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文檔簡介
1、葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄
2、螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋
3、薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅
4、螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿
5、蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃
6、葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈
7、螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂
8、薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆
9、螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃
10、蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇
11、蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂
12、蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆
13、薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀
14、蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄
15、蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿
16、襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆
17、蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀
18、薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄
19、螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈
20、薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃
21、裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇
22、蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄
23、薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆裊羃肆芀螁羂膈蒅蚇羈芀羋薃肀羀蒃葿聿肂芆螈聿膄蒂蚄肈莇芄蝕肇肆薀薆肆腿莃裊肅芁薈螁肄莃莁蚇膄肅薇薃螀膅荿葿蝿羋薅螇螈肇莈螃螇膀蚃蠆螇節(jié)蒆薅螆莄艿襖螅肄蒄螀螄膆芇蚆袃羋蒂薂袂羈芅蒈袁膀蒁袆袁芃莄螂袀蒞蕿蚈衿肅莂薄袈膇薇蒀袇艿莀蝿羆罿薆蚅羅肁莈薁羅芄薄薇羄莆蕆羋莆蒈螞膄蒞薀袈肀莄蚃蟻羆蒃莂袆袂蒂蒅蠆膁蒁薇襖膇蒀蝿蚇肅蒀葿羃罿葿薁螅芇蒈蚄羈
24、膃蕆螆螄聿薆蒆罿羅膃薈螂袁膂蝕羇芀膁蒀螀膆膀薂肆肂腿蚅衿羈膈螇蟻芆膈蒆袇膂芇蕿蝕肈芆蟻裊羄芅莁蚈羀芄薃羃艿芃蚅螆膅節(jié)螈羂肁節(jié)蕆螅羇芁薀羀袃莀螞螃膂荿莂羈肇莈蒄螁肅莇蚆肇罿莆蝿衿羋莆蒈螞膄蒞薀袈肀莄蚃蟻羆蒃莂袆袂蒂蒅蠆膁蒁薇襖膇蒀蝿蚇肅蒀葿羃罿葿薁螅芇蒈蚄羈膃蕆螆螄聿薆蒆罿羅膃薈螂袁膂蝕羇芀膁蒀螀膆膀薂肆肂腿蚅衿羈膈螇蟻芆膈蒆袇膂芇蕿蝕肈芆蟻裊羄芅莁蚈羀芄薃羃艿芃蚅螆膅節(jié)螈羂肁節(jié)蕆螅羇芁薀羀袃莀螞螃膂荿莂羈肇莈蒄螁肅莇蚆肇罿莆蝿衿羋莆蒈螞膄蒞薀袈肀莄蚃蟻羆蒃莂袆袂蒂蒅蠆膁蒁薇襖膇蒀蝿蚇肅蒀葿羃罿葿薁螅芇蒈蚄羈膃蕆螆螄聿薆蒆罿羅膃薈螂袁膂蝕羇芀膁蒀螀膆膀薂肆肂腿蚅衿羈膈螇蟻芆膈蒆袇膂芇蕿蝕肈芆蟻裊
25、羄芅莁蚈羀芄薃羃艿芃蚅螆膅節(jié)螈羂肁節(jié)蕆螅羇芁薀羀袃莀螞螃膂荿莂羈肇莈蒄螁肅莇蚆肇罿莆蝿衿羋莆蒈螞膄蒞薀袈肀莄蚃蟻羆蒃莂袆袂蒂蒅蠆膁蒁薇襖膇蒀蝿蚇肅蒀葿羃罿葿薁螅芇蒈蚄羈膃蕆螆螄聿薆蒆罿羅膃薈螂袁膂蝕羇芀膁蒀螀膆膀薂肆肂腿蚅衿羈膈螇蟻芆膈蒆袇膂芇蕿蝕肈芆蟻裊羄芅莁蚈羀芄薃羃艿芃蚅螆膅節(jié)螈羂肁節(jié)蕆螅羇芁薀羀袃莀螞螃膂荿莂羈肇莈蒄螁肅莇蚆肇罿莆蝿衿羋莆蒈螞膄蒞薀袈肀莄蚃蟻羆蒃莂袆袂蒂蒅蠆膁蒁薇襖膇蒀蝿蚇肅蒀葿羃罿葿薁螅芇蒈蚄羈膃蕆螆螄聿薆蒆罿羅膃薈螂袁膂蝕羇芀膁蒀螀膆膀薂肆肂腿蚅衿羈膈螇蟻芆膈蒆袇膂芇蕿蝕肈芆蟻裊羄芅莁蚈羀芄薃羃艿芃蚅螆膅節(jié)螈羂肁節(jié)蕆螅羇芁薀羀袃莀螞螃膂荿莂羈肇莈蒄螁肅莇蚆肇罿莆蝿衿
26、羋莆蒈螞膄蒞薀袈肀莄蚃蟻羆蒃莂袆袂蒂蒅蠆膁蒁薇襖膇蒀蝿蚇肅蒀葿羃罿葿薁螅芇蒈蚄羈膃蕆螆螄聿薆蒆罿羅膃薈螂袁膂蝕羇芀膁蒀螀膆膀薂肆肂腿蚅衿羈膈螇蟻芆膈蒆袇膂芇蕿蝕肈芆蟻裊羄芅莁蚈羀芄薃羃艿芃蚅螆膅節(jié)螈羂肁節(jié)蕆螅羇芁薀羀袃莀螞螃膂荿莂羈肇莈蒄螁肅莇蚆肇罿莆蝿衿羋莆蒈螞膄蒞薀袈肀莄蚃蟻羆蒃莂袆袂蒂蒅蠆膁蒁薇襖膇蒀蝿蚇肅蒀葿羃罿葿薁螅芇蒈蚄羈膃蕆螆螄聿薆蒆罿羅膃薈螂袁膂蝕羇芀膁蒀螀膆膀薂肆肂腿蚅衿羈膈螇蟻芆膈蒆袇膂芇蕿蝕肈芆蟻裊羄芅莁蚈羀芄薃羃艿芃蚅螆膅節(jié)螈羂肁節(jié)蕆螅羇芁薀羀袃莀螞螃膂荿莂羈肇莈蒄螁肅莇蚆肇罿莆蝿衿羋莆蒈螞膄蒞薀袈肀莄蚃蟻羆蒃莂袆袂蒂蒅蠆膁蒁薇襖膇蒀蝿蚇肅蒀葿 分子生物學檢驗技術(shù)課程教
27、學大綱分子生物學檢驗技術(shù)課程教學大綱課程編號:課程名稱:分子生物學檢驗技術(shù)英文名稱:analysis technique of molecular biology課程類型:專業(yè)課 必修考查總 學 時:36 學分:2.0 理論課學時:30 實驗課學時:6 適用對象:醫(yī)學檢驗專業(yè)本科學生一、課程性質(zhì)與地位分子生物學是醫(yī)學領(lǐng)域發(fā)展最快的學科之一,日新月異的技術(shù)使它逐漸成為醫(yī)學發(fā)展的重要支柱。隨著本世紀初人類基因組計劃的完成,醫(yī)學發(fā)展進入了一個全新的時代。疾病基因的不斷發(fā)現(xiàn)和克隆,使人們對疾病的認識也不斷深入,而這些重大的醫(yī)學進步離不開技術(shù)上的更新和發(fā)展,生物芯片技術(shù)、基因測序技術(shù)、毛細管電泳技術(shù)等,
28、每一次技術(shù)的進步都為分子生物學的發(fā)展提供了有力的保障。分子生物學技術(shù)是一門重要的基礎(chǔ)和應(yīng)用課程,教學方式目前主要以理論課程為主,分基礎(chǔ)理論和基礎(chǔ)技術(shù)兩個部分,重點講述分子生物學檢驗技術(shù)的基礎(chǔ)理論和基礎(chǔ)知識,并引入近年發(fā)展的新理論、新技術(shù),使學生了解和學習最新進展和相關(guān)內(nèi)容。同時分子生物學技術(shù)最主要的作用是作為研究醫(yī)學的一種媒介和工具,具有很強的實踐性,其基本知識和理論來源于科學實驗,因此現(xiàn)針對本科學生開展了分子生物學實驗課程,實驗教學是強化理論課的重要方式,是培養(yǎng)醫(yī)學生實驗科學概念和實驗技能的重要途徑,通過綜合性的實驗可以強化學生對理論的深入理解和實際運用,可以更全面直觀的分析理論知識。更重要
29、的是,實驗教學是培養(yǎng)學生綜合分析和解決問題的能力以及科學創(chuàng)新能力的重要方式。二、教學環(huán)節(jié)及教學方法和手段本課程是在學生系統(tǒng)學習了前期課程的基礎(chǔ)上由檢驗教研室負責開設(shè)的,與本課程相關(guān)的基礎(chǔ)課程有生物化學和生化技術(shù)等。本課程分為理論課程和實驗課程兩部分。理論課主要包括基礎(chǔ)理論和基本技術(shù),基礎(chǔ)理論主要講授基因和基因組、原核生物和真核生物基因組、人類基因組計劃、蛋白質(zhì)組學、腫瘤分子生物學等;基本技術(shù)包括了核酸提取、dna重組技術(shù)、核酸分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)、dna芯片等。實驗操作可以使學生將晦澀的理論知識更加融會貫通,因此針對本科學生選擇性開設(shè)了實驗課程 真核細胞dna分離提取及酶切電泳實驗,本實驗是
30、分子生物學技術(shù)的一個重要的基本技術(shù),在分子生物學研究中,獲得相當純度和完整性的基因組dna,是在基因組dna水平上進行研究和分析的基本前提,基因組dna樣品質(zhì)量的好壞將直接關(guān)系到后續(xù)實驗的成敗。基因組dna通常用于構(gòu)建基因組文庫、southern雜交、多態(tài)性分析以及用pcr方法擴增克隆目的基因組片斷等方面的研究,是其它許多分子生物學實驗的基礎(chǔ)。實驗中要求學生按照相應(yīng)的理論知識獨立完成 dna分離提取與純化的各種技術(shù)和操作。通過實驗教學,一方面使學生鞏固所學理論,另一方面培養(yǎng)學生實踐操作技能和方法,同時也訓練了學生運用綜合技能的能力。三、教學緒論【了解】分子生物學檢驗技術(shù)在實驗診斷中的應(yīng)用。第二
31、章 原核生物基因組和病毒基因組第一節(jié) 原核生物基因組【掌握】基因的分子生物學定義 ,原核生物基因組特征,操縱子的結(jié)構(gòu)。第二節(jié) 質(zhì)?!菊莆铡抠|(zhì)粒的定義和用途?!臼煜ぁ抠|(zhì)粒的一般性質(zhì) 。第三節(jié) 病毒基因組【掌握】病毒基因組的特點?!玖私狻縣bv和hiv等病毒的結(jié)構(gòu)特點。第四節(jié) 朊病毒【自學】本節(jié)真核生物基因組第一節(jié) 真核生物基因組特點【掌握】真核生物基因組的特點,單拷貝序列、中度重復序列和高度重復序列的概念。第二節(jié) 基因組結(jié)構(gòu)與疾病?!臼煜ぁ咳旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)和主要成分、核小體是染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位?!玖私狻咳旧w形態(tài)、功能研究中所用術(shù)語與新技術(shù)簡介。第三節(jié) 人類基因組與人類基因組計劃【自學】本節(jié)癌基因
32、和抑癌基因第一節(jié) 癌基因【掌握】癌基因的概念,原癌基因激活的機制。【熟悉】sis家族、src家族、myc和myb家族、p53、rb家族及其表達產(chǎn)物。第二節(jié) 抑癌基因【掌握】抑癌基因的概念,抑癌基因失活的機制。【熟悉】抑癌基因的檢測。【了解】腫瘤發(fā)生的步驟。第三節(jié) 原癌基因和抑癌基因的檢測及評價【熟悉】原癌基因和抑癌基因的檢測。思考題:1、名詞解釋:癌基因、抑癌基因2、問答題:原癌基因的激活的機制。第五章 蛋白質(zhì)組和蛋白質(zhì)組學第一節(jié) 蛋白質(zhì)組學研究特點【掌握】蛋白質(zhì)組概念?!玖私狻康鞍踪|(zhì)組學研究特點。第二節(jié) 蛋白質(zhì)組的研究范疇【掌握】二維電泳。【熟悉】蛋白質(zhì)組的研究范疇,研究蛋白質(zhì)組的基本方法(
33、如酵母雙雜交、凝膠滯后電泳等)。第三節(jié) 蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫及其應(yīng)用。【了解】 蛋白質(zhì)的數(shù)據(jù)庫。第四節(jié) 蛋白質(zhì)組研究在醫(yī)學中的應(yīng)用【了解】蛋白質(zhì)的醫(yī)學應(yīng)用。思考題:一、名詞解釋:蛋白質(zhì)組、凝膠滯后實驗二、問答題:1、蛋白質(zhì)和核酸相互作用的研究方法有哪些?2、二維電泳的基本原理是什么?第六章 核酸的分離和純化第一節(jié) 核酸分離與純化的設(shè)計與原則【掌握】核酸的濃度和純度鑒定。第二節(jié) 基因組dna的分離與純化【掌握】基因組dna的分離方法和原理。第三節(jié) 質(zhì)粒dna的提取與純化【掌握】質(zhì)粒dna分離方法和原理。第四節(jié) rna的分離與純化【熟悉】rna抽提,mrna的分離和純化。思考題:1、酚-氯仿法抽提基因組d
34、na的原理。2、質(zhì)粒制備的主要方法是什么?并闡明其基本原理。3、如何鑒定核酸的濃度和純度。第七章 dna重組技術(shù)第一節(jié) 工具酶【掌握】基因重組的主要工具酶和它們的作用。第二節(jié) dna重組載體【掌握】dna重組的主要載體和它們各自的優(yōu)點。第三節(jié) dna重組與鑒定【熟悉】克隆和dna重組的概念,基因重組的基本步驟,載體的概念及特征,載體的篩選標志和篩選方法,轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導的概念、感受態(tài)菌的概念?!玖私狻炕蛑亟M的發(fā)展歷史,重組dna技術(shù)意義。第四節(jié) 外源基因的蛋白表達【掌握】啟動子、增強子、終止子、p因子的概念和作用;融合蛋白的概念以及表達融合蛋白的優(yōu)點,真核細胞表達元件,哺乳動物基因轉(zhuǎn)移的遺傳
35、選擇性標記。【了解】原核和真核生物表達的區(qū)別;表達產(chǎn)物的分離與純化。第五節(jié)dna序列測定【了解】雙脫氧末端終止法測序的原理。思考題:一、名詞解釋:非融合型表達蛋白、融合表達蛋白、包涵體載體、基因克隆、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導、感受態(tài)二、問答題:1、基因重組中主要的工具酶有哪些?它們的基本作用是什么?2、什么是限制性聚合酶鏈式反應(yīng)及其在基因診斷中的應(yīng)用第一節(jié) 聚合酶鏈式反應(yīng)【掌握】pcr反應(yīng)的概念和原理,pcr反應(yīng)體系的組成成分。第二節(jié) 以pcr為基礎(chǔ)的相關(guān)技術(shù)【掌握】逆轉(zhuǎn)錄pcr原理和方法。第三節(jié) pcr 產(chǎn)物的檢測【掌握】限制性片段長度多態(tài)性,單鏈構(gòu)象多態(tài)性。第四節(jié) pcr 技術(shù)在分子診斷中的應(yīng)用【
36、了解】pcr技術(shù)在臨床醫(yī)學中的應(yīng)用。思考題:一、名詞解釋:pcr、rt-pcr二、問答題:1、pcr的基本原理是什么?pcr反應(yīng)體系中基本的反應(yīng)成分有哪些?2、pcr產(chǎn)物的檢測方法有哪些?第九章 核酸分子雜交技術(shù)與應(yīng)用【掌握】雜交的基本原理,融解溫度,分子雜交的分類和應(yīng)用,southern印跡雜交的基本過程?!臼煜ぁ糠肿与s交過程,影響探針雜交的因素,探針標記的方法,雜交信號檢測的方法。 思考題:1、名詞解釋:分子雜交、探針、原位雜交、融解溫度、southern雜交2、問答題:分子雜交的探針的種類和特點。第十章 蛋白質(zhì)分析技術(shù)【自學】本章生物芯片技術(shù)與應(yīng)用【了解】生物芯片技術(shù)的應(yīng)用。思考題:1、
37、名詞解釋:生物芯片2、問答題:簡述生物芯片的醫(yī)學應(yīng)用價值第十二章 細胞凋亡和檢測技術(shù)【掌握】細胞周期、細胞增殖和細胞凋亡的基本概念及其與醫(yī)學研究、醫(yī)學檢驗的關(guān)系。 思考題:一、名詞解釋:細胞周期、細胞周期控制點、細胞凋亡、細胞壞死二、問答題:1. 細胞壞死和凋亡的區(qū)別是什么?2. 如何檢測細胞凋亡的情況。四、實驗【實驗名稱】真核細胞dna的分離提取及酶切電泳【實驗?zāi)康摹?、以人外周血為原料,進行基因組dna的提取,從而掌握真核細胞dna的原理、原則、提取方法,進而掌握外源基因的基本制備方法。2、明確提取中各試劑的作用及各環(huán)節(jié)的注意事項。3、掌握瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定dna的原理和技術(shù)?!緦嶒炘?/p>
38、理】真核細胞dna分子是以核蛋白形式存在于細胞核中,制備dna既要將其與蛋白質(zhì)、脂類和糖類等分離,又要保持dna的完整性,因此,從全血中制備基因組dna時,首先用去污劑triton x-100 直接破裂紅細胞和白細胞膜,使之釋放出血紅蛋白及細胞核,通過離心分離即可獲得白細胞核;用sds破壞核膜;用edta抑制dnase的活性;用酚/氯仿抽提除去蛋白質(zhì),再用氯仿除去dna溶液殘存的蛋白質(zhì);最后用無水乙醇沉淀,即可獲得基因組dna?!緦嶒灢牧稀?、器材:恒溫水浴箱,臺式冷凍高速離心機,紫外分光光度計,電泳儀,電泳槽,離心管,1.5ml eppendorf管,剪刀,牙簽,寬口移液管(5ml、10ml
39、),移液器,吸頭,錐形瓶,簡易凝膠紫外觀察儀或凝膠成像系統(tǒng)等。2、試劑:磷酸鹽緩沖液(pbs)、 dna提取緩沖液、苯酚、te緩沖液(ph8.0)、5tbe電泳緩沖液、蛋白酶k(20mgm1),溴化乙錠(ethidium bromide,eb)溶液,氯仿,異戊醇,瓊脂糖,95乙醇,75乙醇,lkb梯度dna分子量參照物,加樣緩沖液等。【實驗學時】6學時【實驗要求】掌握操作步驟【實驗操作】1、取0.3ml抗凝血,加入1.5ml eppendorf管中,加入1ml的細胞裂解緩沖液,充分混勻使其溶血,轉(zhuǎn)入1.5ml 離心管中,加入蛋白酶k (500ug/ml)20l,混勻。在65恒溫水浴鍋中水浴30
40、min,也可轉(zhuǎn)入37水浴1224h,間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min,取上清液入另一離心管中。2、加2倍體積異丙醇,倒轉(zhuǎn)混勻后,可以看見絲狀物,用100ul 吸頭挑出,晾干,用200ul te 重新溶解。(可進行pcr反應(yīng)等,需要進一步純化的按下列步驟進行)3、加等量的酚/氯仿/異戊醇振蕩混勻, 12000 rpm離心,5min。4、取上層溶液至另一管,加入等體積的氯仿/異戊醇,振蕩混勻, 12000 rpm離心,5min。5、取上層溶液至另一管,加入1/2體積的7.5mol/l乙酸氨加入2倍體積的無水乙醇,混勻后室溫沉淀2min ,12000 rpm離心,10
41、min。6、小心倒掉上清液,將離心管倒置于吸水紙上,將附于管壁的殘余液滴除掉。7、用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次, 12000 rpm離心, 5min。8、小心倒掉上清液,將離心管倒置于吸水紙上,將附于管壁的殘余液滴除掉,室溫干燥。9、加200ul te重新溶解沉淀物。10、1%瓊脂糖凝膠電泳檢測?!舅伎碱}】如何檢測dna濃度及完整性? 五、各教學環(huán)節(jié)學時及進度分配表六、考核方式本課程為必修考查課,考核采用形成性考試加終結(jié)性考試相結(jié)合的方式??己艘笾饕墙虒W大綱要求的基本知識和基本理論,適當考核學生分析問題和解決問題的能力,簡要考核學生對前沿知識的了解程度??己朔绞剑豪碚撜n出勤和課堂表現(xiàn)
42、、實驗課考核、課程結(jié)業(yè)理論考試(閉卷)。課程結(jié)業(yè)理論考試(閉卷)題型及所占分值:選擇題1分40(其中a型題30分,b型題5分 x型題5分);概念題2分5;填空題1分10;簡答題5分5;病例分析7.5分2題。成績構(gòu)成:平時成績(出勤和課堂表現(xiàn)占5%、實驗課成績占20%)占25%;課程結(jié)業(yè)理論考試成績(閉卷)占75%。七、推薦教材和教學參考書書目參考教材:分子生物學檢驗技術(shù)第1版,主編:傅桂蓮 人民衛(wèi)生出版社,2003年出版 主要參考書:分子生物學檢驗技術(shù)習題集主編:樊綺詩、呂建新 人民衛(wèi)生出版社,2007年出版 薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇
43、袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈
44、罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿
45、聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃
46、袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄
47、羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈
48、腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿
49、袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀
50、羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄
51、膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅
52、袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿
53、羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕
54、膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁裊膄薄袀襖芆莇螆袃莈薂螞羂肈蒞薈羈膀薁蒃羀芃莃袂羀肂蠆螈罿膅蒂蚄羈芇蚇薀羇荿蒀衿羆聿芃螅肅膁蒈蟻肄芃芁薇肄羃蕆薃肅膅艿袁肂羋薅螇肁莀莈蚃肀肀薃蕿聿膂莆袈腿芄薁螄膈莇莄蝕膇肆薀蚆螃艿莃薂螂莁蚈袀螂肁蒁螆螁膃蚆螞螀芅葿薈衿莇節(jié)袇袈肇蕆螃袇腿芀蝿袆莂薆蚅袆肁荿薁
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