玻璃與空氣的折光率不和空氣才能進入物鏡中，玻璃與空氣的折光率不 同，使部分光線產(chǎn)生折射而損失掉，導致進入物

3、同，使部分光線產(chǎn)生折射而損失掉，導致進入物 鏡的光線減少，使視野暗淡，物像不清。鏡的光線減少，使視野暗淡，物像不清。 在玻片標本和油鏡之間填充折射率與玻璃近似在玻片標本和油鏡之間填充折射率與玻璃近似 的香柏油或石蠟油，可減少光線的折射，增加視的香柏油或石蠟油，可減少光線的折射，增加視 野亮度，提高分辨率。野亮度，提高分辨率。 1 1、低倍鏡找目標，移到視野中央，換高倍、低倍鏡找目標，移到視野中央，換高倍 鏡觀察鏡觀察 2 2、移開高倍鏡，使鏡頭呈、移開高倍鏡，使鏡頭呈V V字型字型，在蓋玻片，在蓋玻片 上（通光孔位置）滴上（通光孔位置）滴1 1滴香柏油滴香柏油 3 3、轉(zhuǎn)到油鏡，光圈完全打開，

4、調(diào)至、轉(zhuǎn)到油鏡，光圈完全打開，調(diào)至最亮最亮 4 4、使用完后一定要、使用完后一定要清洗清洗干凈干凈 5 5、清洗至少清洗至少3 3遍遍 2 2、大白鼠肝細胞活染顯示線粒體、大白鼠肝細胞活染顯示線粒體 1 1）處死、取材：）處死、取材：肝邊緣肝邊緣較薄的組織較薄的組織 2 2）染色：）染色：染液不要太多染液不要太多，使肝組織，使肝組織上半部分暴露上半部分暴露 在空氣中在空氣中，線粒體的酶系可被充分氧化易于著色，線粒體的酶系可被充分氧化易于著色， 染色染色3030分鐘分鐘，染料易揮發(fā)，要，染料易揮發(fā)，要及時添加及時添加，組織塊全，組織塊全 部變藍后，部變藍后，吸去染液吸去染液 低倍鏡：選擇不重疊的

5、肝細胞低倍鏡：選擇不重疊的肝細胞 高倍或油鏡：肝細胞中可見高倍或油鏡：肝細胞中可見l l2 2個核，細胞質(zhì)中個核，細胞質(zhì)中 有許多被染成有許多被染成藍綠色、線條狀或顆粒狀的線粒體藍綠色、線條狀或顆粒狀的線粒體， 核周圍分布較多核周圍分布較多 3 3）用探針將著色部分的組織塊分散，吸取分）用探針將著色部分的組織塊分散，吸取分 散的細胞，加散的細胞，加RingerRinger液，滴液，滴1 1滴于載玻片上，滴于載玻片上， 蓋上蓋玻片，油鏡觀察蓋上蓋玻片，油鏡觀察 二、二、細胞內(nèi)過氧化酶的顯示細胞內(nèi)過氧化酶的顯示 聯(lián)苯胺法：聯(lián)苯胺法：細胞質(zhì)細胞質(zhì)內(nèi)的內(nèi)的過氧化物酶過氧化物酶系系能把許多能把許多 胺類

6、胺類（聯(lián)苯胺）氧化為（聯(lián)苯胺）氧化為藍色藍色的聯(lián)苯胺藍，進而的聯(lián)苯胺藍，進而 變?yōu)樽優(yōu)樽厣穆?lián)苯胺腙，棕色的聯(lián)苯胺腙，由此可以判斷其分布由此可以判斷其分布 大白鼠骨髓細胞大白鼠骨髓細胞 植物細胞中過氧化氫酶植物細胞中過氧化氫酶 過氧化酶過氧化酶 大白鼠骨髓細胞中過氧化物酶的顯示大白鼠骨髓細胞中過氧化物酶的顯示 1 1、取材：去掉、取材：去掉股骨股骨上的肌肉，用水沖洗，緊貼上的肌肉，用水沖洗，緊貼 股骨頭剪斷，牙簽挑取骨髓，涂片不能太厚股骨頭剪斷，牙簽挑取骨髓，涂片不能太厚 2 2、固定：、固定：0.5%0.5%硫酸銅，硫酸銅，3030秒秒( (注意玻片的正反面注意玻片的正反面) ) 3 3、氧化：放入裝有聯(lián)苯胺的染缸中，、氧化：放入裝有聯(lián)苯胺的染缸中，3 3分鐘分鐘 4 4、清水沖洗、清水沖洗 5