常用培養(yǎng)基的配方

1、伊紅美藍培養(yǎng)基原理般用來鑒定大腸桿菌。伊紅為酸性染料，美藍為堿性染料。當大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時細菌帶正電荷被染成紅色，再與美藍結(jié)合形成紫黑色菌落，并帶有綠色金屬光澤。在堿性環(huán)境中不分解乳糖產(chǎn)酸的細菌不著色，伊紅和美藍不能結(jié)合，故沙門氏菌 等為無色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培養(yǎng)基上不生長。常用的伊紅美藍乳糖培養(yǎng)基，可用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細菌。如果有大腸桿菌，因其強烈分解乳糖而產(chǎn)生大量的混合酸，菌體帶H+,故菌落被染成深紫色，從菌落表面的反射光中還可以看到金屬光澤。用伊紅美藍培養(yǎng)基鑒定水中大腸桿菌步驟如下： 制作伊紅美藍培養(yǎng)基，趁熱注入培養(yǎng)皿中，凝成平板，待用。 用滅過菌

2、的錐形瓶盛取河水或溝水，按1 : 10稀釋。 取0.1毫升稀釋液接種于伊紅美藍培養(yǎng)基上。用平板劃線分離法進行分離。 將劃線后的培養(yǎng)皿倒置37C溫箱中培養(yǎng)1824小時。培養(yǎng)基中會出現(xiàn)大腸桿菌菌落，菌落中心呈暗藍黑色，發(fā)金屬光澤。 將菌落接種于斜面培養(yǎng)基上（由營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基制成）。配置方法蛋白胨10g乳糖10g 磷酸氫二鉀 2g瓊脂2030g 蒸餾水1000ml2%尹紅水溶液 20ml0.5 %美藍水溶液 13ml儲備培養(yǎng)基的制備先將瓊脂加至 900ml蒸餾水，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀及蛋白胨，混勻使之溶解，再以蒸餾水補足至1000ml，調(diào)整PH為7.27.4。趁熱用脫脂棉或絨布過濾，再加入乳

3、糖，混勻后定量分裝于燒瓶內(nèi)，置高壓蒸汽滅菌器內(nèi)以115C滅菌20min ,貯存于冷暗處備用。制法將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，校正PH,分裝于燒瓶內(nèi)，121 C高壓滅菌15min備用。臨用時加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至5055C，加入伊紅和美藍溶液，搖勻，傾注平板。麥康凱培養(yǎng)基原理1. 全稱麥康凱瓊脂或是麥康凱培養(yǎng)基2種用于分離鑒定細菌的培養(yǎng)基，大腸桿菌在其上呈紅色或粉紅色，有的菌落只是中間呈 現(xiàn)紅色。配置方法蛋白胨17g脙胨3g豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）5g氯化鈉5g瓊脂17g蒸餾水1000mL乳糖10g0.01%結(jié)晶紫水溶液10mL0.5%中性紅水溶液 5mL麥康凱-制法1將蛋白胨、胨

4、、膽鹽和氯化鈉溶解于400mL蒸餾水中，校正pH7.2。將瓊脂加入600mL加熱溶解。將兩液合并，分裝于燒瓶內(nèi)，121 C高壓滅菌15min備用。2臨用時加熱溶化瓊脂，趁熱加入乳糖，冷至5055C時，加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液，搖勻后傾注平板。注：結(jié)晶紫及中性紅水溶液配好后須經(jīng)高壓滅菌。吲哚試驗吲哚（indol）試驗有些細菌如大腸埃希菌、變形桿菌、霍亂弧菌等能分解培養(yǎng)基中的色氨 酸生成吲哚（靛基質(zhì)），經(jīng)與試劑中的對二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈紅色， 是為吲哚試驗陽性。LB培養(yǎng)基配方胰化蛋白胨1g 酵母提取物0.5g NaCI 1g 瓊脂1.5-2g 水100mlLB培 養(yǎng)基 -LB培養(yǎng)

5、基條件LB培 養(yǎng)基 -固態(tài)培養(yǎng)基LB固體培養(yǎng)基1L和液體一樣，加15g瓊脂粉，一定要在溫度降下之前加好抗生素，并且 倒好板。LB固體培養(yǎng)基倒板1.配制：100mlLB培養(yǎng)基加入1.5g瓊脂粉2. 抗生素的加入：高壓滅菌后，將融化的LB固體培養(yǎng)基置與55C的水浴中，待培養(yǎng)基溫度降到55C時（手可觸摸）加入抗生素，以免溫度過高導(dǎo)致抗生素失效，并充分搖勻。3. 倒板：一般10ml倒1個板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后， 打開蓋子，在紫外下照10-15分鐘。4. 保存：用封口膠封邊，并倒置放于4C保存，一個月內(nèi)使用。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂）配方蛋白胨10g；牛肉膏3g ;氯化鈉5g；瓊脂1520g;蒸餾

6、水1000mL ;制法將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi)，加入15%氫氧化鈉溶液約 2mL，校正pH至7.27.4。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化。分裝燒瓶，121 C高壓滅菌15min。注：此培養(yǎng)基可供一般細菌培養(yǎng)之用，可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計數(shù)，瓊脂量為1.5%;如作成平板或斜面，則應(yīng)為2%。甲基紅試驗甲基紅試驗-化學(xué)屬性甲基紅（Methyl Red）試驗?zāi)c桿菌科各菌屬都能發(fā)酵 葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產(chǎn)生 丙酮酸，進一步分解中，由于糖 代謝的途徑不同，可產(chǎn)生乳酸， 琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物，可使培養(yǎng)基 PH值下 降至pH4.5以下，使甲基紅 指示劑變紅。甲基紅試驗-試

7、驗方法挑取新的待試純培養(yǎng)物少許，接種于通用培養(yǎng)基，培養(yǎng)于36 1 C或30 C （以30 C較好）35天，從第二天起，每日取培養(yǎng)液1ml，加甲基紅指示劑12滴，陽性呈鮮紅色，弱陽性呈淡紅色，陰性為黃色。迄至發(fā)現(xiàn)陽性或至第5天仍為陰性、即可判定 結(jié)果。甲基紅為酸性指示劑，pH范圍為4.46.0,其pK值為5.0。故在pH5.0以下，隨酸度而增強 黃色，在pH5.0以上，則隨堿度而增強黃色，在pH5.0或上下接近時，可能變色不夠明顯，此時應(yīng)延長培養(yǎng) 時間，重復(fù)試驗。尿素酶某些細菌能產(chǎn)生尿素酶，分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基變堿。將待檢菌接種于含有尿素的培養(yǎng)基中，35C孵育1824h，觀察結(jié)果。紅色

8、為陽性，不變?yōu)殛幮?。主要用于腸桿菌科 變形桿菌屬、普羅威登菌屬、克雷伯菌屬及假單胞菌屬的鑒定。明膠液化明膠液化gelaune liquefaction指細菌把明膠膠分解成液狀的現(xiàn)象。明膠液化-它的特征這種能力可因細菌種類不同而有顯著差異，因此很早以來就被用來作為鑒別、測定細菌的一種特征。明膠液化-適應(yīng)范圍葡萄球菌屬、變形菌屬、芽孢桿菌屬均具有液化能力，而大腸桿菌就無這種液化能力。由于明膠是在熱水中溶解膠原（collagen）而成的蛋白質(zhì)，因此，它是由產(chǎn)生于體外的蛋白酶進 行分解的。用血清或蛋清清蛋白代替明膠也可看到大致相同的現(xiàn)象。VP試驗vp試驗-試驗簡介英VP test微生物檢驗中常用的 生

9、化反應(yīng) 之一。某些細菌在葡萄糖蛋白胨水 培養(yǎng)基中能分解葡萄糖產(chǎn)生 丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇， 后者在強堿環(huán)境下，被空氣中氧氧化為 二乙酰， 二乙酰與蛋白胨中的 胍基生成紅色化合物，稱 V P （+）反應(yīng)。VP試驗-試驗方法1） O Meara氏法：將試驗菌接種于通用培養(yǎng)基，于 36 1 C培養(yǎng)48h，培養(yǎng)液1ml加O Meara試劑（加有0.3%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氫氧化鈉水溶液）1ml，搖 動試管12min，靜置于室溫或36 1 C恒溫箱，若4h內(nèi)不呈現(xiàn)伊紅、即判定為陰性。亦有主張在4850 C水浴放置2h后判定結(jié)果者。2） Barritt氏

10、法：將試驗菌接種于通用培養(yǎng)基，于 36 1 C培養(yǎng)4天、培養(yǎng)液2.5ml先加入 5 C a萘酚（2-na-phthol）純酒精溶液0.6ml,再加40%氫氧化鉀水溶液 0.2ml ,搖動25min , 陽性菌常立即呈現(xiàn)紅色，若無紅色出現(xiàn)，靜置于室溫或36 1 C恒溫箱，如2h內(nèi)仍不顯 現(xiàn)紅色、可判定為陰性。3）快速法：將0.5%肌酸溶液2滴放于小試管中、挑取產(chǎn)酸反應(yīng)的三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)物一接種環(huán)，孚L化接種于其中，加入5% a -萘酚3滴，40%氫氧化鈉水溶液2滴，振動后放置5min , 判定結(jié)果。不產(chǎn)酸的培養(yǎng)物不能使用。本試驗一般用于腸桿菌科各菌屬的鑒別。在用于芽胞桿菌和葡萄球菌等其它細菌時

11、，通用培養(yǎng)基中的磷酸鹽可阻礙乙酰甲基醇的產(chǎn)生，故應(yīng)省去或以氯化鈉代替。生理鹽水生理鹽水就是0.9%的氯化鈉水溶液，因為它的滲透壓值和正常人的血漿、組織液都是大致一樣的，所以可以用作補液（不會降低和增加正常人體內(nèi)鈉離子濃度）以及其他醫(yī)療用途，也 常用作體外培養(yǎng)活組織、細胞。氯化鈉：俗稱鹽、食鹽。菌注射用水一般使用來溶解難溶于生理鹽水藥物使用的，生理鹽水就是我們靜脈點滴常用的0.9%的氯化鈉注射液，外用具有一定的殺菌消毒作用。所以它們不是一樣的概念.。人體細胞生活中所處液體環(huán)境的濃度配方：哺乳類 需用生理鹽水濃度是 0.9%。稱取0.9克氯化鈉，溶解在少量 蒸餾水中，稀 釋到100毫升。血瓊脂平板

12、制法：取營養(yǎng)瓊脂（PH7. 6）,加熱使其溶解待冷至 45-50 C，以滅菌操作于每 100毫升營 養(yǎng)瓊脂加滅菌脫纖維羊血 或兔血5-10毫升，輕輕搖勻，立即傾注于 平板或分裝試管，制成斜 面?zhèn)溆?。血瓊脂平?用途用途：1. 一般棉拭子均接種此培養(yǎng)基。2. 尿液，膿液3. 分離細菌標本用。胰蛋白胨胰蛋白胨水成分 胰蛋白胨10g;蒸餾水1000mL ; pH7.0制法將上述成分溶解，校正 pH。分裝試管，121 C高壓滅菌15min。Baird Parker氏培養(yǎng)基成分胰蛋白胨10g ;牛肉膏 5g ;酵母膏 1g ;丙酮酸鈉10g ;甘氨酸 12g ;氯化鋰(LiCI 6H2O) 5g ;瓊脂 20g ;蒸餾水 950mL ; PH7.5。增菌劑的配法30%卵黃鹽水50mL與除菌過濾的1%亞蹄酸鉀溶液10mL混合，保存于冰箱內(nèi)。 制法將各成分加到蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解。冷至2