實驗三基因的PCR擴增技術(shù)精選文檔

1、一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康膙學(xué)習(xí)學(xué)習(xí)pcr反應(yīng)的基本原理與實驗技術(shù)反應(yīng)的基本原理與實驗技術(shù)v從從bcg基因組基因組dna中中pcr擴增擴增rv1791（pe19）基因）基因二、基本原理二、基本原理vpcr類似于類似于dna的天然復(fù)制過程。的天然復(fù)制過程。v將待擴增的將待擴增的dna片段與其兩側(cè)互補的兩段寡核苷酸片段與其兩側(cè)互補的兩段寡核苷酸引物，經(jīng)變性、退火和延伸若干個循環(huán)后，引物，經(jīng)變性、退火和延伸若干個循環(huán)后，dna擴擴增倍數(shù)可達增倍數(shù)可達2n倍。倍。 復(fù)溫 三、實驗材料三、實驗材料vbcg基因組基因組dnav10 pcr反應(yīng)緩沖液、反應(yīng)緩沖液、4 dntps、taq dna聚合酶、聚合酶、

2、模板模板dna、引物、引物 （p1、p2）、超純水）、超純水swvpcr反應(yīng)管、移液器、反應(yīng)管、移液器、 pcr儀、離心機儀、離心機四、實驗步驟四、實驗步驟v引物設(shè)計引物設(shè)計v準(zhǔn)備準(zhǔn)備pcr反應(yīng)溶液反應(yīng)溶液vpcr擴增反應(yīng)擴增反應(yīng)v結(jié)果檢測結(jié)果檢測vrv1791-f： atgaattcaggaagacagcatgtcgttc（ecor i）vrv1791-r：vatctcgagtgttccccctctccttcagv（xhoi）（二）準(zhǔn)備（二）準(zhǔn)備pcr反應(yīng)溶液反應(yīng)溶液 10pcr反應(yīng)緩沖液反應(yīng)緩沖液 2.5l 4dntps 2.0l 引物引物p1 1l（10nm） 引物引物p2 1l 模板模

3、板dna 2l taq dna聚合酶聚合酶 0.2l 用無菌去離子水至用無菌去離子水至 25l 用手指輕彈用手指輕彈pcr反應(yīng)管管底部，使溶液混勻反應(yīng)管管底部，使溶液混勻 在臺式離心機中離心在臺式離心機中離心2秒以集中溶液于管底秒以集中溶液于管底 在在pcr儀中設(shè)計如下反應(yīng)程序：儀中設(shè)計如下反應(yīng)程序：94 c、5min；94 c、30sec，61 c、40sec，72 c、30sec，30個循環(huán)；個循環(huán)；72 c、5min（三）（三）pcr擴增反應(yīng)擴增反應(yīng)將已混勻的將已混勻的pcr反應(yīng)管置于反應(yīng)管置于pcr儀儀的反應(yīng)孔中，蓋好蓋子的反應(yīng)孔中，蓋好蓋子進行反應(yīng)。反應(yīng)完畢，將樣品取出進行反應(yīng)。反應(yīng)完畢，將樣品取出置于冰浴中待用置于冰浴中待用（四）結(jié)果檢測（四）結(jié)果檢測 v本本pcr擴增的產(chǎn)物擴增的產(chǎn)物dna片段長度為片段長度為300bp，適合于，適合于在在1.5%瓊脂糖凝膠中進行電泳檢測。從每個反應(yīng)管瓊脂糖凝膠中進行電泳檢測。從每個反應(yīng)管中取中取5ul pcr產(chǎn)物進行電泳檢測。產(chǎn)物進行電泳檢測。 12345循環(huán)94 30s56.5 40s72 60s94 30s57.7 40s72 6094 30s58.6 40s72 60s94 30s59.9