免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念教學(xué)ppt課件

1、 第一節(jié) 免疫標(biāo)志技術(shù)的根本概念一、免疫標(biāo)志與標(biāo)志免疫的概念二、常用的免疫標(biāo)志物質(zhì) 免疫標(biāo)志與標(biāo)志免疫免疫標(biāo)志技術(shù)：免疫標(biāo)志技術(shù)：標(biāo)志物與免疫活性物質(zhì)的聯(lián)接技術(shù)標(biāo)志物與免疫活性物質(zhì)的聯(lián)接技術(shù)標(biāo)志免疫技術(shù)：標(biāo)志免疫技術(shù)：以標(biāo)志免疫物質(zhì)檢測相應(yīng)靶物質(zhì)的技術(shù)以標(biāo)志免疫物質(zhì)檢測相應(yīng)靶物質(zhì)的技術(shù)常用的免疫標(biāo)志物質(zhì)常用的免疫標(biāo)志物質(zhì)類別 標(biāo)志物 用途熒光素 FITC、RB200、TRITC 免疫組化 鑭系元素螯合物 免疫分析測定放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析測定 125I、131I酶 HRP、AP 免疫組化 免疫分析測定化學(xué)發(fā)光物 Luminol、lucigenin 免疫分析測定金屬

2、顆粒 膠體金、鐵蛋白 免疫組化 免疫分析測定 第二節(jié) 酶標(biāo)志技術(shù)一、常用標(biāo)志方法二、標(biāo)志免疫物的分別與鑒定常用標(biāo)志方法常用標(biāo)志方法1、常用酶 辣根過氧化物酶HRP 堿性磷酸酶AP2、標(biāo)志方法 戊二醛交聯(lián)法 過碘酸鹽氧化法戊二醛交聯(lián)法戊二醛交聯(lián)法 (一步法一步法抗體-NH2 + COH-CH23-COH + NH2-酶抗體-NH2 =CH-CH23-CH = NH2-酶抗體-NH2 =CH-CH23-CH = NH2-抗體酶-NH2 =CH-CH23-CH = NH2-酶戊二醛交聯(lián)法二步法戊二醛交聯(lián)法二步法COH-CH23-COH + NH2-酶抗體-NH2 + CHO-CH23-CH = NH

3、2-酶抗體-NH2 =CH-CH23-CH = NH2-酶過碘酸鹽氧化法過碘酸鹽氧化法OOOOOONaIO4OOOHOOOHOH+ NH2抗體OOONN抗體抗體H2ON抗體NaBH4Schiff堿酶-五炭糖環(huán)標(biāo)志免疫物的分別與鑒定標(biāo)志免疫物的分別與鑒定1、分別 目的：去除游離酶 方法：鹽析、柱層析2、鑒定 抗體活性 酶活性 標(biāo)志物純度 第三節(jié) 熒光標(biāo)志技術(shù)一、常用標(biāo)志方法二、標(biāo)志免疫物的分別與純化常用標(biāo)志方法常用標(biāo)志方法1、熒光素的概念2、生物標(biāo)志熒光素的要求3、常用熒光素標(biāo)志原理與方法 生物標(biāo)志熒光素的要求生物標(biāo)志熒光素的要求1、具有與蛋白質(zhì)共價結(jié)合的才干2、熒光效率高3、能與背景物質(zhì)構(gòu)成鮮

4、明對比4、不影響蛋白質(zhì)的生物、免疫活性5、標(biāo)志方法平安、簡便6、標(biāo)志物穩(wěn)定，易保管FITCFITC的標(biāo)志原理與方法的標(biāo)志原理與方法熒光素-N=C=S + NH2-抗體熒光素-N-C-N-抗體H S HRB200RB200的標(biāo)志原理與方法的標(biāo)志原理與方法熒光素-SO3Na + PCl5熒光素-SO2 Cl + PCl3 + NaCl熒光素-SO2 Cl + NH2-抗體 熒光素-SO2 -NH-抗體 + HCl 標(biāo)志免疫物的分別與鑒定標(biāo)志免疫物的分別與鑒定1、分別 目的：去除游離熒光素 方法：柱層析2、鑒定 抗體活性 標(biāo)志物結(jié)合度 F/P比值的應(yīng)意圖義 第四節(jié) 放射性核素標(biāo)志技術(shù)一、常用標(biāo)志方法

5、二、標(biāo)志免疫物的分別與純化常用標(biāo)志方法常用標(biāo)志方法1、常用放射性核素2、125I 的標(biāo)志方法 直接法氯胺T法 間接法銜接法直接法氯胺直接法氯胺T T法法OH-NHCHONH-CH2OH-NHCHONH-CH2Na125I 4。C125I氯胺T間接法銜接法間接法銜接法CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2H O O=C-C-CH2CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2H O O=C-C-CH2+ Na125I氯胺T125INSHPP間接法銜接法間接法銜接法CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2H O O=C-C-CH2CH2OHH-C-C-N-蛋白質(zhì)H O H+ NH2-蛋白質(zhì)125

6、I125I標(biāo)志免疫物的分別與鑒定標(biāo)志免疫物的分別與鑒定1、分別 目的：去除游離放射性核素 方法：柱層析2、鑒定 游離放射性核素含量 免疫活性 比放射性mCi/mg應(yīng)意圖義本章小結(jié)本章小結(jié)1、免疫標(biāo)志技術(shù)的概念2、常用免疫標(biāo)志物質(zhì)及其標(biāo)志方法3、標(biāo)志免疫物質(zhì)的分別與鑒定思索題思索題1、何謂免疫標(biāo)志技術(shù)？2、常用的免疫標(biāo)志物質(zhì)有哪些？3、酶標(biāo)志的主要方法有哪些？4、F/P比值的實(shí)意圖義如何？5、何謂比放射性？有何意義？ 第一節(jié) 標(biāo)志免疫技術(shù)的分類一、按指示標(biāo)志物質(zhì)劃分的類型二、按測定方式劃分的類型三、按測定用途劃分的類型1、酶免疫技術(shù)2、熒光免疫技術(shù)3、放射免疫技術(shù)4、發(fā)光免疫技術(shù)5、金免疫技術(shù)按

7、指示標(biāo)志物質(zhì)劃分的類型按指示標(biāo)志物質(zhì)劃分的類型1、均相型homogenous2、非均相型heterogeneous按測定方式劃分的類型按測定方式劃分的類型均相型均相型homogenous非均相型非均相型heterogeneous雙標(biāo)志均相熒光免疫測定雙標(biāo)志均相熒光免疫測定酶擴(kuò)展免疫測定技術(shù)酶擴(kuò)展免疫測定技術(shù)1、免疫測定技術(shù)2、免疫組化技術(shù)按測定用途劃分的類型按測定用途劃分的類型 第二節(jié) 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)一、ELISA技術(shù)的原理與方法二、 ELISA技術(shù)的操作留意要點(diǎn)ELISA技術(shù)的原理與方法技術(shù)的原理與方法間接法 夾心法 競爭法間接法間接法夾心法夾心法競爭法競爭法酶標(biāo)儀酶標(biāo)儀酶標(biāo)儀酶標(biāo)儀ELI

8、SA技術(shù)的操作留意要點(diǎn)技術(shù)的操作留意要點(diǎn)試劑器材操作環(huán)節(jié) 適宜任務(wù)濃度 第三節(jié) 熒光抗體技術(shù)一、熒光抗體技術(shù)的原理與方法二、熒光抗體技術(shù)的操作留意要點(diǎn)熒光抗體技術(shù)的原理與方法熒光抗體技術(shù)的原理與方法直接法間接法補(bǔ)體法雙標(biāo)志法 直接法間接法補(bǔ)體法雙標(biāo)志法熒光抗體技術(shù)的操作留意要點(diǎn)熒光抗體技術(shù)的操作留意要點(diǎn)標(biāo)本處置染色操作 結(jié)果觀測熒光顯微鏡熒光顯微鏡熒光顯微鏡運(yùn)用原理熒光顯微鏡運(yùn)用原理激發(fā)濾片BG吸收濾片OG標(biāo)本FITC吸收光峰值：490-495nm FITC發(fā)射光峰值：520-530nmBG：325-500 OG：410-650激發(fā)濾片激發(fā)濾片吸收濾片吸收濾片熒光濾鏡運(yùn)用原理熒光濾鏡運(yùn)用原理 第四節(jié) 放射免疫測定技術(shù)一、放射免疫測定技術(shù)的原理與方法二、放射免疫測定技術(shù)的操作留意要點(diǎn)結(jié)合相游離相放射免疫分析法的原理與方法放射免疫分析法的原理與方法1 2 5 10 20 50 10040302010未標(biāo)志抗原含量未標(biāo)志抗原含量結(jié)結(jié)合、合、游游離離相相放放射射性性含含量量比比值值液閃儀液閃儀計數(shù)器計數(shù)器放射免疫測定技術(shù)的操作留意要點(diǎn)放射免疫測定技術(shù)的操作留意要點(diǎn)反響的溫度與時間結(jié)合相與游離相的分別免疫標(biāo)志技術(shù)的比較免疫標(biāo)志技術(shù)的比較 FIA ELISA RIA敏感性 較低 高 高特異性 高 高 高反復(fù)性 差 好 好檢測對象