生物選修三單克隆抗體

1、B淋巴細(xì)胞與抗體淋巴細(xì)胞與抗體 B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以 產(chǎn)生抗體。產(chǎn)生抗體。 動(dòng)物體內(nèi)的動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生 百萬種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗百萬種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗 原具有特異性免疫作用。原具有特異性免疫作用。 每一個(gè)每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種 抗體?？贵w。 1 1、概念、概念由單個(gè)由單個(gè)B B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性 繁殖（克隆），形成基因型相同的細(xì)胞繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞 群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、 特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。

2、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。 2 2、 特點(diǎn)特點(diǎn)： 特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高 二. 單克隆抗體 設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案： 一個(gè)一個(gè)B B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 小鼠骨髓瘤細(xì)胞能夠無限增殖小鼠骨髓瘤細(xì)胞能夠無限增殖 雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞 二、單克隆抗體二、單克隆抗體 有無限增殖能力（失去凋亡機(jī)制，失去接觸抑制等）的細(xì)有無限增殖能力（失去凋亡機(jī)制，失去接觸抑制等）的細(xì) 胞是腫瘤細(xì)胞，而具有轉(zhuǎn)移能力的腫瘤細(xì)胞，稱為癌細(xì)胞胞是腫瘤細(xì)胞，而具有轉(zhuǎn)移能力的腫瘤細(xì)胞，稱為癌細(xì)胞 ，所以說，瘤細(xì)胞不能等于癌細(xì)胞。，所以說，瘤細(xì)胞不能等于癌細(xì)胞。 骨髓瘤細(xì)胞是癌細(xì)胞嗎骨髓

3、瘤細(xì)胞是癌細(xì)胞嗎? ? 如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？ n利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能 n利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性 n利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲 得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交 瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞 n利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤 細(xì)胞細(xì)胞 2. 單克隆抗體 免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞 融合 骨髓瘤細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞 注射特定 抗原蛋白 選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng) 專一抗體 檢驗(yàn)陽性 專一抗體 檢驗(yàn)陽性 注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng) 單克隆抗體單克隆抗體 克隆

4、雜交細(xì)胞 分開不同雜交細(xì)胞，克隆 專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞 單克隆抗體制備過程示意圖 單克隆抗體制備過程示意圖 多種雜交細(xì)胞 3、單克隆抗體制備過程、單克隆抗體制備過程 注射抗原注射抗原 B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞 細(xì)胞融合、篩選細(xì)胞融合、篩選 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng) 篩選，繼續(xù)培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng) 足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生 特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群 體外培養(yǎng)體外培養(yǎng) 注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔 單克隆抗體單克隆抗體 能產(chǎn)生抗體能產(chǎn)生抗體 能能 無無 限限 增增 殖殖 既能產(chǎn)生抗體又既能產(chǎn)生抗體又 能無限增殖能無限增殖 3、單克隆抗體制備過程、單克

5、隆抗體制備過程 給小鼠給小鼠 注注 射特定抗原射特定抗原 細(xì)胞融合、篩選細(xì)胞融合、篩選 篩選，繼續(xù)培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng) 足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生 特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群 體外培養(yǎng)體外培養(yǎng) 注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔 單克隆抗體單克隆抗體 B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 思考：思考： 1、本過程利用了哪些原理？、本過程利用了哪些原理？ 免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理 2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？細(xì)胞融合？ 這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的這樣融

6、合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的 遺傳物質(zhì)，不僅具有遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而細(xì)胞分泌抗體的能力，而 且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單 克隆抗體克隆抗體 3 3、整個(gè)制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選、整個(gè)制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選? ? （第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種），（多種）， 第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有 一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng)，然后一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng)，然后 再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。由。由 于該細(xì)胞

7、群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來的于該細(xì)胞群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來的 ，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的 ，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的單克隆單克隆 確有確有單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞克隆的含義，只不過克隆的克隆的含義，只不過克隆的 不是不是B B淋巴細(xì)胞，而是淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞。）。） 4、單克隆抗體的應(yīng)用、單克隆抗體的應(yīng)用 與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)， 靈敏度高靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯，優(yōu)越性十分明顯。 （1）、作為診斷試劑）、作為診斷試劑 單克隆抗體的應(yīng)用單克

8、隆抗體的應(yīng)用 （2）、用于治療疾病和運(yùn)載藥物）、用于治療疾病和運(yùn)載藥物 作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治治 療腫瘤療腫瘤 資料資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。 許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、 內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一 個(gè)必然趨勢(shì)。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別個(gè)必然趨勢(shì)。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別 和定位體內(nèi)和定位體內(nèi)“病灶

9、病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于也引起人們的注意，目前，主要用于 腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。 用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，靈敏度 很高，在妊娠第8天就可以做出診斷，比原來的診斷方法提前了10天左右， 可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對(duì)胎兒造成不利影響。該 方法檢測的準(zhǔn)確率在90以上。 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合 單克隆抗體制備單克隆抗體制備 細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植 動(dòng)物動(dòng)物 細(xì)胞細(xì)胞 工程工程 技術(shù)技術(shù) 動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程 的基礎(chǔ)的基礎(chǔ) 知識(shí)結(jié)構(gòu) 知識(shí)結(jié)構(gòu) 三個(gè)“一” 一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方

10、法 滅活的病毒 一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì) 教學(xué)反饋 1.1.單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的 （ ） A.BA.B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B.TB.T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 C.C.骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞 D.D.雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 D 2.“2.“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”是指是指 （ ） A.A.單克隆抗體單克隆抗體 B.B.雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 C.C.產(chǎn)生特定抗體的產(chǎn)生特定抗體的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.在單克隆抗體上連接抗癌在單克隆抗體上連接抗癌 藥物藥物 D . 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和單克隆抗體制備過程中，骨髓

11、瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞， 在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 A B C D C 下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗 體實(shí)驗(yàn)方案體實(shí)驗(yàn)方案 2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？ 4、

12、圖中、圖中B為為_過程，常用過程，常用 _作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼 承承_的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能 _,又能又能_。 1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是_ 3、A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得 _,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_ 5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括 _培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個(gè)階段。培養(yǎng)兩個(gè)階段。 制備單克隆抗體制備單克隆抗體 B細(xì)胞細(xì)胞 抗體抗體 細(xì)胞融合細(xì)胞融合 滅活病毒滅活病毒 雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞 分泌抗體分泌抗體無限增殖無限增殖 原代原代傳代傳代 B 體外培養(yǎng)體外培養(yǎng) 骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞

13、 足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群 注射到注射到 小鼠腹腔小鼠腹腔 A C 教學(xué)參考教學(xué)參考 1.已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例還有哪些？ 生物種類 細(xì)胞來源 成功年代 酵母菌雞 原生質(zhì)體血紅細(xì)胞 1975年 人胡蘿卜 腹水癌細(xì)胞原生質(zhì)體 1976年 人小鼠 纖維肉瘤細(xì)胞畸胎瘤細(xì)胞 1978年 要知道更多的實(shí)例，需經(jīng)常查閱更多科研報(bào)道。 2.為什么不用兩個(gè)而要用多個(gè)細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞間的融合？ 就目前常用的細(xì)胞融合方法來看，不管是用物理的、化學(xué)的方法，還 是生物的方法，其融合率都不可能是100%。僅用兩個(gè)細(xì)胞融合，其效率太 低，不一定能得到融合細(xì)胞。更重要的是，即使兩個(gè)細(xì)胞已發(fā)生融合，但 并不一定是研

14、究者期望得到的細(xì)胞類型。目前動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最有價(jià)值 的應(yīng)用就是單克隆抗體的制備。我們以制備單克隆抗體為例來說明這一問 題。我們知道，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬種以上，但是每一 個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，如果僅取一個(gè)脾細(xì)胞（含B淋巴細(xì)胞） 和一個(gè)瘤細(xì)胞雜交，我們不能確定該脾細(xì)胞分泌的抗體是否正是我們所需 要的；若用大量的脾細(xì)胞和瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，就可以從融合細(xì)胞中篩選出 能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。 3.如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？ 融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì) 胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用“有限 稀釋法”來

15、選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔 細(xì)胞不超過一個(gè)，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌 的抗體（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的 培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽 性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行34次，直至確信每個(gè)孔中 增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。 1 1、概念、概念由單個(gè)由單個(gè)B B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性 繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞繁殖（克?。纬苫蛐拖嗤募?xì)胞 群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、 特異性強(qiáng)的抗體稱

16、為單克隆抗體。特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。 2 2、 特點(diǎn)特點(diǎn)： 特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高 二. 單克隆抗體 免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞 融合 骨髓瘤細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞 注射特定 抗原蛋白 選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng) 專一抗體 檢驗(yàn)陽性 專一抗體 檢驗(yàn)陽性 注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng) 單克隆抗體單克隆抗體 克隆雜交細(xì)胞 分開不同雜交細(xì)胞，克隆 專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞 單克隆抗體制備過程示意圖 單克隆抗體制備過程示意圖 多種雜交細(xì)胞 4、單克隆抗體的應(yīng)用、單克隆抗體的應(yīng)用 與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)， 靈敏度高靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯，優(yōu)越性

17、十分明顯。 （1）、作為診斷試劑）、作為診斷試劑 單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用 （2）、用于治療疾病和運(yùn)載藥物）、用于治療疾病和運(yùn)載藥物 作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治治 療腫瘤療腫瘤 資料資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。 許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、 內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一 個(gè)必然趨勢(shì)。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別個(gè)必然趨

18、勢(shì)。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別 和定位體內(nèi)和定位體內(nèi)“病灶病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于也引起人們的注意，目前，主要用于 腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。 教學(xué)反饋 1.1.單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的 （ ） A.BA.B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B.TB.T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 C.C.骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞 D.D.雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 D 2.“2.“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”是指是指 （ ） A.A.單克隆抗體單克隆抗體 B.B.雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 C.C.產(chǎn)生特定抗體的產(chǎn)生特定抗體的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.在單克隆抗體上連接抗癌在單克隆抗體上連接抗