紫外-可見分光光度法

1、第七章第七章 紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法 學(xué)習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)目標(biāo) 知識(shí)要求知識(shí)要求 能力要求能力要求 知識(shí)要求知識(shí)要求 1掌握光的吸收定律概念、表達(dá)式及條件，吸光系數(shù)和掌握光的吸收定律概念、表達(dá)式及條件，吸光系數(shù)和 吸收光譜的意義，常用定量分析方法的原理和應(yīng)用。吸收光譜的意義，常用定量分析方法的原理和應(yīng)用。 2熟悉紫外熟悉紫外- -可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)、吸光度測量可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)、吸光度測量 條件的選擇、偏離光的吸收定律的主要因素。條件的選擇、偏離光的吸收定律的主要因素。 3了解光譜分析法的分類、紫外了解光譜分析法的分類、紫外- -可見吸收光譜的產(chǎn)生可見吸收光譜的產(chǎn)生 機(jī)制、

2、定性分析的依據(jù)和方法。機(jī)制、定性分析的依據(jù)和方法。 案例導(dǎo)入 在夏天參加戶外活動(dòng)時(shí)，如果天氣晴朗，就應(yīng)該注在夏天參加戶外活動(dòng)時(shí)，如果天氣晴朗，就應(yīng)該注 意保護(hù)皮膚，否則，暴露在火辣辣太陽之下的皮膚，意保護(hù)皮膚，否則，暴露在火辣辣太陽之下的皮膚， 數(shù)小時(shí)后就會(huì)出現(xiàn)紅腫、瘙癢、發(fā)熱、刺痛癥狀，數(shù)數(shù)小時(shí)后就會(huì)出現(xiàn)紅腫、瘙癢、發(fā)熱、刺痛癥狀，數(shù) 日后出現(xiàn)蛻皮現(xiàn)象，這表明太陽光中有一種光線能傷日后出現(xiàn)蛻皮現(xiàn)象，這表明太陽光中有一種光線能傷 害生物細(xì)胞?？茖W(xué)家研究證實(shí)，這種光線是紫外線。害生物細(xì)胞。科學(xué)家研究證實(shí)，這種光線是紫外線。 根據(jù)可見光、紫外光與物質(zhì)分子的相互作用建立了根據(jù)可見光、紫外光與物質(zhì)分子

3、的相互作用建立了 紫外紫外- -可見分光光度法?？梢姺止夤舛确?。 u根據(jù)待測物質(zhì)（原子或分子）發(fā)射或吸收的電磁輻根據(jù)待測物質(zhì)（原子或分子）發(fā)射或吸收的電磁輻 射，以及待測物質(zhì)與電磁輻射的相互作用而建立起射，以及待測物質(zhì)與電磁輻射的相互作用而建立起 來的定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法，統(tǒng)稱為光學(xué)分析來的定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法，統(tǒng)稱為光學(xué)分析 法。法。 u利用光譜進(jìn)行定性、定量和結(jié)構(gòu)分析的方法稱為光利用光譜進(jìn)行定性、定量和結(jié)構(gòu)分析的方法稱為光 譜分析法，簡稱光譜法。譜分析法，簡稱光譜法。 紫外紫外-可見分光光度法：可見分光光度法：研究物質(zhì)在紫外研究物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)可見光區(qū)（200760 nm）分子

4、吸收光譜分子吸收光譜的光譜分析法的光譜分析法 第一節(jié) 概述 1 1電磁輻射（電磁波，光）電磁輻射（電磁波，光） ：以巨大速度通過空間，不需：以巨大速度通過空間，不需 要任何物質(zhì)作為傳播媒介的粒子流。要任何物質(zhì)作為傳播媒介的粒子流。 1 ， c 波長范圍波長范圍：紫外區(qū)紫外區(qū) 200-400nm 可見光區(qū)可見光區(qū) 400-760nm 電磁輻射的性質(zhì)電磁輻射的性質(zhì)：具有波、粒二象性：具有波、粒二象性 波動(dòng)性：波動(dòng)性： 粒子性：粒子性： c hhE E，注： 第一節(jié) 概述 單色光單色光: : 單一波長的光束單一波長的光束 復(fù)色光復(fù)色光: : 含有多種波長的光束含有多種波長的光束 電磁波譜電磁波譜:

5、: 以波長大小順序排列的電磁波譜圖以波長大小順序排列的電磁波譜圖 波長波長 10pm 300pm 200nm 400nm 800nm 500m mm 1cm 1m 光譜光譜 射線射線 X射線射線 紫外光紫外光 可見光可見光 紅外光紅外光 微波微波 無線電波無線電波 方法方法 光譜法光譜法 分光光度法分光光度法 光譜法光譜法 核磁共振核磁共振 可可 見見 光光 第一節(jié) 概述 紅光與綠光互補(bǔ)、紫光與黃光互補(bǔ)，等等。紅光與綠光互補(bǔ)、紫光與黃光互補(bǔ)，等等。 白光的組成白光的組成 白光的色散白光的色散 藍(lán)藍(lán) 黃黃 紫紫 紅紅 綠綠 紫紫 黃黃 綠綠 青青 藍(lán)藍(lán) 橙橙 紅紅 青青 一、一、物質(zhì)對光的選擇性

6、吸收物質(zhì)對光的選擇性吸收 第一節(jié) 概述 二、透光率與吸光度二、透光率與吸光度 uI0Ia + It + Ir uI0Ia + It lgAT 第一節(jié) 概述 u透射光透射光強(qiáng)度強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度I0的比值稱為透光率或透光的比值稱為透光率或透光度度T u透光率的負(fù)對數(shù)為吸光度透光率的負(fù)對數(shù)為吸光度A 【例題例題9-2 9-2 】（1 1）透光率）透光率T T為為50%50%，其吸光度，其吸光度 A A為多少？（為多少？（2 2）吸光度）吸光度A A為為0.700.70，其透光率，其透光率T T 為多少？為多少？ 解解:（1）透光率）透光率T=50%=0.50,其吸光度為：其吸光度為：

7、 A=-lgT=-lg0.50=0.30 (2）吸光度）吸光度A=0.70,其夠光率為：其夠光率為： T=10-A=10-0.70=0.20=20% 或或 0.70=-lgT lgT=-0.70,T=0.20 第一節(jié) 概述 三、三、吸收光譜曲線吸收光譜曲線 u概念：以波長概念：以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)所描為縱坐標(biāo)所描 繪的曲線，稱為吸收光譜曲線，簡稱吸收光譜。繪的曲線，稱為吸收光譜曲線，簡稱吸收光譜。 u特點(diǎn)：在相同條件下，同一物質(zhì)的不同濃度的溶特點(diǎn)：在相同條件下，同一物質(zhì)的不同濃度的溶 液，其吸收光譜曲線相似，且液，其吸收光譜曲線相似，且max相同。這是定相同。這是定

8、 性分析的基礎(chǔ)。性分析的基礎(chǔ)。 UV-Vis吸收光譜的常見術(shù)語吸收光譜的常見術(shù)語 吸收峰吸收峰 max 谷谷 min 肩峰肩峰 sh 末端吸收末端吸收:吸收光譜曲線波長最短吸收光譜曲線波長最短 的一段，吸光度相當(dāng)大，但不成的一段，吸光度相當(dāng)大，但不成 峰的部分。峰的部分。 強(qiáng)帶：強(qiáng)帶：吸光度大于吸光度大于104的吸收峰的吸收峰 弱帶：弱帶：吸光度小于吸光度小于103的吸收峰的吸收峰 第一節(jié) 概述 吸收光譜曲線示意圖吸收光譜曲線示意圖 A 480 520 560nm max=515 第一節(jié) 概述 四、紫外四、紫外- -可見分光光度的特點(diǎn)可見分光光度的特點(diǎn) 1 1紫外紫外- -可見光的波長范圍是可

9、見光的波長范圍是 A200400nm B400760nm C200760nm D360800nm 2 2下列敘述錯(cuò)誤的是下列敘述錯(cuò)誤的是 A A光的能量與其波長成反比光的能量與其波長成反比 B B有色溶液越濃，對光的吸收也越強(qiáng)烈有色溶液越濃，對光的吸收也越強(qiáng)烈 C C物質(zhì)對光的吸收有選擇性物質(zhì)對光的吸收有選擇性 D D光的能量與其頻率成反比光的能量與其頻率成反比 第一節(jié) 概述 3 3紫外紫外- -可見分光光度法屬于可見分光光度法屬于 A A原子發(fā)射光譜法原子發(fā)射光譜法 B B原子吸收光譜法原子吸收光譜法 C C分子發(fā)射光譜法分子發(fā)射光譜法 D D分子吸收光譜法分子吸收光譜法 4 4分子吸收可見

10、分子吸收可見- -紫外光后，可發(fā)生哪種類型的紫外光后，可發(fā)生哪種類型的 （）分子能級躍遷（）分子能級躍遷 A A轉(zhuǎn)動(dòng)能級躍遷轉(zhuǎn)動(dòng)能級躍遷 B B振動(dòng)能級躍遷振動(dòng)能級躍遷 C C電子能級躍遷電子能級躍遷 D D以上都能發(fā)生以上都能發(fā)生 第一節(jié) 概述 第一節(jié) 概述 點(diǎn)滴積累點(diǎn)滴積累 1光的本質(zhì)是電磁波；物質(zhì)對光的吸收具有光的本質(zhì)是電磁波；物質(zhì)對光的吸收具有 選擇性。選擇性。 2吸光度與透光率的關(guān)系是吸光度與透光率的關(guān)系是 : 3吸收曲線是溶液在一定條件下的吸光度隨吸收曲線是溶液在一定條件下的吸光度隨 入射光波長變化而變化的曲線。入射光波長變化而變化的曲線。 二、二、 Lambert-Beer定律定

11、律 I0 It l 光的吸收定光的吸收定律律 A- lg T=lg（I0/It) = k c l A：吸光度吸光度 T：透光率，透光率，T=It/I0 l：液層厚度液層厚度(光程長度光程長度) c：溶液的濃溶液的濃度度 k：吸光系數(shù)吸光系數(shù) 朗伯朗伯(Lambert)定律：定律：A=K1L 比耳比耳(Beer)定律：定律：A =K2 c 單色光單色光 適用范圍：可見光、紫外光適用范圍：可見光、紫外光 和紅外光；均勻無散射的溶和紅外光；均勻無散射的溶 液、固體和氣體。液、固體和氣體。 I0=It+Ia A-lg T= k l c 吸收光譜法的基本定律吸收光譜法的基本定律， 是是定量測定的依據(jù)定量

12、測定的依據(jù) A與與c為簡單的正比關(guān)系；為簡單的正比關(guān)系； T與與c是指數(shù)關(guān)系是指數(shù)關(guān)系 A具加合性具加合性 設(shè)共存物為設(shè)共存物為a、b、c， 則：則：A= ka l ca + kb l cb + kc l cc 1Lamber-Beer定律的適用條件（前提）定律的適用條件（前提） 入射光為單色光入射光為單色光 溶液是稀溶液溶液是稀溶液 1、物理意義：指吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時(shí)的吸光度、物理意義：指吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時(shí)的吸光度 2、不同物質(zhì)、不同物質(zhì)對同一對同一波長的單色光，有不同的吸光系數(shù)，波長的單色光，有不同的吸光系數(shù)，k， 物質(zhì)對光的吸收能力物質(zhì)對光的吸收能力。吸光物質(zhì)在一

13、定波長和溶劑條件下的。吸光物質(zhì)在一定波長和溶劑條件下的 特征常數(shù)，是定性和定量的依據(jù)。特征常數(shù)，是定性和定量的依據(jù)。 3、表示方法：、表示方法：k值及單位與值及單位與c和和l采用的單位有關(guān)采用的單位有關(guān) max表明了該吸收物質(zhì)最大限度的吸光能力，它的大小反映了表明了該吸收物質(zhì)最大限度的吸光能力，它的大小反映了 光度法測定某物質(zhì)可能達(dá)到的靈敏度。光度法測定某物質(zhì)可能達(dá)到的靈敏度。 104 靈敏度高靈敏度高 104 103 靈敏度中等靈敏度中等 103 靈敏度低靈敏度低 二、吸光系數(shù) LcA %1 1 E cm 2、比吸光系數(shù)（百分吸光系數(shù)）、比吸光系數(shù)（百分吸光系數(shù)） 在某一波長下，溶液濃度為在

14、某一波長下，溶液濃度為1mol/L、液層厚度為液層厚度為1cm 時(shí)的吸光度。單位：時(shí)的吸光度。單位：L/(molcm) 在某一波長下在某一波長下,溶液濃度溶液濃度為為1（g/100ml)、液層厚度液層厚度 為為1cm時(shí)的吸光度。單位：時(shí)的吸光度。單位：mL/(gcm) 1% 1cm E 10 M LcEA cm %1 1 1、摩爾吸光系數(shù)、摩爾吸光系數(shù) 吸光系數(shù)的大小，取決于物質(zhì)（溶質(zhì)、溶劑）吸光系數(shù)的大小，取決于物質(zhì)（溶質(zhì)、溶劑） 本性、溫度和光的波長。本性、溫度和光的波長。 1）物質(zhì)不同，吸光系數(shù)不同，是物質(zhì)的特征常數(shù)；）物質(zhì)不同，吸光系數(shù)不同，是物質(zhì)的特征常數(shù)； 2）溶劑不同，同一物質(zhì)吸

15、光系數(shù)不同，故常在描述）溶劑不同，同一物質(zhì)吸光系數(shù)不同，故常在描述 吸光系數(shù)時(shí)需指明某溶劑；吸光系數(shù)時(shí)需指明某溶劑； 3）光的波長不同，吸光系數(shù)不同。）光的波長不同，吸光系數(shù)不同。 某化合物的濃度為某化合物的濃度為4.210-3g/L，用用2.0cm的吸收的吸收 池在池在470nm下測得的透光率為下測得的透光率為30.0%，該化合物的，該化合物的 分子量為分子量為250，求其在，求其在470nm處的摩爾吸光系數(shù)和處的摩爾吸光系數(shù)和 百分吸光系數(shù)。百分吸光系數(shù)。 例：例： lc A 1% 1cm E 解：解： A = -lgT=-lg0.300=0.523 c = 4.210-3g/L = 4.

16、210-4g/100ml l =2.0cm 623 0 . 2102 . 4 523. 0 E 4 1% 1cm 41% 1cm 1056. 1623 10 250 E 10 M 某有色溶液的物質(zhì)的量濃度濃度為某有色溶液的物質(zhì)的量濃度濃度為c c，在一定條件下用在一定條件下用 1 1cmcm比色杯測得吸光度為比色杯測得吸光度為A A，則摩爾吸光系數(shù)應(yīng)為：則摩爾吸光系數(shù)應(yīng)為： A AcAcA B BcMcM C CA/C DA/C DC/A C/A 第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理 五、偏離五、偏離Lambert-Beer定律的因素定律的因素 （一）化學(xué)因素（一）化學(xué)因素 吸光物質(zhì)溶液的濃

17、度吸光物質(zhì)溶液的濃度 稀溶液稀溶液 吸光吸光性物質(zhì)的化學(xué)變化性物質(zhì)的化學(xué)變化 溶劑溶劑的影響的影響 A l c （二）光學(xué)因素 (1)非單色光非單色光 l 對策：選擇比較好的單色器對策：選擇比較好的單色器 入射波長選定在待測物質(zhì)的最大吸收波長處入射波長選定在待測物質(zhì)的最大吸收波長處 嚴(yán)格地講，吸收定律只適用于單色光。單色光指具嚴(yán)格地講，吸收定律只適用于單色光。單色光指具 有單一波長的光，但實(shí)際上不能得到純粹的單色光，有單一波長的光，但實(shí)際上不能得到純粹的單色光， 而是波長范圍較窄的復(fù)合光。對于同一物質(zhì)對不同而是波長范圍較窄的復(fù)合光。對于同一物質(zhì)對不同 波長的光的吸收程度不同，所以導(dǎo)致對光的吸波

18、長的光的吸收程度不同，所以導(dǎo)致對光的吸收定收定 律律的偏離。的偏離。 (2)雜散光：單色光中混有一些不在譜帶寬度范圍內(nèi)、雜散光：單色光中混有一些不在譜帶寬度范圍內(nèi)、 與所需的波長不符的光，稱為雜散光與所需的波長不符的光，稱為雜散光 (3)散射和反射光散射和反射光 (4)非平行光非平行光 吸收質(zhì)點(diǎn)的散射（膠體、乳濁液或懸濁液）吸收質(zhì)點(diǎn)的散射（膠體、乳濁液或懸濁液） 吸收池內(nèi)外界面的反射吸收池內(nèi)外界面的反射 測得的吸光度偏高測得的吸光度偏高 l 用參比溶液用參比溶液(空白溶液空白溶液) 對比補(bǔ)償對比補(bǔ)償 u對策：對策： 第二節(jié) 紫外-可見分光光度法的基本原理 點(diǎn)滴積累點(diǎn)滴積累 1 1光的吸收定律表

19、明了吸光度與液層厚度光的吸收定律表明了吸光度與液層厚度 和濃度之間的關(guān)系，它是吸收光譜法定量分析和濃度之間的關(guān)系，它是吸收光譜法定量分析 的依據(jù)。的依據(jù)。 2 2吸光系數(shù)的表示方法有多種，隨待測溶吸光系數(shù)的表示方法有多種，隨待測溶 液濃度的不同標(biāo)度而不同。液濃度的不同標(biāo)度而不同。 3 3偏離光的吸收定律的因素主要有化學(xué)因偏離光的吸收定律的因素主要有化學(xué)因 素和光學(xué)因素。素和光學(xué)因素。 第三節(jié) 紫外-可見分光光度計(jì) 一、紫外一、紫外- -可見分光光度計(jì)的主要部件：可見分光光度計(jì)的主要部件： 光源光源單色器單色器吸收池吸收池檢測器檢測器訊號(hào)處理與顯示器訊號(hào)處理與顯示器 一、主要部件：一、主要部件：

20、 1、光源：、光源： 發(fā)出所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，有發(fā)出所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，有 足夠強(qiáng)度且穩(wěn)定（不隨足夠強(qiáng)度且穩(wěn)定（不隨而改變）而改變） 分光光度計(jì)中常用的光源有：分光光度計(jì)中常用的光源有： 熱輻射光源：熱輻射光源： 鎢燈，鹵鎢燈（可見、近紅外光區(qū)）鎢燈，鹵鎢燈（可見、近紅外光區(qū)） 可可發(fā)射發(fā)射340-2500nm的連續(xù)光譜的連續(xù)光譜 氣體放電光源：氫燈，氘燈（紫外光區(qū)）氣體放電光源：氫燈，氘燈（紫外光區(qū)） 發(fā)射發(fā)射150-400nm連續(xù)光譜連續(xù)光譜 氙燈氙燈 氫燈氫燈 鎢燈鎢燈 2、單色器：、單色器： 是從連續(xù)光譜中獲得所需波段的單色光的裝置。是從連續(xù)光譜中獲得所需波段的單色光的裝置

21、。 （1）入射狹縫）入射狹縫:限制雜散光進(jìn)入限制雜散光進(jìn)入 （2）準(zhǔn)直鏡（透鏡或凹面反射鏡），它使入射光束變?yōu)椋?zhǔn)直鏡（透鏡或凹面反射鏡），它使入射光束變?yōu)槠狡?行光束行光束。 （3）色散元件：）色散元件：棱鏡或光柵棱鏡或光柵，它使不同波長的入射光色散，它使不同波長的入射光色散 開來。開來。 （4） 聚焦透鏡或聚焦凹面反射鏡聚焦，它使不同波長的光聚聚焦透鏡或聚焦凹面反射鏡聚焦，它使不同波長的光聚 焦在焦面的不同位置。焦在焦面的不同位置。 （5）出射狹縫）出射狹縫 作用作用：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。 但狹縫但狹縫，光強(qiáng)度，光強(qiáng)度，靈敏度，

22、靈敏度 3、吸收池（比色皿或比色杯）：、吸收池（比色皿或比色杯）： 用于盛放溶液并提供一定吸光厚度的器皿。它由透用于盛放溶液并提供一定吸光厚度的器皿。它由透 明的明的光學(xué)玻璃或石英材料光學(xué)玻璃或石英材料組成。玻璃吸收池只能用組成。玻璃吸收池只能用 于可見光區(qū)，而石英吸收池在紫外和可見光區(qū)都可于可見光區(qū)，而石英吸收池在紫外和可見光區(qū)都可 使用。光徑一般在使用。光徑一般在0.1-10cm，最常用的吸收池吸光，最常用的吸收池吸光 厚度為厚度為1cm。高濃度常選光徑較小的，低濃度選光。高濃度常選光徑較小的，低濃度選光 徑較大的。徑較大的。 （四）檢測器：利用光電效應(yīng)，將光強(qiáng)度轉(zhuǎn)換成（四）檢測器：利用光

23、電效應(yīng)，將光強(qiáng)度轉(zhuǎn)換成 電流訊號(hào)。（光信號(hào)電流訊號(hào)。（光信號(hào)電信號(hào)）電信號(hào)） 光檢測器：光電池、光電管、光電倍增管光檢測器：光電池、光電管、光電倍增管 和光二極管陣列檢測器。和光二極管陣列檢測器。 （五）信號(hào)顯示系統(tǒng)：（五）信號(hào)顯示系統(tǒng)： 將信號(hào)以適當(dāng)方式顯示或記錄。將信號(hào)以適當(dāng)方式顯示或記錄。 常用的顯示器有直讀檢流計(jì)、微安表、電位計(jì)、數(shù)常用的顯示器有直讀檢流計(jì)、微安表、電位計(jì)、數(shù) 字電壓表、記錄儀、示波器及數(shù)據(jù)處理機(jī)等。很多字電壓表、記錄儀、示波器及數(shù)據(jù)處理機(jī)等。很多 型號(hào)的分光光度計(jì)裝配有微處理機(jī)，既可對分光光型號(hào)的分光光度計(jì)裝配有微處理機(jī)，既可對分光光 度計(jì)進(jìn)行操作控制，又可進(jìn)行數(shù)據(jù)處

24、理。度計(jì)進(jìn)行操作控制，又可進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。 二、分光光度計(jì)的類型：二、分光光度計(jì)的類型： （一）單波長單光束分光光度計(jì)：（一）單波長單光束分光光度計(jì)： 0.575 光源光源單色器單色器 吸收池吸收池 檢測器檢測器顯示顯示 只有一條光路，通過變換參比池和樣品池的位置，使它們只有一條光路，通過變換參比池和樣品池的位置，使它們 分別置于光路來進(jìn)行測定分別置于光路來進(jìn)行測定 這類分光光度計(jì)的特點(diǎn)是：一般用鎢這類分光光度計(jì)的特點(diǎn)是：一般用鎢 燈或氫燈作光源，燈或氫燈作光源，結(jié)構(gòu)簡單，價(jià)格便宜。結(jié)構(gòu)簡單，價(jià)格便宜。 主要適用于主要適用于定量分析，而不適用于作定性定量分析，而不適用于作定性 分析。分析。另外，

25、結(jié)果受電源的波動(dòng)影響較大。另外，結(jié)果受電源的波動(dòng)影響較大。 （二）（二）單波長雙光束分光光度計(jì)單波長雙光束分光光度計(jì) 光源光源 比比 值值 單色器單色器 吸收池吸收池檢測器檢測器 顯示顯示 光束分裂器光束分裂器 l雙光束分光光度計(jì)是自動(dòng)比較了透過參比溶液雙光束分光光度計(jì)是自動(dòng)比較了透過參比溶液 和樣品溶液的光的強(qiáng)度，它和樣品溶液的光的強(qiáng)度，它不受光源（電源）不受光源（電源） 變化變化的影響。的影響。 l雙光束分光光度計(jì)還能進(jìn)行波長掃描，并自動(dòng)雙光束分光光度計(jì)還能進(jìn)行波長掃描，并自動(dòng) 記錄下各波長下的吸光度，很快就可得到試液記錄下各波長下的吸光度，很快就可得到試液 的吸收光譜。所以能用于定性分析

26、。的吸收光譜。所以能用于定性分析。 國產(chǎn)國產(chǎn)710型、型、 730型、型、 740型、日立型、日立UV-340型、型、U- 4100等屬于這種類型。等屬于這種類型。 光光 源源 單色器單色器 單色器單色器 檢測器檢測器 切切 光光 器器 狹狹 縫縫 吸吸 收收 池池 3 3、雙波長分光光度計(jì)、雙波長分光光度計(jì)： 用兩種不同波長的單色光束交替照射到樣品溶液上，用兩種不同波長的單色光束交替照射到樣品溶液上， 不需使用參比溶液，測得的是樣品在兩種波長下的吸不需使用參比溶液，測得的是樣品在兩種波長下的吸 光度之差。光度之差。 2 1 1 1、波長范圍、波長范圍 2 2、波長準(zhǔn)確度、波長準(zhǔn)確度 3 3、

27、波長重現(xiàn)性、波長重現(xiàn)性 4 4、狹縫或譜帶寬、狹縫或譜帶寬 5 5、分辨率、分辨率 6 6、雜散光、雜散光 7 7、透光率測量范圍、透光率測量范圍 8 8、吸光度測量范圍、吸光度測量范圍 9 9、測光準(zhǔn)確度、測光準(zhǔn)確度 1010、測光重現(xiàn)性、測光重現(xiàn)性 三、分光光度計(jì)的光學(xué)性能三、分光光度計(jì)的光學(xué)性能 第三節(jié) 紫外-可見分光光度計(jì) 點(diǎn)滴積累點(diǎn)滴積累 u紫外紫外- -可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)相同，都可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)相同，都 由光源、單色器、吸收池、檢測器、訊號(hào)處由光源、單色器、吸收池、檢測器、訊號(hào)處 理與顯示器等主要部件構(gòu)成，但不同型號(hào)儀理與顯示器等主要部件構(gòu)成，但不同型號(hào)儀 器的外形差

28、別很大，質(zhì)量和價(jià)格相差懸殊，器的外形差別很大，質(zhì)量和價(jià)格相差懸殊， 操作方法迥異，使用之前應(yīng)仔細(xì)閱讀儀器使操作方法迥異，使用之前應(yīng)仔細(xì)閱讀儀器使 用說明書。用說明書。 C C 0 0.4 1.2 2.0 2.8 3.6 2 4 6 % A 暗噪聲暗噪聲 訊號(hào)噪聲訊號(hào)噪聲 誤差曲線誤差曲線 從圖中可以看出：從圖中可以看出： A值控制在值控制在0.2-0.7之間之間 (或或T值在值在20%-65%之間）之間） 相對誤差較小。相對誤差較小。 方法：改變待測液的濃度方法：改變待測液的濃度 選用適當(dāng)厚度的吸收池選用適當(dāng)厚度的吸收池 1. 1. 吸光度范圍的選擇吸光度范圍的選擇 第四節(jié)第四節(jié) 分析條件的選

29、擇分析條件的選擇 （一）、儀器測量條件的選擇一）、儀器測量條件的選擇 一般應(yīng)該選擇一般應(yīng)該選擇max為入射光波長。為入射光波長。 如果如果max處有共存組分干擾時(shí)，則應(yīng)考慮選擇靈處有共存組分干擾時(shí)，則應(yīng)考慮選擇靈 敏度稍低但能避免干擾的入射光波長。敏度稍低但能避免干擾的入射光波長。 下測定須在 較小的左右 測定靈敏度高 max max maxmax lC A E A A 2.選擇適當(dāng)?shù)娜肷洳ㄩL選擇適當(dāng)?shù)娜肷洳ㄩL 二、顯色反應(yīng)條件的選擇二、顯色反應(yīng)條件的選擇 顯色反應(yīng)：在光度分析中將試樣中的待測組分顯色反應(yīng)：在光度分析中將試樣中的待測組分 轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)。轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)。 顯色反

30、應(yīng)需滿足的條件：顯色反應(yīng)需滿足的條件： 1選擇性要好，選擇性要好，與樣品可發(fā)生定量反應(yīng)。與樣品可發(fā)生定量反應(yīng)。 2靈敏度要高：靈敏度要高： 3有色化合物的組成要恒定，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定有色化合物的組成要恒定，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定在紫外在紫外- 可見光區(qū)有吸收，且可見光區(qū)有吸收，且 max較大。較大。 4顯色劑的顏色與有色化合物的顏色差別要大顯色劑的顏色與有色化合物的顏色差別要大 5反應(yīng)的條件要易于控制。反應(yīng)的條件要易于控制。 顯色反應(yīng)條件的控制顯色反應(yīng)條件的控制 (1)顯色劑用量顯色劑用量 生成配位化合物的顯色反應(yīng)可用下式表示：生成配位化合物的顯色反應(yīng)可用下式表示： M+nRMRn 若配合物穩(wěn)定性好，顯色劑

31、只需稍過量。若配合物穩(wěn)定性好，顯色劑只需稍過量。 若配合物不穩(wěn)定，顯色劑需過量很多。若配合物不穩(wěn)定，顯色劑需過量很多。 若可形成逐級配合物時(shí)，顯色劑用量應(yīng)若可形成逐級配合物時(shí)，顯色劑用量應(yīng) 嚴(yán)格控嚴(yán)格控 制在一定范圍。制在一定范圍。 例：例： MoMo(SCN)5Mo(SCN)6- 桔紅色桔紅色淺紅色淺紅色 2、溶液的酸度、溶液的酸度 pH值對顯色反應(yīng)的影響值對顯色反應(yīng)的影響 pH值不同，可形成具不同配位數(shù)、不同顏色的配合物值不同，可形成具不同配位數(shù)、不同顏色的配合物 pH值增大，引起某些金屬離子水解，甚至析出沉淀。值增大，引起某些金屬離子水解，甚至析出沉淀。 Fe(SCN)2+ + OH-

32、Fe(OH)2+ + SCN- 例：例：Fe3+與水楊酸在不同與水楊酸在不同pH值生成不同配合物值生成不同配合物 pH值值 4 4-7 8-10 配合物組成配合物組成 Fe(C7H4O3)+ Fe(C7H4O3)2- Fe(C7H4O3)33- 顏色顏色 紫紅紫紅 棕橙棕橙 黃黃 pH值的確定值的確定 做做A-pH關(guān)系曲線，得到合適的關(guān)系曲線，得到合適的pH值范圍值范圍 （3）其他條件）其他條件 顯色溫度顯色溫度 顯色時(shí)間顯色時(shí)間 放置時(shí)間放置時(shí)間 溶劑溶劑 顯色反應(yīng)的速度有快有慢，快的幾顯色反應(yīng)的速度有快有慢，快的幾 乎是瞬間完成，顏色很快達(dá)到穩(wěn)定乎是瞬間完成，顏色很快達(dá)到穩(wěn)定 狀態(tài)，并且能

33、保持較長時(shí)間。大多狀態(tài)，并且能保持較長時(shí)間。大多 數(shù)顯色反應(yīng)的速度是比較慢的，需數(shù)顯色反應(yīng)的速度是比較慢的，需 要一定時(shí)間才能達(dá)到穩(wěn)定。而且有要一定時(shí)間才能達(dá)到穩(wěn)定。而且有 些有色化合物放置過久也會(huì)褪色。些有色化合物放置過久也會(huì)褪色。 適宜的顯色時(shí)間、溫度要由實(shí)驗(yàn)來適宜的顯色時(shí)間、溫度要由實(shí)驗(yàn)來 確定。確定。 三、參比溶液選擇三、參比溶液選擇 為什么需要使用參比溶液？為什么需要使用參比溶液？ 所測得的吸光度要所測得的吸光度要真正真正反映待測溶液的反映待測溶液的吸光強(qiáng)度吸光強(qiáng)度。 1、溶劑參比、溶劑參比 試樣組成簡單、共存組份少試樣組成簡單、共存組份少(基體干擾少基體干擾少)、顯色劑不吸、顯色劑

34、不吸 收時(shí)，直接采用溶劑收時(shí)，直接采用溶劑(多為蒸餾水多為蒸餾水)為參比。為參比。 即試劑、干擾、顯色劑均無吸收，用溶劑作參比。即試劑、干擾、顯色劑均無吸收，用溶劑作參比。 樣 參 調(diào)節(jié)光路 光學(xué)性質(zhì)和厚度相同 樣品池樣品溶液 ，參比池空白溶液 樣品池參比池 配制樣品的溶劑空白溶液 A TA %1000 注：采用空白對比消除因溶劑和容器的吸收、光的散射注：采用空白對比消除因溶劑和容器的吸收、光的散射 和界面反射等因素對透光率的干擾。和界面反射等因素對透光率的干擾。 試劑參比：試劑參比：當(dāng)顯色當(dāng)顯色劑和其劑和其它試劑在測定波長處有吸它試劑在測定波長處有吸 收時(shí)，采用試收時(shí)，采用試劑劑+ +顯色劑

35、作顯色劑作參比參比( (不加待測物不加待測物) )。 試樣參比：試樣參比：如試樣基體在測定波長處有吸收，如試樣基體在測定波長處有吸收， 可以試樣作參比可以試樣作參比( (不能加顯色劑不能加顯色劑) )。 平行操作參比溶液：平行操作參比溶液： 用用不含待測組分的試樣，在完全相同條不含待測組分的試樣，在完全相同條件下件下與待測試與待測試 樣同時(shí)進(jìn)行處理，得到平行樣同時(shí)進(jìn)行處理，得到平行操作操作參比溶液。參比溶液。 第四節(jié) 分析條件的選擇 點(diǎn)滴積累點(diǎn)滴積累 1 1選擇吸光性物質(zhì)的最大吸收波長作為測定波選擇吸光性物質(zhì)的最大吸收波長作為測定波 長。長。 2 2使用紫外使用紫外- -可見分光光度計(jì)時(shí)，讀數(shù)

36、范圍應(yīng)可見分光光度計(jì)時(shí)，讀數(shù)范圍應(yīng) 控制在吸光度為控制在吸光度為0.20.20.70.7，透光率為，透光率為65% 65% 20%20%之之 間。間。 3 3待測物質(zhì)在紫外待測物質(zhì)在紫外- -可見光區(qū)無吸收時(shí)，應(yīng)加可見光區(qū)無吸收時(shí)，應(yīng)加 顯色劑。顯色劑不得有干擾，反應(yīng)必須完全。顯色劑。顯色劑不得有干擾，反應(yīng)必須完全。 4 4一般用溶劑作參比溶液。必要時(shí)采用試樣參一般用溶劑作參比溶液。必要時(shí)采用試樣參 比溶液、試劑參比溶液或平行操作參比溶液。比溶液、試劑參比溶液或平行操作參比溶液。 第五節(jié)第五節(jié) 定性與定量分析定性與定量分析 一、定性分析一、定性分析 依據(jù)：相同的化合物有相同的光譜依據(jù)：相同的化

37、合物有相同的光譜 方法：方法： 比較吸收光譜的一致性比較吸收光譜的一致性 比較吸收光譜的特征數(shù)據(jù)比較吸收光譜的特征數(shù)據(jù) 比較吸光度的比值比較吸光度的比值 （一）定性鑒別（一）定性鑒別 定性鑒別的依據(jù)定性鑒別的依據(jù)吸收光譜的特征吸收光譜的特征(max和和max） 吸收光譜的形狀吸收光譜的形狀 吸收峰的數(shù)目吸收峰的數(shù)目 吸收峰的位置（波長）吸收峰的位置（波長） 吸收峰的強(qiáng)度吸收峰的強(qiáng)度 相應(yīng)的吸光系數(shù)相應(yīng)的吸光系數(shù) 缺陷：不能鑒定飽和物質(zhì)及結(jié)構(gòu)相似的化合物。缺陷：不能鑒定飽和物質(zhì)及結(jié)構(gòu)相似的化合物。 1對比吸收光譜的特征數(shù)據(jù)（吸光度或吸光系數(shù)）對比吸收光譜的特征數(shù)據(jù)（吸光度或吸光系數(shù)） min %

38、1 1maxmax ， shcm E 2 2對比吸光度或吸光系數(shù)的比值：對比吸光度或吸光系數(shù)的比值： 如果化合物有幾個(gè)吸收峰，可用在不同吸收峰如果化合物有幾個(gè)吸收峰，可用在不同吸收峰 （或峰與谷）處測得吸光度的比值作為鑒別的依據(jù)。（或峰與谷）處測得吸光度的比值作為鑒別的依據(jù)。 例：例： 45.315.388.170.1 550 361 278 361 550361278 12 A A A A VB ， 三處最大吸收， 定性鑒別：藥典規(guī)定 3對比吸收光譜的一致性對比吸收光譜的一致性 同一測定條件下，同一測定條件下， 與標(biāo)準(zhǔn)對照物譜圖或標(biāo)準(zhǔn)譜圖與標(biāo)準(zhǔn)對照物譜圖或標(biāo)準(zhǔn)譜圖 進(jìn)行對照比較進(jìn)行對照比較

39、（二）純度檢查和雜質(zhì)限量測定（二）純度檢查和雜質(zhì)限量測定 1純度檢查（雜質(zhì)檢查）純度檢查（雜質(zhì)檢查） 雜質(zhì)的存在雜質(zhì)的存在 吸收曲線形狀吸收曲線形狀改變改變 吸光系數(shù)值的大小吸光系數(shù)值的大小 例：乙醇中含少量的雜質(zhì)苯例：乙醇中含少量的雜質(zhì)苯 乙醇的乙醇的UV吸收光譜在吸收光譜在256nm處沒有吸收峰處沒有吸收峰 而苯在而苯在256nm處有的吸收峰處有的吸收峰 苯的檢出限量低達(dá)苯的檢出限量低達(dá)10ppm 2、雜質(zhì)的限量檢查、雜質(zhì)的限量檢查 測定特定波長的吸光度值，計(jì)算雜質(zhì)的含量測定特定波長的吸光度值，計(jì)算雜質(zhì)的含量 在此波長處，雜質(zhì)有吸收，而藥物無吸收在此波長處，雜質(zhì)有吸收，而藥物無吸收 測定兩

40、個(gè)特定波長的吸光度的比值測定兩個(gè)特定波長的吸光度的比值 （一）單組分的定量方法（一）單組分的定量方法 1標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 2標(biāo)準(zhǔn)對比法：外標(biāo)一點(diǎn)法標(biāo)準(zhǔn)對比法：外標(biāo)一點(diǎn)法 3吸光系數(shù)法吸光系數(shù)法 l A clcA 定量依據(jù)： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線法、標(biāo)準(zhǔn)曲線法 1)配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測定吸光度。配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測定吸光度。 2)繪制繪制A-c標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算回歸方程。標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算回歸方程。 3)測定樣品的測定樣品的A值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上或代入回歸方程得到值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上或代入回歸方程得到 樣品的濃度。樣品的濃度。 條件前提：固定儀器和測定 樣樣 同上條件 固定條件 查得

41、測定樣品 曲線分別測定配制標(biāo)準(zhǔn)系列過程： CA ACA 蘆丁含量測定 mLmg mLmLmLmg 250 . 3 2550/200. 0 樣品 標(biāo)樣分別移取 標(biāo)準(zhǔn)溶液一般為標(biāo)準(zhǔn)溶液一般為57個(gè)點(diǎn)，至少不少于個(gè)點(diǎn)，至少不少于4個(gè)。個(gè)。 待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)平行處理。待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)平行處理。 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度范圍應(yīng)在溶液吸光度與其濃度呈線性關(guān)系區(qū)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度范圍應(yīng)在溶液吸光度與其濃度呈線性關(guān)系區(qū) 間內(nèi)，且溶液的吸光度值控制在間內(nèi)，且溶液的吸光度值控制在0.11.0之間。之間。 用坐標(biāo)紙繪制完后應(yīng)注明測定內(nèi)容，如測定波長、吸收池用坐標(biāo)紙繪制完后應(yīng)注明測定內(nèi)容，如測定波長、吸收池 厚度、操作時(shí)間等；

42、厚度、操作時(shí)間等； 長時(shí)間不用后再次使用時(shí)，以及儀器維修調(diào)整后應(yīng)檢查標(biāo)長時(shí)間不用后再次使用時(shí)，以及儀器維修調(diào)整后應(yīng)檢查標(biāo) 準(zhǔn)曲線，必要時(shí)應(yīng)重新繪制。準(zhǔn)曲線，必要時(shí)應(yīng)重新繪制。 注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： 2、標(biāo)準(zhǔn)對照法：、標(biāo)準(zhǔn)對照法： 1)在相同條件下，配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液。在相同條件下，配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液。 （兩種溶液的濃度最好相近）（兩種溶液的濃度最好相近） 2)在選定波長處，測定兩者的吸光度。在選定波長處，測定兩者的吸光度。 3)根據(jù)推導(dǎo)出來的下式計(jì)算樣品濃度。根據(jù)推導(dǎo)出來的下式計(jì)算樣品濃度。 A標(biāo) 標(biāo)= c標(biāo)標(biāo)l A樣 樣= c樣樣l 兩式的兩式的 和和l值相同值相同 標(biāo) 樣標(biāo) 樣 A Ac

43、c 外標(biāo)一點(diǎn)法外標(biāo)一點(diǎn)法 注：當(dāng)樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的注：當(dāng)樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的 稀釋倍數(shù)相同時(shí)稀釋倍數(shù)相同時(shí) 標(biāo)樣與樣品濃度相近 ；截距為 固定儀器和測定條件；前提： 0 標(biāo)樣和 分別測定一定過程：AA S x Sx A A CC s C i C C S x Sx A A mm %100% m m i i max min A 2. 對于同一待測溶液，濃度對于同一待測溶液，濃度，吸光度，吸光度； 3. 對于同一物質(zhì)，不論濃度大小如何，最大吸收峰所對應(yīng)對于同一物質(zhì)，不論濃度大小如何，最大吸收峰所對應(yīng) 的波長的波長(最大吸收波長最大吸收波長 max) 不變，并且曲線的形狀也完全不變，并且曲線的形

44、狀也完全 相同。相同。 3、吸光系數(shù)法、吸光系數(shù)法 利用從手冊或文獻(xiàn)查到的利用從手冊或文獻(xiàn)查到的 或或 值，根據(jù)下式定量：值，根據(jù)下式定量： %1 1 E cm 或或 標(biāo) 樣 含量 )E( )E( % %1 1 %1 1 cm cm 特點(diǎn)：對儀器要求較高。特點(diǎn)：對儀器要求較高。 要求單色光前提： i E CAmLgCigW 求含樣過程： 已知稀釋 )/(/)( lE A mLgC i 100/ l A LmolC i /或 %100% 樣 C C i i 例例9-5: 維生素維生素B12的水溶液在的水溶液在處的百分吸光系數(shù)值處的百分吸光系數(shù)值 是是207，盛于，盛于1cm吸收池中，測得的溶液吸

45、光度為吸收池中，測得的溶液吸光度為 0.414，則溶液的濃度為多少？，則溶液的濃度為多少？ mlg l 100/002. 0 1207 414. 0 E A l A c 1% 1cm 解解: : 例例9-69-6：維生素維生素B B12 12樣品 樣品20mg20mg用水溶液配成用水溶液配成1000ml1000ml。盛于盛于1cm1cm 吸收池中，于吸收池中，于361nm處測定吸光度為處測定吸光度為0.407，求求B B12 12的百分含量？ 的百分含量？ 98.3% 207 203.5 )E( )E( %B 5 .203 1002. 0 407. 0A )E( %1 1 %1 1 12 %1

46、 1 標(biāo) 樣 樣 樣品 解： cm cm cm Lc （二）多組分的測定方法：（二）多組分的測定方法： l在含有多種組分的溶液中，如果要測定多個(gè)組分，在含有多種組分的溶液中，如果要測定多個(gè)組分， 可以根據(jù)情況的不同，采用不同的方法來進(jìn)行測定?？梢愿鶕?jù)情況的不同，采用不同的方法來進(jìn)行測定。 l如果溶液中各組分之間的吸收曲線互相不干擾，可以選如果溶液中各組分之間的吸收曲線互相不干擾，可以選 擇適當(dāng)?shù)牟煌牟ㄩL分別測定。如圖（擇適當(dāng)?shù)牟煌牟ㄩL分別測定。如圖（a)a)：X,Y X,Y 組份最組份最 大吸收波長不重迭，相互不干擾，可以按兩個(gè)單一組份大吸收波長不重迭，相互不干擾，可以按兩個(gè)單一組份 處理

47、。處理。 l如果多個(gè)組分之間的吸收曲線有干擾則可利用吸光如果多個(gè)組分之間的吸收曲線有干擾則可利用吸光 度的加和性，以解聯(lián)立方程式的方法，求得各個(gè)組度的加和性，以解聯(lián)立方程式的方法，求得各個(gè)組 分的含量或濃度。圖分的含量或濃度。圖b b 2 2 a+b 2222 a+b 2 2 A A abab ab a a b b AAEcEc Ec c E l在混合組分測定中，實(shí)際遇到的情況是吸收在混合組分測定中，實(shí)際遇到的情況是吸收 光譜雙向重疊，互相干擾，兩組份在最大吸收波長處互相吸光譜雙向重疊，互相干擾，兩組份在最大吸收波長處互相吸 收，如圖收，如圖9-7c9-7c所示。這時(shí)可根據(jù)測定的目的要求和光譜

48、重疊所示。這時(shí)可根據(jù)測定的目的要求和光譜重疊 情況，采取以下方法情況，采取以下方法. . 2 2 2 aabb 121212 a+ba+b 1 a+b 11111 a+b 2222 a+ba+b 211 1221 EEEE AA A1 A2 AA ab abab ab abab ab bb a abab b cc AAEcEc AAEcEc EE c EEEE c 先求的和處兩組份各自的、之值，在分別測 得兩波長處混合物、，因吸光度具有加和性，所以可 以用線性方程解得兩組分的和 （ ） （ ）解（1)（2）線性方程得： 2 a+ba+b 112 1221 AA bb abab EE EEEE

49、1 1、解線性方程法：、解線性方程法： 2 2、等吸收雙波長消去法、等吸收雙波長消去法 該方法是在吸收光譜互相重疊的該方法是在吸收光譜互相重疊的a a、b b兩組份的混合物中，兩組份的混合物中， 先設(shè)法消去組分先設(shè)法消去組分a a的干擾而測定組分的干擾而測定組分b b的濃度。即選取對干的濃度。即選取對干 擾組分?jǐn)_組分a a等吸收的兩個(gè)波長處廣度相等（等吸收的兩個(gè)波長處廣度相等（A A1 1a a=A=A2 2a a),),而欲測而欲測 組分組分b b在兩波長處的吸光度則有很大的差別，這樣，混合在兩波長處的吸光度則有很大的差別，這樣，混合 組分在兩波長處之差組分在兩波長處之差A(yù) A與待測組分與待

50、測組分b b的濃度有如下關(guān)系：的濃度有如下關(guān)系： a+ba+b 121122 1212 bb 1b2b bb 12b b12 AAAA)A) (AA )() c -c =(-) c A=k c (AA aa aa aa AA AA EE EE bb bb （ 因） xx ss xs xs A= K L c() A= K L c( ) A = A- A = l( c- c) = K L c 待 測 物 濃 度 空 白濃 度 l測量原理：當(dāng)試樣中組份的濃度過大時(shí)，則測量原理：當(dāng)試樣中組份的濃度過大時(shí)，則A A值很大，值很大， 會(huì)產(chǎn)生讀數(shù)誤差。此時(shí)若以一濃度略小于試樣組份濃度會(huì)產(chǎn)生讀數(shù)誤差。此時(shí)若以

51、一濃度略小于試樣組份濃度 作參作參比（透光率為比（透光率為100%100%），），則有：則有： （三）示差分光光度法（三）示差分光光度法 - 高高含量組分的測定含量組分的測定 第五節(jié) 定性定量方法 課堂互動(dòng)課堂互動(dòng) 1 1在符合朗伯在符合朗伯- -比爾定律的條件下，有色物質(zhì)的濃度、比爾定律的條件下，有色物質(zhì)的濃度、 最大吸收波長、吸光度三者的關(guān)系是最大吸收波長、吸光度三者的關(guān)系是 A A增加、增加、增加增加、增加、增加 B B增加、減小、不變增加、減小、不變 C C減小、增加、減小減小、增加、減小 D D減小、不變、減小減小、不變、減小 2 2維生素維生素D D2 2的摩爾吸收系數(shù)的摩爾吸收系

52、數(shù) 264 264nmnm=18200 =18200。用用2.02.0cmcm吸吸 收池測定，如果要控制吸光度收池測定，如果要控制吸光度A A在在0.6990.6990.1870.187范范 圍內(nèi)，應(yīng)使維生素圍內(nèi)，應(yīng)使維生素D D2 2溶液的濃度在什么范圍內(nèi)？溶液的濃度在什么范圍內(nèi)？ 第五節(jié) 定性定量方法 點(diǎn)滴積累（點(diǎn)滴積累（1 1） 紫外紫外- -可見分光光度法的各種定量方法的優(yōu)缺點(diǎn)：可見分光光度法的各種定量方法的優(yōu)缺點(diǎn)： 1 1標(biāo)準(zhǔn)曲線法的優(yōu)點(diǎn)：測定大批量樣品時(shí)，操作簡標(biāo)準(zhǔn)曲線法的優(yōu)點(diǎn)：測定大批量樣品時(shí)，操作簡 單、準(zhǔn)確、快速。缺點(diǎn)：不同人處理相同的測量數(shù)據(jù)，得單、準(zhǔn)確、快速。缺點(diǎn)：不同人

53、處理相同的測量數(shù)據(jù)，得 到的結(jié)果不易完全相同。到的結(jié)果不易完全相同。 2 2標(biāo)準(zhǔn)對比法的優(yōu)點(diǎn)：測量數(shù)據(jù)相同，任何人都能標(biāo)準(zhǔn)對比法的優(yōu)點(diǎn)：測量數(shù)據(jù)相同，任何人都能 得到完全一致的結(jié)果。缺點(diǎn)：隨機(jī)誤差較大。得到完全一致的結(jié)果。缺點(diǎn)：隨機(jī)誤差較大。 3 3吸光系數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)：與標(biāo)準(zhǔn)對比法的優(yōu)點(diǎn)相同。吸光系數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)：與標(biāo)準(zhǔn)對比法的優(yōu)點(diǎn)相同。 缺點(diǎn)：測定條件不易與文獻(xiàn)完全一致，從而引入誤差。缺點(diǎn)：測定條件不易與文獻(xiàn)完全一致，從而引入誤差。 第五節(jié) 定性定量方法 點(diǎn)滴積累（點(diǎn)滴積累（2 2） 紫外紫外- -可見分光光度法的各種定量方法的優(yōu)缺點(diǎn)：可見分光光度法的各種定量方法的優(yōu)缺點(diǎn)： 4 4解聯(lián)立方程組法的

54、優(yōu)點(diǎn)：可以不經(jīng)分離直接測定解聯(lián)立方程組法的優(yōu)點(diǎn)：可以不經(jīng)分離直接測定 二元組分溶液。缺點(diǎn)：在兩個(gè)測定波長處，要求兩個(gè)組分二元組分溶液。缺點(diǎn)：在兩個(gè)測定波長處，要求兩個(gè)組分 的吸光系數(shù)有較大的差別。的吸光系數(shù)有較大的差別。 5 5等吸收波長消去法的優(yōu)點(diǎn)：可以不經(jīng)分離直接測等吸收波長消去法的優(yōu)點(diǎn)：可以不經(jīng)分離直接測 定二元組分溶液，還適于測定混濁液的測定。缺點(diǎn)：要求定二元組分溶液，還適于測定混濁液的測定。缺點(diǎn)：要求 干擾組分的吸收光譜中有一個(gè)峰或谷。干擾組分的吸收光譜中有一個(gè)峰或谷。 6 6差示分光光度法的優(yōu)點(diǎn)：可以直接測定高濃度溶差示分光光度法的優(yōu)點(diǎn)：可以直接測定高濃度溶 液。缺點(diǎn)：需要用高精密

55、度的儀器。液。缺點(diǎn)：需要用高精密度的儀器。 一、選擇題一、選擇題 （一）單項(xiàng)選擇題（一）單項(xiàng)選擇題 1紫外紫外-可見光的波長范圍是：可見光的波長范圍是： A. 200400nm B400760nm C200760nm D360800nm 2下列敘述錯(cuò)誤的是：下列敘述錯(cuò)誤的是： A光的能量與其波長成反比光的能量與其波長成反比 B有色溶液越濃，對光的吸收也越強(qiáng)烈有色溶液越濃，對光的吸收也越強(qiáng)烈 C物質(zhì)對光的吸收有選擇性物質(zhì)對光的吸收有選擇性 D光的能量與其頻率成反比光的能量與其頻率成反比 【目標(biāo)檢測目標(biāo)檢測】 第六節(jié)第六節(jié) 紫外紫外-可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡介可見吸收光譜在有機(jī)化

56、合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡介 3 3紫外紫外- -可見分光光度法屬于：可見分光光度法屬于： A A原子發(fā)射光譜原子發(fā)射光譜 B B原子吸收光譜原子吸收光譜 C C分子發(fā)射光譜分子發(fā)射光譜 D D分子吸收光譜分子吸收光譜 4 4分子吸收紫外分子吸收紫外- -可見光后，可發(fā)生哪種類型的可見光后，可發(fā)生哪種類型的 分子能級躍遷：分子能級躍遷： A A轉(zhuǎn)動(dòng)能級躍遷轉(zhuǎn)動(dòng)能級躍遷 B B振動(dòng)能級躍遷振動(dòng)能級躍遷 C C電子能級躍遷電子能級躍遷 D D以上都能發(fā)生以上都能發(fā)生 第六節(jié)第六節(jié) 紫外紫外-可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡介可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡介 5某有色溶液的摩爾濃度

57、為某有色溶液的摩爾濃度為c，在一定條件下用，在一定條件下用1cm 比色杯測得吸光度為比色杯測得吸光度為A，則摩爾吸光系數(shù)為：，則摩爾吸光系數(shù)為： AcA BcM C D 6某吸光物質(zhì)的摩爾質(zhì)量為某吸光物質(zhì)的摩爾質(zhì)量為M，其摩爾吸收系數(shù)，其摩爾吸收系數(shù) 與與 比吸收系數(shù)的換算關(guān)系是比吸收系數(shù)的換算關(guān)系是 A M B /M C M/10 D /M10 A c c A %1 1cm E %1 1cm E %1 1cm E %1 1cm E 第六節(jié)第六節(jié) 紫外紫外-可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡介可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡介 7關(guān)于光的性質(zhì)，描述正確的是：關(guān)于光的性質(zhì)，描述

58、正確的是： A光具有波粒二象性光具有波粒二象性 B光具有發(fā)散性光具有發(fā)散性 C光具有顏色光具有顏色 D本質(zhì)是單色光本質(zhì)是單色光 8某吸光物質(zhì)的吸光系數(shù)很大，則表明：某吸光物質(zhì)的吸光系數(shù)很大，則表明： A該物質(zhì)溶液的濃度很大該物質(zhì)溶液的濃度很大 B測定該物質(zhì)的靈敏度高測定該物質(zhì)的靈敏度高 C入射光的波長很大入射光的波長很大 D該物質(zhì)的分子量很大該物質(zhì)的分子量很大 第六節(jié)第六節(jié) 紫外紫外-可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡介可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡介 9相同條件下，測定甲、乙兩份同一有色物質(zhì)溶液的吸光度。若甲相同條件下，測定甲、乙兩份同一有色物質(zhì)溶液的吸光度。若甲 溶液溶

59、液1cm吸收池，乙溶液吸收池，乙溶液2cm吸收池進(jìn)行測定，結(jié)果吸光度相同，吸收池進(jìn)行測定，結(jié)果吸光度相同， 甲、乙兩溶液濃度的關(guān)系：甲、乙兩溶液濃度的關(guān)系： Ac甲甲c乙乙 Bc乙乙4 c甲甲 Cc甲甲2c乙乙 Dc乙乙2 c甲甲 10在符合光的吸收定律條件下，有色物質(zhì)的濃度、最大吸收波長、在符合光的吸收定律條件下，有色物質(zhì)的濃度、最大吸收波長、 吸光度三者的關(guān)系是：吸光度三者的關(guān)系是： A增加、增加、增加增加、增加、增加 B增加、減小、不變增加、減小、不變 C減小、增加、減小減小、增加、減小 D減小、不變、減小減小、不變、減小 第六節(jié)第六節(jié) 紫外紫外-可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用

60、簡介可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡介 11吸收曲線是在一定條件下以入射光波長為橫坐標(biāo)、吸吸收曲線是在一定條件下以入射光波長為橫坐標(biāo)、吸 光度為縱坐標(biāo)所描繪的曲線，又稱為：光度為縱坐標(biāo)所描繪的曲線，又稱為： A工作曲線工作曲線 BA-曲線曲線 CA-c曲線曲線 D滴定曲線滴定曲線 12 標(biāo)準(zhǔn)曲線是在一定條件下以吸光度為橫坐標(biāo)、濃度為標(biāo)準(zhǔn)曲線是在一定條件下以吸光度為橫坐標(biāo)、濃度為 縱坐標(biāo)所描繪的曲線，也可稱為：縱坐標(biāo)所描繪的曲線，也可稱為： AA-曲線曲線 BA-c曲線曲線 C滴定曲線滴定曲線 DE-V曲線曲線 第六節(jié)第六節(jié) 紫外紫外-可見吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡介可見吸