徒手切片制作方法

1、、目的要求徒手切片法是觀察植物內(nèi)部結(jié)構(gòu)的簡(jiǎn)易制片法。所需的儀器用具 簡(jiǎn)單，藥品經(jīng)濟(jì)，操作方便，費(fèi)時(shí)較短，且易于保持材料的天然色澤和活體 結(jié) 構(gòu)，必要時(shí)，也可經(jīng)過(guò)脫水、染色制成永久制片而保存。但是徒手制片對(duì)于體積 過(guò)小，質(zhì)地太軟或太硬的材料，則難于處理，同時(shí)，也 不能制成連續(xù)切片，這些 均為不足之處。 二 材料 用品 1 v用品 顯微鏡、剃頭刀（或刀片） 毛筆 鎘子培養(yǎng)皿 染色皿（或小酒 杯） 吸 管 載玻片 蓋玻片 吸水紙。1%番紅水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固 綠95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，純酒精 二甲苯和中性樹(shù)膠或加 拿大樹(shù)膠等。 三 方法與步驟 1、選材 所用材料

2、不宜太軟或太硬。一般植物幼嫩的根莖或一些植物的葉片 葉柄等均可 使用此法。質(zhì)地較薄的材料，如葉片，可沿主脈兩側(cè)切成寬約56毫米，長(zhǎng)1 1.5厘米的小塊，夾在夾持物（如胡蘿卜根或馬鈴薯塊莖等）中進(jìn)行切片。使 用夾持物時(shí)，先將夾持物的中央切成兩半，然后將切好的材料夾入，合攏夾持物 進(jìn)行切片，也可將葉片卷成筒狀再切。 2、切片 （1）盛清潔的水于培養(yǎng)皿中。然后用左手的拇指及食指 中指夾住 材料，拇指的 位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外23毫米，材料的切面必須保持水 平方向。 (2) 右手執(zhí)刀(剃頭刀或刀片),平放在左手食指之上，刀口向內(nèi)，自左前方向 右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向

3、內(nèi)平切。 (3) 拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停頓或似拉鋸式，以免損傷材料或 切得不平。 (4) 切片過(guò)程中，如發(fā)現(xiàn)由于用力不均而使材料表面傾斜時(shí)，必須立即削平。 (5) 刀片或剃刀必須鋒利，材料及切片均需經(jīng)常沾水，以保持材料濕潤(rùn) 潤(rùn)滑。 (6) 切下的薄片可隨時(shí)涮入培養(yǎng)皿的水中，以備觀察；等切到相當(dāng)數(shù)量后;再選擇 其中最薄的透明度最大的做成臨時(shí)玻片觀察。如想短期保存，可用水或甘油封 藏。如希望長(zhǎng)期保存所切的材料，則還要經(jīng)過(guò)以下幾個(gè)步驟做成永久玻片標(biāo)本。 3、固定 挑選出符合要求的切片，用毛筆移入盛有70%酒精的染色皿中進(jìn)行固定。固定 時(shí)間為16分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間。 4、染色、脫水、透明 用

4、吸水管吸去70%酒精，染以1%番紅(50%酒精溶液)約30分鐘。 (2)再用吸管吸去番紅，換用70%-85%-95%酒精進(jìn)行沖洗、脫水，每級(jí)酒精 35分鐘。(3)復(fù)染色。吸去酒精，用 0.5%固綠(95%酒精溶液)進(jìn)行復(fù)染色，時(shí)間為0.5分鐘。 (4) 沖洗、脫水。用95%酒精沖洗1次，時(shí)間10秒。后移入純酒精中脫水 2- 3次，每次3- 5分鐘。 （5）透明。吸去純酒精，放入1/2二甲苯一1/2純酒精溶液中脫水和 透明1 次，時(shí)間5分鐘。 （6）吸去脫水透明液，換以純二甲苯透明2次，時(shí)間5分鐘。 5、封片、貼標(biāo)簽 將已透明材料用鑲子或解剖針輕挑于清潔的載玻片上，滴上中性樹(shù)膠，蓋上蓋 玻片進(jìn)行

5、干燥。 在已封好的切片左邊貼上標(biāo)簽，注明材料名稱、制作日期和制作者姓名等項(xiàng), 以便查考。 較好的切片,其木質(zhì)化的細(xì)胞壁和細(xì)胞核可染成紅色,細(xì)胞質(zhì)和纖維素的壁則 常被染成綠色，紅綠相襯，有利于觀察、分辨植物體的內(nèi)部結(jié)構(gòu) 現(xiàn)將徒手切片 制片的簡(jiǎn)要步驟歸納如下 選材-切片-固定（70%酉精廠1%番紅（50%酉精溶 液）染色-70%酉精 沖洗-脫水（85%酒精、95%酒精）-05%固綠（95%酒精 溶液：）復(fù)染色-沖洗（95%酒精1次）-進(jìn)一步脫水（純酒精23次）-透明 （1/2純酒 精十1/2 -甲苯及純二甲苯各二次）-封片（中性樹(shù)膠）-貼標(biāo) 簽。 附：藥品的簡(jiǎn)單配方 （1） 1%番紅：于蒸f留水或

6、50%酉精100毫升中溶入番紅粉末I克，過(guò) 濾后使用。 （2） 0.5%固綠：95%酉精100毫升中加入固綠粉末0.5克。 徒手切片方法的改進(jìn)徒手切片技術(shù)運(yùn)用在植物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的歷史較為悠久，在 石蠟切 片之前，基本上使用徒手切片。它的優(yōu)點(diǎn)在于可以觀察新鮮材料組織 和 細(xì)胞的天然色彩，看到活體細(xì)胞結(jié)構(gòu)狀態(tài)，所以徒手切片運(yùn)用在植 物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué) 中比較普遍。為了克服傳統(tǒng)徒手切片技術(shù)中的不足，我們進(jìn)行了改進(jìn)，改為皮套 加刀片。這種切片方法切片速度快，軟硬質(zhì)材料都可以切，不需要任何夾物，既 經(jīng)濟(jì)適用，又簡(jiǎn)單易行。 1材料用品 雙面刀片1個(gè)，直徑11.5 cm的乳膠管，毛筆 培養(yǎng)皿 載玻片、蓋玻片、 吸

7、水紙，質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的中性紅染液或紅墨水，新鮮的植物根、 莖葉 花藥和子房等。 2切法 將直徑1 -1.5 cm的乳膠管剪成3.5 cm長(zhǎng)的一段，用剪子從中間剖 開(kāi)扣在右手 的大拇指上，注意皮套一定要高于拇指，把要切的植物材料，緊貼在皮套的外 側(cè)。如果是葉可以把它卷緊,所切的材料不可過(guò) 長(zhǎng)，大約2-2.5 cm即可。此 時(shí)用食指與中指和拇指一起把材料捏住，幼嫩的材料捏時(shí)不可用力過(guò)猛，以免損 壞組織細(xì)胞。右手的拇指和食指捏住雙面刀片的一側(cè)，手腕端平，把刀片的前端 與要切的材料保持垂直相接狀態(tài)，先切平材料，然后用腕力向內(nèi)連續(xù)切片，刀片 只要搭住材料就可以垂直切片。 另外還可以用同樣的方法將雙面刀片的先端與材料搭住 垂直、從右向左推切， 如此連續(xù)切下去，然后用毛筆將切得薄而透明的材料刷入 培養(yǎng)皿的水中，避免干 燥。 3染色、封片 把載玻片和蓋玻片用紗布擦拭干凈，放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，加上1滴中性紅染液或紅 墨水，用毛筆在培養(yǎng)皿中選擇薄而透明切片沾到染色液上用解剖針輕輕撥入染色 液中，大約30 s后，吸去染色液，加1滴清水封片。為了防止氣泡的產(chǎn)生，用 左手拇指與食指拿住蓋玻片的兩側(cè)使蓋玻片的基部與滴液先接觸，右手握解剖針 挑著蓋玻片從左向右徐徐放下蓋玻片，使氣體從一側(cè)排出，如果有多余的水溢 出，可用吸 水紙吸干，再進(jìn)行下一步的鏡下觀察 4鏡檢