保留時間漂移

1、本文格式為word版，下載可任意編輯保留時間漂移 液相色譜故障排查 一飄移的保存時間 q：我的色譜峰保存時間在漂移，這是什么問題？ a：這是一個好玩的問題，可能有不同的緣由，讓我們一個一個來看。大多數(shù)人通常假設(shè)保存時間的漂移是平衡問題。假如你在使用未修飾的硅膠柱做正相色譜，那么這是最可能發(fā)生的問題。正相色譜的保存時間簡單受到硅膠外表吸附的水含量的影響，然后是溶解在流淌相中的水的作用。因為水在正己烷或二氯甲烷等試劑中的溶解度特別低，所以色譜柱平衡需要很長時間。我曾見過使用特別枯燥的正己烷平衡一星期后保存時間仍舊漂移的狀況，所以建議避開使用特別枯燥的試劑。通常解決硅膠和水的平衡問題的方法就是使用與

2、水“半飽和的試劑。制備方法是把1體積的疏水試劑用水飽和后，再與相同體積的“枯燥試劑混合。這個方法可以極大的加快平衡時間。 在反相色譜中，平衡通常會很快。幾個510柱體積的流淌相通常就足夠平衡了，但這也不是全部狀況。值得留意的是在離子對色譜中，使用離子對試劑平衡色譜柱。典型的離子對試劑使用濃度在25個umol/l或者更少，它們吸附在反相色譜柱填料外表，外表濃度在0.5-2 mmol/m2。1根250*4.6mm的色譜柱有大約3g外表積330 m2/g的填料，這意味著一根色譜柱有大約1000 m2的外表積，完全平衡需要2mol的濃度2 umol/l的試劑，這雖然是極端狀況，但假如用幾百毫升的流淌相

3、去平衡色譜柱也是很正常的。因此在保存色譜柱時，用有機(jī)溶劑代替離子對試劑保存過夜是不明智的，因為離子對試劑被去除后，第二天你又要花很長時間去平衡。 q：全部這些現(xiàn)象都有共同的因素：流淌相含有低濃度的強(qiáng)吸附試劑。這是保存時間漂移最常見的緣由么？ a：我想就是那樣的，其它的現(xiàn)象不多見。但是強(qiáng)吸附劑也可能源于樣品。這種狀況下它們在重復(fù)進(jìn)樣中會漸漸累積，從而轉(zhuǎn)變色譜柱的化學(xué)性質(zhì)。舉個例子，藥品中的賦形劑。 我們可以通過觀看保存時間改變的速率來得知雜質(zhì)是從流淌相中引入還是從樣品中引入。 試驗如下： 1 進(jìn)樣幾次，例如，4次一共1小時進(jìn)樣。 2 走相同量的流淌相，不進(jìn)樣。 3 重復(fù)第一步 4 做一個關(guān)系圖，

4、保存時間 a. 對時間的關(guān)系 b. 對進(jìn)樣次數(shù)的關(guān)系 假如第一個圖得到一條平滑的曲線，那么流淌相是引入雜質(zhì)的緣由。假如第二個圖得到一條平滑的曲線，那么雜質(zhì)的來源是樣品。 q：還是其它保存時間漂移的緣由么？ a：是的，假如流淌相的組成隨著時間轉(zhuǎn)變，那么就有可能導(dǎo)致保存時間漂移。假如你沒有使用儀器的在線混合裝置，那么流淌相的組分可能在緩慢的蒸發(fā)。當(dāng)你用氦氣流噴射流淌相的方法趕氣泡的時候，你必需掌握噴射的速率最小。 此外，一個常常被忽視的緣由就是鍵合相的水解。制造商通常會指定一個ph范圍，超出范圍可能導(dǎo)致鍵合相“不穩(wěn)定。這個范圍通常是ph2-8或9。然而，人們會有許多緣由不 液相色譜故障排查 得不接

5、近這個極限。這不是一個明顯的分界線，因為水解也會取決于其他因素如溫度或有機(jī)溶劑，但是緩慢的水解會在這個極限上發(fā)生。 要保持固定相的水解穩(wěn)定性，最好是在中性ph值，低溫下3-5左右，等度條件好于梯度條件。當(dāng)?shù)榷葪l件下發(fā)生水解時，鍵合相通常會自我吸附，達(dá)成一種區(qū)域平衡。然而，在使用高濃度的有機(jī)溶劑時，例如在梯度洗脫或者沖洗色譜柱的過程中，這種平衡被打破，鍵合相見被沖洗杰出譜柱。 q：我會記住的。溫度能導(dǎo)致保存時間漂移么？ a：是的，溫度通常是有可能的。假如你的樣品是自動分析過夜或者過了周末的，那么你得到的保存時間漂移的結(jié)果可能和試驗室溫度改變有關(guān)。在很多地方，室溫的設(shè)置在晚上或者周末通常是不一樣的。通常來講，1的改變導(dǎo)致保存時間漂移大約1%到2%。這個可以聯(lián)系最終一個導(dǎo)致保存時間漂移的緣由色譜柱返壓的增加。增加的返壓說明色譜柱被污染，但是僅僅是污染的塞板還足以影響保存時間。壓力會讓流淌相通過塞板時產(chǎn)生比正常狀況大的摩擦，導(dǎo)致流淌相受熱，這個增加的溫度會導(dǎo)致保存時間的漂移。 此外還有其他的一些緣由，但是極少發(fā)生。 在反相色譜上發(fā)生平衡很慢的現(xiàn)象是由于流淌相中有機(jī)溶劑比例太少。高鍵合覆蓋率、“完全封端的c18沒有被流淌相良好的“潮濕。這會導(dǎo)致一些現(xiàn)象，如流淌相和固定相失去聯(lián)系造成的“疏水塌陷，這是由于固定相之間的互相吸附，從而導(dǎo)致可用于和樣品互相作用的外表積的削