定量分析方法

1、第第四四節(jié)節(jié) 分析方法的驗(yàn)證分析方法的驗(yàn)證 1.1.驗(yàn)證的目的：證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測要驗(yàn)證的目的：證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測要 求求 2.2.需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)檢查、有效需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)檢查、有效 成分的含量測定以及制劑中其它成分的測定，藥成分的含量測定以及制劑中其它成分的測定，藥 品溶出度、釋放度。品溶出度、釋放度。 一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容 （一）準(zhǔn)確度（一）準(zhǔn)確度 用該方法用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的 程度程度 表示方法：表示方法：用回收率（用回收率（%）表示）表示 %100% 加入量

2、 測得量 回收率 取樣量取樣量 取樣量取樣量 原料藥原料藥 可用可用已知純度已知純度的的對照品對照品或或供試品供試品進(jìn)行測定進(jìn)行測定 用本法所得結(jié)果與用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度已知準(zhǔn)確度的的另一個(gè)方另一個(gè)方 法法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。測定的結(jié)果進(jìn)行比較。 制劑：考察其他組分和輔料對回收率的影響：考察其他組分和輔料對回收率的影響 用含已知量被測物的各組分混合物進(jìn)行測 定。 可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定 （加樣回收率） 用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方 法測定結(jié)果進(jìn)行比較。 雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度 向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。 本法測定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較 3數(shù)據(jù)要求

3、在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。 3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試 品溶液 33，至少9個(gè)測定結(jié)果 （二）精密度（二）精密度 同一樣品多次測量值之間相互接近的程度同一樣品多次測量值之間相互接近的程度 表示方法：偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差（表示方法：偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）或相對標(biāo)準(zhǔn)）或相對標(biāo)準(zhǔn) 偏差（偏差（RSD） 重復(fù)性重復(fù)性 在相同條件下，由在相同條件下，由同一個(gè)分析人員同一個(gè)分析人員測定所得結(jié)測定所得結(jié) 果的精密度果的精密度 中間精密度中間精密度 在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員不同時(shí)間由不同分析人員用用 不同設(shè)備不同設(shè)備測定結(jié)果之間的精密度測定結(jié)果之間的精密度

4、 重現(xiàn)性重現(xiàn)性 在在不同實(shí)驗(yàn)室不同實(shí)驗(yàn)室由由不同分析人員不同分析人員測定結(jié)果之間的測定結(jié)果之間的 精密度精密度 （三）（三）專屬性專屬性 有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存 在情況下采用的方法能在情況下采用的方法能正確正確測定出被測物的特測定出被測物的特 性性 鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測定方法，鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測定方法，均均 應(yīng)考察其專屬性應(yīng)考察其專屬性 （一）鑒別反應(yīng)（一）鑒別反應(yīng) 應(yīng)能與其它共存的物質(zhì)或相似化合物區(qū)分，應(yīng)能與其它共存的物質(zhì)或相似化合物區(qū)分， 不含被測組分的樣品均應(yīng)呈現(xiàn)不含被測組分的樣品均應(yīng)呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)負(fù)反應(yīng)。 （二）含量測定和雜質(zhì)

5、測定（二）含量測定和雜質(zhì)測定 在能獲得雜質(zhì)的情況下，可加到試樣中，在能獲得雜質(zhì)的情況下，可加到試樣中， 考察對結(jié)果的干擾?？疾鞂Y(jié)果的干擾。 在雜質(zhì)和降解物不能獲得的情況下，可在雜質(zhì)和降解物不能獲得的情況下，可 用已驗(yàn)證方法或藥典方法進(jìn)行對照。用已驗(yàn)證方法或藥典方法進(jìn)行對照。 （四）檢測限（四）檢測限 指試樣指試樣中被測物能被檢測出的中被測物能被檢測出的最低量最低量 (1)(1)非儀器分析目視法非儀器分析目視法 (2)(2)信噪比法信噪比法 把已知低濃度試樣測出的信號把已知低濃度試樣測出的信號 與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，算出能被可與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，算出能被可 靠地檢測出的最低濃

6、度或量。一般以信噪比靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比 （S/NS/N）3131或或2121時(shí)的相應(yīng)濃度或量確定檢時(shí)的相應(yīng)濃度或量確定檢 測限。測限。 （五）定量限（五）定量限 指試樣中被測物能被指試樣中被測物能被定量定量測定的最低量，測定的最低量， 常用常用信噪比法信噪比法確定定量限。一般以信噪比為確定定量限。一般以信噪比為 10 1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限。時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限。 （六）線性 線性 系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測試 結(jié)果與試樣中被測物濃度直 接呈正比關(guān)系的程度。 線性關(guān)系：Y=a+bx （r=0.9999) 線性程度：相關(guān)系數(shù) Y X a b 15 （七

7、）范圍 范圍 系指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測試 方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。 16 是指在測定條件有小的變動(dòng)時(shí)，是指在測定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測定結(jié)果測定結(jié)果 不受影響的承受程度不受影響的承受程度。 典型典型的變動(dòng)因素有：被測溶液的穩(wěn)定性、樣品的變動(dòng)因素有：被測溶液的穩(wěn)定性、樣品 提取次數(shù)、時(shí)間等。提取次數(shù)、時(shí)間等。 實(shí)際工作中常考察的因素：被測溶液的穩(wěn)定性，流動(dòng)相的組成 和pH，商品柱的品牌，柱溫等 （八）耐用性 一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容 已有重現(xiàn)已有重現(xiàn) 性驗(yàn)證，不性驗(yàn)證，不 需驗(yàn)證中間需驗(yàn)證中間 精密度精密度 如一種方如一種方 法不夠?qū)伲ú粔驅(qū)伲?可用

8、其他分可用其他分 析方法予以析方法予以 補(bǔ)充補(bǔ)充 視具體情視具體情 況予以驗(yàn)證況予以驗(yàn)證 第第五五節(jié)節(jié) 定量分析有關(guān)計(jì)算定量分析有關(guān)計(jì)算 原料藥的含量用百分含量表示：原料藥的含量用百分含量表示： % m mx 100%含量 %100 )( % 標(biāo)示量 實(shí)測量每支每片 標(biāo)示量%100%標(biāo)示量 S mx 制劑的含量則用標(biāo)示量的百分含量表示制劑的含量則用標(biāo)示量的百分含量表示： 標(biāo)示量(S)：就是藥品標(biāo)簽上注明，每一單位劑量藥 品中主藥的量。表示為g/片、mg/ml等。 %100% 標(biāo)示量 每片實(shí)測的含量 標(biāo)示量 片劑表示量百分含量：片劑表示量百分含量： 每片實(shí)測的含量每片實(shí)測的含量 ？ 在分析時(shí)，一

9、般取樣10片或20片，精密稱定 其總重量，再取一定量的片粉來測量，以平 均片重來代替片重進(jìn)行計(jì)算。 取10片，精密稱定重量為2.000 g，研磨，精密稱 取片粉0.2100 g，實(shí)測量是0.1980 g，求平均片重? 每片實(shí)測的含量？ 2000. 0 10 000. 2 平均片重 平均片重 稱樣量 實(shí)測量 每片實(shí)測的含量 %100 (g) g)( %100% 標(biāo)示量供試品重 平均片重供試品中測得量 標(biāo)示量 每片實(shí)測的含量 標(biāo)示量 %100 標(biāo)示量)(品取供 )(每支容量得量供試 %100% ml ml 樣量試 品中測 標(biāo)示量 每支實(shí)測的含量 標(biāo)示量 注射劑劑表示量百分含量：注射劑劑表示量百分含

10、量： T(滴定度滴定度):1ml滴定液滴定液(m mol/L)相當(dāng)于被測相當(dāng)于被測 藥物的毫克數(shù)藥物的毫克數(shù) （一）滴定分析法（一）滴定分析法 （一）滴定分析法（一）滴定分析法 （一）滴定分析法（一）滴定分析法 呋塞米原料藥含量測定呋塞米原料藥含量測定 取本品取本品0.4988g（干燥品），加乙醇（干燥品），加乙醇30ml，微溫使溶解，放，微溫使溶解，放 冷，加甲酚紅指示液冷，加甲酚紅指示液4滴與麝香草酚藍(lán)指示液滴與麝香草酚藍(lán)指示液1滴，用氫氧化滴，用氫氧化 鈉滴定液（鈉滴定液（0.1003mol/L）滴定至溶液顯紫紅色，消耗）滴定至溶液顯紫紅色，消耗氫氧氫氧 化鈉滴定液（化鈉滴定液（0.10

11、03mol/L）14.86ml；并將滴定的結(jié)果用空；并將滴定的結(jié)果用空 白試驗(yàn)校正，消耗氫氧化鈉滴定液（白試驗(yàn)校正，消耗氫氧化鈉滴定液（0.1003mol/L）0.05ml 。每。每1ml氫氧化鈉滴定液（氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于）相當(dāng)于33.07mg的呋塞的呋塞 米。按干燥品計(jì)算，含米。按干燥品計(jì)算，含C12H11ClN2O5S不得少于不得少于99.0%。 呋塞米原料藥含量測定呋塞米原料藥含量測定 （一）滴定分析法（一）滴定分析法 %100 10 % 3 0 m FT)V(V 含量 %48.98%100 4988. 0 10 1 . 0 1003. 0 07.33)05. 08

12、6.14( 3 由于由于98.48%99.0%，故本品含量不合格，故本品含量不合格 %100 )( (%) 0 m TFVV AB S BB 含量 剩余滴定法也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定剩余滴定法也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定 液液A A與藥物作用，再用滴定液與藥物作用，再用滴定液B B與剩余的滴定液與剩余的滴定液A A反反 應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計(jì)算應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計(jì)算 滴定液濃度校正因子滴定液濃度校正因子 空白試驗(yàn)消耗滴定液空白試驗(yàn)消耗滴定液B的的 體積體積 剩余的滴定液剩余的滴定液A消耗的滴消耗的滴 定液定液B的體積的體積 （一）滴定分析法（一）滴定分析法 司可巴比妥鈉原料藥含量

13、測定司可巴比妥鈉原料藥含量測定 取本品取本品0.1041g（干燥品），置（干燥品），置250ml碘瓶中，加水碘瓶中，加水10m1，振搖使溶，振搖使溶 解，精密加解，精密加溴滴定液（溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸，再加鹽酸5m1，立即密塞，立即密塞 并振搖并振搖1min，在暗處靜置，在暗處靜置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液 10m1，立即密塞，搖勻后，用，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L） 滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色

14、消失，并將滴 定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml溴滴定液（溴滴定液（0.05mo1/L）相當(dāng)于）相當(dāng)于 13.01mg的的C12H17N2NaO3。按干燥品計(jì)算，含。按干燥品計(jì)算，含C12H17N2NaO3不得少不得少 于于98.5%。已知。已知樣品消耗硫代硫酸鈉滴定液（樣品消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）17.20ml ，空白實(shí)驗(yàn)消耗硫代硫酸鈉滴定液（，空白實(shí)驗(yàn)消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）25.02ml （一）滴定分析法（一）滴定分析法 司可巴比妥鈉原料藥含量測定司可巴比妥鈉原料藥含量測定 %100 10 % 3 0 m FTV)(V 含量

15、 %7 .98%100 1043. 0 10 1 . 0 1012. 0 01.13)20.1702.25( 3 測定結(jié)果大于測定結(jié)果大于98.5%，故本品含量合格，故本品含量合格 （一）滴定分析法（一）滴定分析法 甲苯磺丁脲片劑（甲苯磺丁脲片劑（標(biāo)示量標(biāo)示量0.5g）的含量測定）的含量測定 取甲苯磺丁脲取甲苯磺丁脲10片，精密稱定為片，精密稱定為5.948g，研細(xì)，精密稱取片粉，研細(xì)，精密稱取片粉 0.5996g，加中性乙醇，加中性乙醇25ml，微熱，使其溶解，放冷，加酚酞，微熱，使其溶解，放冷，加酚酞 指示劑指示劑3滴，用滴，用氫氧化鈉滴定液（氫氧化鈉滴定液（0.1008mol/L）滴定至

16、粉紅色）滴定至粉紅色 ，消耗量，消耗量18.47ml。每。每1ml氫氧化鈉滴定液（氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于）相當(dāng)于 27.04mg的甲苯磺丁脲。的甲苯磺丁脲。中國藥典中國藥典現(xiàn)行版規(guī)定本品含甲苯現(xiàn)行版規(guī)定本品含甲苯 磺丁脲應(yīng)為標(biāo)示量的磺丁脲應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%105%。試計(jì)算本品的標(biāo)示量百。試計(jì)算本品的標(biāo)示量百 分含量，并判斷是否符合規(guī)定。分含量，并判斷是否符合規(guī)定。 （一）滴定分析法（一）滴定分析法 甲苯磺丁脲片劑（甲苯磺丁脲片劑（標(biāo)示量標(biāo)示量0.5g）的含量測定）的含量測定 %100 10 % 3 Sm WFTV 標(biāo)示量 %9 .99%100 5 . 05996. 0 1

17、0 948. 5 10 1 . 0 1008. 0 04.2747.18 3 本品含量合格本品含量合格 (二）分光光度法二）分光光度法 供試品溶液的濃度供試品溶液的濃度CX 供試品溶液的濃度供試品溶液的濃度CX 1.單位的統(tǒng)一單位的統(tǒng)一 2.樣品有沒有稀釋樣品有沒有稀釋 3.表示方法表示方法 (二）分光光度法二）分光光度法 對乙酰氨基酚原料藥含量測定對乙酰氨基酚原料藥含量測定 精密稱取對乙酰氨基酚精密稱取對乙酰氨基酚0.04110g，置，置250ml量瓶中，加量瓶中，加0.4%氫氫 氧化鈉溶液氧化鈉溶液50ml，加水至刻度，搖勻，精密量取，加水至刻度，搖勻，精密量取5ml，置，置 100ml量

18、瓶中，加量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液10ml，加水至刻度，搖勻，加水至刻度，搖勻 。依照分光光度法，在。依照分光光度法，在257nm波長處測得吸收度為波長處測得吸收度為0.582。按。按 C8H9NO2的百分吸收系數(shù)為的百分吸收系數(shù)為715計(jì)算對乙酰氨基酚的百分含量計(jì)算對乙酰氨基酚的百分含量 (二）分光光度法二）分光光度法 對乙酰氨基酚原料藥含量測定對乙酰氨基酚原料藥含量測定 %100 100 1 % %1 1 m DV E A cm 含量 %05.99%100 0411. 0 5 100 250 100 1 715 582. 0 (二）分光光度法二）分光光度法 甲氧芐啶注射液（

19、規(guī)格甲氧芐啶注射液（規(guī)格2 ml：0.1g）含量測定）含量測定 精密量取本品精密量取本品1ml，置，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，搖量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，搖 勻，精密量取勻，精密量取1ml置置100ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，搖量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，搖 勻。照紫外勻。照紫外-可見分光光度法，在可見分光光度法，在271nm波長處測定吸光度為波長處測定吸光度為 0.420。另取甲氧芐啶對照品適量。另取甲氧芐啶對照品適量0.05134g，置，置25ml量瓶中，用量瓶中，用 稀醋酸稀釋至刻度，精密量取稀醋酸稀釋至刻度，精密量取1ml置置100ml量瓶中，用稀醋酸量瓶中，用稀醋酸

20、 稀釋至刻度，搖勻。在稀釋至刻度，搖勻。在271nm波長處測定吸光度為波長處測定吸光度為0.416，計(jì)算，計(jì)算 甲氧芐啶標(biāo)示量百分含量。甲氧芐啶標(biāo)示量百分含量。 (二）分光光度法二）分光光度法 甲氧芐啶注射液（規(guī)格甲氧芐啶注射液（規(guī)格2 ml：0.1g）含量測定）含量測定 %100% x Sm D A A c R R 每支容量 標(biāo)示量 %7 .103%100 1 . 01 2 1 100 1 25 416. 0 420. 0 10025 05134. 0 （三）色譜法（三）色譜法 供試品溶液的濃度供試品溶液的濃度CX （三）色譜法（三）色譜法 頭孢唑林鈉含量測定頭孢唑林鈉含量測定 取含量為取含

21、量為99.5%的頭孢唑林鈉對照品的頭孢唑林鈉對照品25.13mg，配成溶液，取，配成溶液，取 此溶液此溶液10l注入液相色譜儀，測定峰面積，注入液相色譜儀，測定峰面積，3次測定值分別為次測定值分別為 ：2490189、2492796和和2492178；另外稱取頭孢唑林鈉供試品；另外稱取頭孢唑林鈉供試品3 份，分別為份，分別為28.13mg、29.35mg和和27.10mg，按上法測定，分別，按上法測定，分別 取取10l溶液注入液相色譜儀，測得峰面積分別為溶液注入液相色譜儀，測得峰面積分別為2634858、 2763699和和2536847，求供試品的百分含量。，求供試品的百分含量。 （三）色譜

22、法（三）色譜法 頭孢唑林鈉含量測定頭孢唑林鈉含量測定 % m DV A A c R x R 100% 含量 %100 x R R A m A % m 含量 第一次測定：第一次測定： 2634858 25.13 99.5% 2491721 %100%93.99% 28.13 含量 第二次測定：第二次測定： 2763699 25.13 99.5% 2491721 %100%94.49% 29.35 含量 第三次測定：第三次測定： 2536847 25.13 99.5% 2491721 %100%93.94% 27.10 含量 93.99%94.49%93.94% %94.14% 3 平均含量 對照

23、品平均峰面積：對照品平均峰面積：2491721 3 249217824927962490189 （三）色譜法（三）色譜法 復(fù)方醋酸地塞米松乳膏（復(fù)方醋酸地塞米松乳膏（10g:7.5mg）醋酸地塞米松標(biāo)示量百分含量）醋酸地塞米松標(biāo)示量百分含量 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)： 固定相：固定相：C18 流動(dòng)相：流動(dòng)相：甲醇甲醇-水（水（70 30） 檢測波長檢測波長：240nm 理論板數(shù)理論板數(shù)：按氫化可的松峰計(jì)算不低于按氫化可的松峰計(jì)算不低于2000 分離度：分離度：地塞米松峰、內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符地塞米松峰、內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符 合要求合要求 （三）色譜法（三）色譜法 復(fù)方醋酸地塞米松乳膏（復(fù)方醋酸地塞米松乳膏（10g:7.5mg）醋酸地塞米松標(biāo)示量百分含量）醋酸地塞米松標(biāo)示量百分含量 內(nèi)標(biāo)溶液：甲睪酮內(nèi)標(biāo)溶液：甲睪酮0.0100g，置，置50ml量瓶中，用甲