化療藥物敏感性研究分析論文

1、化療藥物敏感性研究分析論文 摘要目的探討體外ATP法化療藥物敏感試驗在乳腺癌細胞中的可行性。方法以ATP-TCA法，檢測37例乳腺癌患者的癌細胞對6種常用化療藥物的敏感性。結(jié)果ATP-TCA法的可評估率為91.89%；6種試驗用化療藥物的敏感率分別為：足葉乙甙14.71%，紫杉醇20.59%，絲裂霉素32.35%，5-氟尿嘧啶47.06%，草酸鉑58.82%，表阿霉素67.65%。結(jié)論ATP-TCA腫瘤細胞化療藥敏試驗可作為乳腺癌患者個體化療中化療藥物敏感性的預(yù)測。 關(guān)鍵詞ATP-TCA法；乳腺癌；化療藥物 ApplicationofATPbioluminescenceassayforscre

2、eningchemotherapeuticagentsofbreasttumor AbstractObjectiveTostudytheapplicationoftheexvivoATPbioluminescenceassay(ATP-TCA)inthechemotherapyofbreasttumor.MethodsThesurgicalspecimensof37patientsweretestedbytheATP-TCA.ResultsEvaluabletestresultswereachievedin34of37patients，theevaluabilityratewas91.89%.

3、Thesensitiveratesofetoposid(Vp-16)，paclitaxel(TXL)，mitomycin(MMC)，5-fluoruracil(5-FU)，oxaliplati(OXA)，epirubicin(EPI)was14.71%，20.59%，32.35%，47.06%，58.82%，67.65%，respectively.ConclusionATPbioluminescenceassayisagoodoptioninthechemotherapeuticagentsscreeningofbreasttumors. KeywordsATPbioluminescence；

4、breasttumor；chemotherapydrug 選擇針對個體有效的藥物進行化療是治療乳腺癌的重要手段之一。由于同一化療方案對不同個體的類同腫瘤的療效存在差異，化療前對藥物進行體外敏感試驗，預(yù)測出有效的單藥或有效（或敏感）聯(lián)合藥物組成的化療方案，是提高化療藥物療效的潛在方法之一。ATP-TCA法（三磷酸腺苷-腫瘤細胞藥敏試驗）是近年發(fā)展起來的敏感而穩(wěn)定的藥敏檢測方法1。本文應(yīng)用ATP-TCA法對37例乳腺癌患者的乳腺癌細胞進行6種化療藥物的藥敏試驗，以探討ATP-TCA法用于乳腺癌患者體外化療藥物檢測在方法學(xué)方面的可靠性。 1材料與方法 1.1一般資料收集2003年3月2005年5月在

5、本院手術(shù)治療的乳腺癌（經(jīng)病理確診）患者37例標(biāo) 本。37例患者最小年齡25歲，最大年齡65歲。 1.2材料ATP-TCA試劑盒（包括改良PRMI-1640培養(yǎng)基）由北京金紫晶生物技術(shù)有限公司提供。MPL-1型自發(fā)光分析儀為德國Berthold公司產(chǎn)品?；熕幬铮?-氟尿嘧啶（5-FU，南通制藥總廠），表阿霉素（EPI，浙江海政制藥），足葉乙甙（VP-16，江蘇恒瑞），紫杉醇（TXL，澳大利亞FH科貿(mào)有限公司），絲裂霉素（MMC，日本明治藥廠），草酸鉑（OXA，法國SanofiWinthrop公司）。 1.3方法ATP-TCA操作步驟（按試劑盒使用說明操作）：取腫瘤組織標(biāo)本，在無菌條件下，剝離腫

6、瘤組織的纖維、脂肪及結(jié)締組織，然后用剪刀將腫瘤組織盡可能剪成小碎塊，過200目鋼網(wǎng)后放入腫瘤組織解離酶液中，置37、5%CO2、95%濕度下孵育1.53h。在室溫下，以1500r/mim條件下離心20min，棄上清液，用Hanks洗2次，以PRMI-1640制成癌細胞懸液，取35l用臺盼藍染色，顯微鏡下計數(shù)，并觀察細胞活性。調(diào)整細胞濃度至2040萬/ml，以每孔0.1ml接種至96孔培養(yǎng)板內(nèi)。按400%、200%、100%、50%、25%和12.5%的血漿峰值濃度，將藥物加入培養(yǎng)孔每孔0.1ml，每個濃度3個平行孔，并設(shè)最大抑制（MI）和無藥物（MO）對照孔，于5%CO2、37、95%濕度下孵

7、育67天。加入腫瘤細胞ATP提取液0.1ml，混勻后室溫下15min，取0.05ml混合液置微板熒光分析儀檢測。 1.4ATP-TCA結(jié)果評估 1.4.1應(yīng)用ATP-TCA的條件(1)檢測的標(biāo)本必須經(jīng)細胞學(xué)和病理學(xué)證實為惡性腫瘤，且混懸液中腫瘤細胞數(shù)20%。(2)培養(yǎng)板MO對照行必須可觀察。(3)藥物活性的劑量反應(yīng)曲線須可觀察。(4)平行孔間CV值 1.4.2ATP-TCA藥物敏感和耐藥的解讀(1)藥物敏感定義：高AUC（抑制曲線下面積）值，低IC90（抑制90%癌細胞生長時的藥物濃度）、IC50（抑制半數(shù)癌細胞生長時的藥物濃度）和SI（敏感指數(shù)）值，和高TGI（癌細胞生長抑制）值（表示癌細胞

8、生存100%抑制）。(2)藥物耐受定義：低AUC值，高IC90、IC50和SI值和低TGI值（特別是在高測試濃度和弱劑量反應(yīng)時）。(3)敏感度分級，定義為：強敏感：IC90100%TDC（測試腫瘤藥物濃度）和IC5025%TDC。部分敏感：IC90100%TDC和IC5025%TDC。弱敏感：IC90100%TDC和IC5025%TDC。耐藥：IC90100%TDC和IC5025%TDC。 2結(jié)果 在收集的37例患者中，34例具有評估性，總可評估率為91.89%，乳腺癌ATP-TCA試驗藥物劑量效應(yīng)曲線圖（見圖1）。 ATP-TCA試驗結(jié)果顯示不同個體的乳腺癌細胞對6種化療藥物具有不同的敏感性

9、。在所測試的化療藥物中，它們的敏感率排序如下：表阿霉素（EPI）67.65%，草酸鉑（OXA）58.82%，5-氟尿嘧啶（5-FU）47.05%，絲裂霉素（MMC）32.35%，紫杉醇（TXL）20.59%，足葉乙甙（VP-16）14.71%。其中表阿霉素的敏感率最高，足葉乙甙的敏感率最低（見表1）。 3討論 在本研究中，應(yīng)用對乳腺癌有較高評估率的ATP-TCA法2，對37例乳腺癌患者的癌細胞進行體外化療藥物敏感性檢測方法學(xué)的再研究。ATP是活細胞的基本能量單位，當(dāng)細胞的代謝受損時，ATP合成水平下降，其與活細胞數(shù)量呈正相關(guān)，故通過測定ATP水平可反映生物體的增殖活性。ATP體外藥敏試驗的原理

10、是細胞內(nèi)ATP與熒光素-熒光素酶復(fù)合物作用產(chǎn)生可測定熒光（波長562nm），檢測熒光值計算出ATP量可反映活細胞數(shù)。Sevin等研究認為乳腺癌手術(shù)后組織的可評估率為97%，敏感性為90%，特異性為86%，其臨床符合率為70%80%2。本組實驗結(jié)果較之為低，這可能與我們的操作不夠熟練、培養(yǎng)過程真菌污染及試驗用藥有關(guān)。乳腺癌被認為是一種全身性疾病，對化療中度敏感，Rein等3用ATP-TCA法測試晚期乳腺癌體外對蒽環(huán)類抗生素、肽素類和鉑類的敏感性，同時用免疫組化法檢測P53、bcl-2的表達，發(fā)現(xiàn)體外反應(yīng)率最高為66.7%，提示化療反應(yīng)和凋亡無關(guān)及P53、bcl-2的表達與體外藥敏結(jié)果無關(guān)。我們應(yīng)

11、用北京金紫晶生物技術(shù)有限公司提供的ATP-TCA試劑盒，體會到ATP-TCA法有如下優(yōu)點：（1）成功率及重復(fù)性高，達97%；（2）細胞用量少（1.52.5）1011/L；（3）采用熒光檢測范圍較大，且可定量；（4）藥物濃度呈線性范圍，有6個細胞級數(shù)，判斷趨勢明顯；（5）干擾因素少；（6）改良的RMPI-1640培養(yǎng)基可選擇性地促進腫瘤細胞生長，并抑制纖維細胞和血細胞的生長4。研究表明，ATP-TCA法用于體外乳腺癌患者的癌細胞化療藥物檢測在方法學(xué)上是可靠的5。因本研究樣本有限，涉及臨床因素不多，藥敏試驗結(jié)果與臨床療效一致性有待進一步的研究。 參考文獻 1NgTY，NganHY，ChengDK，

12、etal.ClinicalapplicabilityoftheATPcellviabilityassayasapredictorofchemoresponseinplatinum-resistantepithelialovariancancerusingnonsurgicaltumorcellsamples.GenecolOncol，2000，76:405-408. 2SevinBU，PerrasJP.Tumorheterogeneityandinvitrochemosensitivitytestinginovariancancer.AmJObstetGynecol，1997，176(4):759. 3IkawaH，KamedaH，KamitaniH，etal.EffectofPPARactivatorsoncytokinestimulatedcyclooxygenase-2expressioninhumancolorectalcarcinomacells.ExpCellRes，2001，267(1):