影響肉羊胚胎移植效果的因素分析

1、影響肉羊胚胎移植效果的因素分析郭憲，程勝利，楊博輝，焦碩，馮瑞林（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所，甘肅蘭州730050）摘要：胚胎移植技術(shù)是肉羊繁殖中的一項(xiàng)高新技術(shù)。本文從實(shí)驗(yàn)記錄、實(shí)驗(yàn)材料、環(huán)境因素、母體因素、人工授精、胚胎因素、操作者技術(shù)水平、移植后飼養(yǎng)管理等方面分析討論肉羊胚胎移植中的影響因素，旨在分析肉羊胚胎移植中的質(zhì)量控制點(diǎn)，為提高肉羊胚胎移植效果提供技術(shù)參考。關(guān)鍵詞：肉羊；胚胎移植；質(zhì)量控制羊胚胎移植（embryotransfer）技術(shù)是指對生產(chǎn)性能優(yōu)良和遺傳性穩(wěn)定的母羊經(jīng)過超數(shù)排卵處理后，將早期胚胎從體內(nèi)取出，分別移植到受體母羊子宮內(nèi)，使之產(chǎn)出優(yōu)良后代的技術(shù)。胚胎移植技術(shù)是快

2、速擴(kuò)繁良種家畜的有效途經(jīng)，隨著胚胎工程技術(shù)的深入研究和商業(yè)化的推廣應(yīng)用，肉羊胚胎移植技術(shù)在不斷完善和成熟，移植的效率和水平也在不斷提高。但在胚胎移植的過程中，存在著多種因素直接或間接影響到胚胎移植的效果，以致影響胚胎移植最終的效率。本文擬從實(shí)驗(yàn)記錄、實(shí)驗(yàn)材料、環(huán)境因素、母體因素、人工授精、胚胎因素、操作作者技術(shù)水平、移植后飼養(yǎng)管理等方面分析影響肉羊胚胎移植效果的因素，旨在為提高肉羊胚胎移植效率提供技術(shù)參考。1實(shí)驗(yàn)記錄信息采集是質(zhì)量控制分析的基礎(chǔ)。在肉羊胚胎移植中，首先要熟知胚胎移植的各個環(huán)節(jié)和程序，合理設(shè)計生產(chǎn)方案，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?guī)范實(shí)驗(yàn)操作。羊胚胎移植的主要技術(shù)程序包括供、受體羊選擇，供、受

3、體羊同期發(fā)情處理，超數(shù)排卵，供、受體羊發(fā)情鑒定，配種或人工授精，胚胎的采集與鑒定，胚胎的移植與冷凍等。在肉羊胚胎移植的整個程序中，做好實(shí)驗(yàn)記錄是關(guān)鍵。實(shí)驗(yàn)記錄要全面、翔實(shí)，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)結(jié)果的分析來源于對記錄的研究和分析。無論實(shí)驗(yàn)成功與失敗，都要對整個實(shí)驗(yàn)程序作出全面的分析，并總結(jié)經(jīng)驗(yàn)供下次實(shí)驗(yàn)參考與借鑒。對發(fā)情鑒定、人工授精、胚胎評定、胚胎移植等程序做出記錄，是保證胚胎質(zhì)量、提高羊胚胎移植效率的重要信息。2實(shí)驗(yàn)材料2.1激素超數(shù)排卵處理時，激素的劑量受母羊的年齡、胎次、子宮內(nèi)環(huán)境、營養(yǎng)水平、體重等多種因素的影響。同時激素的種類、稀釋、貯存、注射部位、注射方法等都對超數(shù)排卵效果有一定的影響。經(jīng)產(chǎn)肉羊

4、、初產(chǎn)肉羊的激素處理，應(yīng)區(qū)別對待，根據(jù)種類和體重適量調(diào)整。2.2試劑試劑質(zhì)量的保證是羊胚胎移植質(zhì)量控制的前提。胚胎移植中，培養(yǎng)液效果的好壞受營養(yǎng)成分、生產(chǎn)批次等各方面因素的影響。水是培養(yǎng)液的主要成分，容易出現(xiàn)污染，如溶解有離子化或非離子化的固體和氣體、特殊物質(zhì)、微生物和熱原質(zhì)，故使用無菌、超純的水至關(guān)重要。純化水的基本方法是玻璃蒸餾、去離子、過濾、逆滲透、吸收和超濾，應(yīng)經(jīng)常進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)控檢測以保證水的純度。對水純度檢測最令人信賴的方法是檢測電導(dǎo)性。水的質(zhì)量和高度無菌條件是配制試劑的必須條件，用0.2m濾器可以去掉所有細(xì)菌。培養(yǎng)液中另一主要成分是血清，血清成分十分復(fù)雜，不同批次的血清成分有差異。

5、在實(shí)驗(yàn)時需對不同批次的血清進(jìn)行檢測，以選擇最好的血清。在羊胚胎移植中，配制的培養(yǎng)液至少還需要檢查ph值和滲透壓。滲透壓可以用滲透壓計來測量或者通過觀察紅細(xì)胞的收縮和膨脹來粗略的判定。ph值可通過ph計或ph試紙來測定。無菌性，可在37過夜培養(yǎng)樣本并在第2天檢查微生物來判定。毒性，可通過培養(yǎng)小鼠的2-細(xì)胞胚胎，檢查是否能支持其發(fā)育來確定。如果使用石蠟油，同樣要檢查它的無菌性和毒性。試劑和藥品的貯存和放置，應(yīng)嚴(yán)格區(qū)分和合理保管，同時溶液的配制要準(zhǔn)確并保持無菌，避免發(fā)生稱量錯誤。每一批培養(yǎng)液都要貼上標(biāo)簽并冷凍儲藏，直到產(chǎn)生一定的受胎率。2.3設(shè)備和耗材設(shè)備和耗材應(yīng)無毒無菌或正確使用。實(shí)驗(yàn)室保持干凈、

6、整潔無菌條件的同時，培養(yǎng)箱、離心機(jī)、電子天平、超凈工作臺、顯微鏡、冰箱等常用儀器設(shè)備和過濾除菌裝置、手術(shù)器械、培養(yǎng)器皿、移液器等以及消耗性材料都應(yīng)保持高度的無菌條件。在準(zhǔn)備培養(yǎng)液時，將有關(guān)玻璃容器充分而仔細(xì)地沖洗干凈并作滅菌處理。3環(huán)境因素由于受光照等因素的影響，肉羊大多數(shù)是季節(jié)性發(fā)情。溫度、濕度對肉羊影響較大，高溫、高濕對肉羊造成熱應(yīng)激，受熱應(yīng)激的肉羊采食量下降，能量負(fù)平衡，黃體酮水平增高，影響發(fā)情期的lh分泌，表現(xiàn)為肉羊不發(fā)情，受孕率下降，出現(xiàn)異常胚胎、胚胎早期死亡和流產(chǎn)，影響同期發(fā)情和超數(shù)排卵的成功。因此，肉羊的胚胎移植要盡可能的接近其自然繁殖的規(guī)律，最好避開59月份的高溫季節(jié)。當(dāng)管理或

7、氣候條件不是很理想時，定期檢測血液中的孕激素很重要。例如在超數(shù)排卵和胚胎移植前監(jiān)控供體和受體體內(nèi)的孕激素的基礎(chǔ)水平，就可以知道熱應(yīng)激和其他因素的應(yīng)激對發(fā)情效率的影響，同時也可以獲取孕激素正常變化曲線。為適時進(jìn)行超數(shù)排卵和胚胎移植提供依據(jù)，這樣有助于提高所獲胚胎的質(zhì)量和移植的受胎率。4母體因素4.1供體供體母羊的準(zhǔn)備是胚胎移植的一個重要環(huán)節(jié)，供體母羊品種質(zhì)量的優(yōu)劣會嚴(yán)重影響胚胎移植的實(shí)際效果。供體羊的生產(chǎn)性能要突出，品質(zhì)優(yōu)良，這樣才能體現(xiàn)胚胎移植的優(yōu)越性。同時，要求供體羊體況適中，體質(zhì)健康，對化學(xué)物質(zhì)反應(yīng)敏感，發(fā)情周期和生殖機(jī)能正常，否則會影響超數(shù)排卵的效果。4.2受體羊胚胎移植中，受體的狀況也

8、特別重要。發(fā)情周期和生殖機(jī)能正常，對化學(xué)物質(zhì)反應(yīng)敏感，體況適中，體質(zhì)健康，母性和泌乳性能好等都是受體羊應(yīng)具備的基本條件。受體羊的健康狀況可通過研究發(fā)情間隔和觀察生殖道生理變化來判定。選擇受體時，應(yīng)充分考慮受體的年齡、胎次、性情、體型結(jié)構(gòu)、營養(yǎng)狀況、健康狀況等。5人工授精保證精液的品質(zhì)是羊胚胎移植質(zhì)量控制的保障。供體配種的公羊應(yīng)與母羊品種相一致，應(yīng)具有優(yōu)良的遺傳特性和較高的育種價值，經(jīng)血液檢查和檢疫證明確無布氏桿菌病、結(jié)核、副結(jié)核、藍(lán)舌病、傳染性鼻氣管炎等疫病，身體健康狀況良好，生殖系統(tǒng)機(jī)能正常，性欲強(qiáng)，精液品質(zhì)好，膘情適中。保證配種或授精用精液的品質(zhì)，是提高受胎率的關(guān)鍵。精液處理涉及精液的品質(zhì)

9、檢查、稀釋、保存等過程，精液處理方法不當(dāng)會降低公羊的精液品質(zhì)。精子活力是一項(xiàng)十分重要的指標(biāo)，采集的原精液、稀釋后的精液、經(jīng)保存后待輸精的精液都要進(jìn)行嚴(yán)格的檢查，即精子活力的鑒定。冷凍精液用于人工授精時，應(yīng)從每一批精液中抽出一個細(xì)管，進(jìn)行精子的活力檢查。正確解凍精液，防止污染。同時，在正確位置進(jìn)行人工授精。影響受精的因素有輸精的時間、次數(shù)、部位以及精液的質(zhì)量等。在肉羊的人工授精實(shí)際工作中，由于母羊發(fā)情持續(xù)時間短，加上很難準(zhǔn)確掌握發(fā)情開始時間，所以一般是在通過試情公羊找出發(fā)情母羊的當(dāng)天，分別在上下午各輸配1次，間隔時間以812h為宜。如果第二天仍然繼續(xù)發(fā)情，則繼續(xù)輸配，直到停止發(fā)情為止。精子的活力

10、也是影響受精率的主要原因，因此在人工授精前一定要抽檢精子活力，以保證正常受精。6胚胎因素收集到的胚胎不應(yīng)受到任何不良因素（物理、化學(xué)、微生物等）的影響而降低活力。胚胎冷凍、解凍程序的規(guī)范化，冷凍液、解凍液的合理選擇，對保證胚胎的質(zhì)量至關(guān)重要。胚胎質(zhì)量的檢測和正確評價是胚胎移植或冷凍保存成功的關(guān)鍵，胚胎移植中生產(chǎn)的胚胎需經(jīng)專業(yè)人員的鑒定，應(yīng)考慮到胚胎的日齡，結(jié)合它的發(fā)育狀態(tài)，評定等級，然后確定胚胎的用途，移植或保存。7操作者技術(shù)水平肉羊胚胎移植中，應(yīng)不斷提高操作者素質(zhì)。操作者或工作人員需有一定的理論知識和技術(shù)水平，思想態(tài)度應(yīng)具有專業(yè)素質(zhì)，同時始終要有無菌意識。在檢胚過程中，胚胎的丟失應(yīng)降到最低。通過清洗器械并在顯微鏡下檢查胚胎的有無來確定是否移植了胚胎。手術(shù)部位易發(fā)生粘連，操作者需具備相當(dāng)高的技術(shù)水平。技術(shù)人員的水平可由于能力、態(tài)度、訓(xùn)練程度以及其他因素而變化，工作人員的差異可通過比較手術(shù)移植的受胎率來確定，如果存在顯著的、經(jīng)常性的差異，就要對其進(jìn)行再培訓(xùn)，提高其專業(yè)素質(zhì)。8移植后飼養(yǎng)管理妊娠前